JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 2:29 dk. • March 31st, 2026
Parafin filmi üzerine bir damla bakteriyel patojeni alın.
Bakteri damlasına bir Drosophila larvası yerleştirin.
Stereomikroskop altında, tungsten iğneyle larvayı delin ve kutikülüni, koruyucu dış tabakasını ve alttaki epidermisi delin.
Bu, bakterilerin larva hemolimfi, yani dolaşım sıvısına girmesini sağlar.
Enfekte larvaları, maya hamuru olan oluklu, besin açısından zengin bir agar tabakasına aktarın.
Oluklar larva göçünü kolaylaştırır ve susuz kalmayı önler.
Kalan bakteriyel süspansiyonu tabakaya ekleyin ve parafin filmiyle kapatın.
Larva yaşamını korumak için plakayı nemli bir odada kuluçka edin.
Larva hemolimfin içinde, hemosit adı verilen bağışıklık hücreleri bakteriyi tespit eder ve fagositozu başlatır.
Bazı bakteriler fagozom-lizozom birleşmesinden sonra yok edilirken, diğerleri füzyonu geciktirerek veya hücre içi strese direnç göstererek hemositlerde çoğalır ve bu da kalıcı hücre içi enfeksiyona yol açar.
Enfekte Drosophila larvae artık konak-patojen etkileşim çalışmalarına hazırdır.
Maya macunu üzüm suyu agar tabağına koyun. Larvaların kurulmasını önlemek için göç edebileceği agarda ince bir kesim yapın.
0.001 milimetrelik sivri bir volfram iğnesini parafin filmi kullanarak tutucu penslerle birleştirin. 50 mikrolitre yüksek titrli, mCherry ekspresyonu C pipet yapın. Burnetii parafin filmine stereo mikroskop altında yerleştirilir ve larvaları bakteri havuzuna yerleştirir. Larvaları Tungsten iğnesi ile del.
Larvaları bir agar plakasına aktarın. Kalan patojen ortamını agar plakasına aktarın ve plakayı parafin filmiyle mühürleyin. Larvaları tabakta nemli havada tutun, enfeksiyon sonrası istenen zamana kadar. C'yi bırak. Burnetii enfekte larvaları 24 saat boyunca tabakta bıraktı.