Patojen Enfekte Drosophila Hemositlerinin Yüksek Çözünürlüklü Konfokal Görüntülemesi

Sabit hemositler içeren bir slaytı konfokal mikroskop aşamasına yerleştirin.

Bu hemositler Drosophila melanogaster larvalarından elde edilir ve bakteriyel bir patojenle enfekte edilmiştir.

Hemositler yeşil floresan proteinle etiketlenmiş, çekirdekleri mavi bir boyayla boyanmış ve bakteriler görselleştirme için kırmızı floresan protein ifade eder.

Mikroskobu üç floroforu tespit edecek şekilde yapılandırarak hücresel bölmeleri ve patojenleri aynı anda takip edin.

Yüksek çözünürlüklü bir hedef kullanarak, alt hücresel detayları yakalamak için hedef hemosite odaklanın.

Uygun örnek poziyetini sağlamak ve sinyal netliğini optimize etmek için lazer gücünü ve dedektör kazanımlarını ayarlayın.

Pozlama seviyesinin uygun olduğundan emin olmak için birden fazla Z-düzlemini taran.

Üstteki ve alt Z pozisyonlarını tüm hemositin görüntülenmesi için ayarlayın.

İlgilendiğiniz hemositi izole etmek ve yüksek çözünürlüklü bir 3D görüntü elde etmek için taramalı zoom kullanın.

Bu yöntem, hemosit içindeki patojenin lokalizasyonunun görselleştirilmesini sağlar.

DAPI, EGFP ve mCherry'nin üç renkli görüntülemesi için konfokal mikroskobu yapılandırın.

Örneği mikroskopa yerleştirin ve 63X/1.4 sayısal diyafram hedefi kul