JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiyoloji
0 görüntüleme • 2:44 dk • March 31st, 2026
Epitel ve kadeh benzeri hücrelerin ortak kültürünü içeren bir Transwell ekiyle başlayın.
Epitel hücreleri sıkı birleşimler oluştururken, kadeh benzeri hücreler mukus üreterek in vivo bağırsak epitel bariyerini taklit eder.
Ağız bakteri topluluğunun, ince bağırsak sindirimini taklit etmek için simüle edilmiş bağırsak sıvısıyla tedavi edilmiş bir süspansiyon alın.
Üst odadaki ortamı bakteriyel süspansiyon ile değiştirin.
Bakteriyel yapışma ve içselleşmeyi kolaylaştırmak için sallama ile kuluçka yapın.
Üst odadan toplanan ve yapışmayan bakteriler içeren ortamı toplayarak sonraki canlılık testleri için yapılabilirlik testleri yapılacaktır.
Mukus çözünen bir çözelti ekleyin ve kuluçka için, mukusu çözerek yapışkan bakterileri serbest bırakın.
Bakteriyel canlılık ve yapışma analizi için çözeltiyi toplayın.
Hücreleri tampon ile yıkayın ve onları çıkarmak için deterjan ekleyin.
Hücre askısını topla.
Süspansiyonu girdabla hücreleri lizize etmek ve içselleştirilmiş bakterileri serbest bırakmak için kullanın.
Süpernatant ve hücresel kalıntıları ayrı ayrı santrifüj ile toplayarak daha fazla analiz yapılabilir.
Metin protokolüne göre ince bağırsak sindiriminin hücre yoğunluğunu yıkayıp ayarlayın, transwell sisteminden apikal ortamı çıkarın ve 1,5 mililitre bakteriyel süspansiyon eklenin.
Sistemi genel hücre kültürü koşullarında 2 saat boyunca birlikte kültürlendirir. HB29-MTX tarafından üretilen mukusun çözünürlüğünü sağlamak ve yapışkan bakterileri geri kazanmak için HBSS'ye 0,5 mililitre 10 milimolar n-asetilsistein ekleyin.
Plakaları 37 derece Celsius'ta 1 saat boyunca çaltma altında kuluçka yapın. NAC-HBSS'yi mikrosantrifüj tüpünde geri kazanın ve hücreleri iki kez yıkamak için 1 mililitre DPBS kullanın. Monolayerların üzerine 0,5 mililitre %0,5 triton X-100 ekleyin ve pipetle hücreleri bozun.
Sonra sıvıyı hızla girdabda 1 dakika geri kazanın. Deterjanla bakteri hücrelerine zarar vermemek için hız çok önemlidir. Örnekleri metin protokolüne göre analiz edin.