Sıçanlarda Akut Miyokard Enfarktüsü

Bu prosedürün genel amacı, miyokardın kardiyak iskemiye verdiği anlık yanıt ve ardından gelişen reperfüzyon hasarı ile ilişkili kardiyak sinyalizasyon mekanizmalarının incelenmesi için sıçanlarda akut miyokard enfarktüsü modellemektedir. Bu yanıtlar arasında enfarkt boyutu, risk altındaki alan ve hücre ölümü yer almaktadır. İlk adım, göğsün sol tarafındaki dördüncü interkostal boşlukta küçük bir insizyon yaparak sol ventrikülü açığa çıkarmak ve izole edilen kaburgaları ayırmaktır.

Sol ön inen arter veya LAD, iskemik dönemi takiben 30 dakika boyunca geçici olarak bağlanır. LAD bağlaması, dört saatlik bir reperfüzyon süresinin ardından kalp reperfüzyonuna izin verecek şekilde çözülür. Kalp çıkarılmadan ve infarktlı miyokard alanının risk altındaki ve risk altında olmayan kısımlarının boyutları incelenmeden önce LAD bir kez daha bağlanır.

Nihayetinde, enfarktüs geçirmiş miyokardın histolojik değerlendirmesinden elde edilen sonuçlar, kalp yetmezliği tedavisini hedefleyen terapötik stratejilerin araştırılmasında kullanılabilir. Bu teknik, iskemiye verilen anlık tepkilerle ilişkili sinyal mekanizmalarının yanı sıra enfarkt boyutu, risk altındaki alan ve hücre ölümü gibi belirgin hasarlar hakkında bilgi sağlayabilir.

Bu model, iskemik kalp hastalığının tedavisine yönelik yeni terapötik stratejileri değerlendirmek için kullanılabilir. Prosedürü, Texas Tıp Merkezi'nin kurumsal üyesi olan Houston Üniversitesi Farmakolojik ve Eczacılık Bilimleri Bölümü'nden Dr. Bradley McConnell'in laboratuvarından kıdemli bir araştırma görevlisi ve kıdemli doktora sonrası araştırmacı X gerçekleştirecektir. Cerrahi prosedür başlamadan önce, operasyon yüzeyi %70 etanol ile dezenfekte edilmelidir.

Her bir cerrahi işlemden önce tüm cerrahi aletleri sıcak boncuk sterilizatör ile sterilize edin. Gerekli aletler arasında iki adet cerrahi makas, bir adet forseps, bir adet eğri forseps, iki adet iğne tutucu ve bir göğüs ekartörü yer almaktadır. Homeotermik battaniye sisteminin sıcaklığını, hayvanın vücut sıcaklığını 37 ± 1 °C'de tutacak şekilde ayarlayın.

İnfarkt boyutu, oklüzyon süresinin yanı sıra vücut sıcaklığına da bağlıdır. Kanamayı kontrol altına almak için pamuklu gaz ve aplikatörleri hazır bulundurun. Bu çalışmalarda yalnızca görsel inceleme, kalp atış hızı, solunum hızı, vücut sıcaklığı ve vücut ağırlığı ölçümleriyle yapılan fiziksel muayeneyi geçen hayvanlar kullanılır.

Ameliyatın bir gün öncesinde, cerrahi işlem uygulanacak sağlıklı hayvanların ağırlıklarını ve tanımlayıcı özelliklerini kaydedin. Bir doz buprenorfin uygulayın. Tüm prosedür boyunca maske, önlük ve eldiven giyilmeli ve her bir cerrahi işlem arasında eldivenler değiştirilmelidir.

Başlamak için bir sıçanı anestezi altına alın ve boyun ile göğüs bölgelerindeki tüyleri tamamen tıraş ederek cerrahi alanı hazırlayın. Tıraş edilen bölgeleri Betadine solüsyonu ve ardından %70 etanol ile dezenfekte edin. Bu işlemi üç kez tekrarlayın.

Vücut sıcaklığının uygun şekilde korunması için hayvanı homeotermik bir battaniye sistemine yerleştirin. Hayvan sağ yanına yatırılmalıdır. Polietilen bir tüpün uçlarının eğimli hale getirilmesi, laringse yerleştirmeyi kolaylaştırır.

Cerrahi stereo mikroskop yardımıyla endotrakeal tüpü yerleştirin. Gerektiğinde dili nazikçe manipüle edin ve trakeyi görüş alanında tutun. Endotrakeal tüpü, dakikada 80 soluk ve vücut ağırlığının 100 gramı başına 1.2 mililitre tidal volümle çalışan bir ventilatöre bağlayın.

Mekanik ventilasyon sağlandıktan sonra, sadece cerrahi alanı açıkta bırakacak şekilde sıçanın üzerine steril bir örtü yerleştirin. Düzenli solunum sağlandığında, göğsü sol dördüncü interkostal aralıktan açın. Kanama riskini azaltmak için dokuların kesilme derecesini minimumda tutun.

Bir göğüs ekartörünü dördüncü interkostal boşluğa yerleştirin ve sol ventrikülün veya LV'nin açığa çıkması için kaburgaları ayırın; akciğerin zarar görmemesi için dikkatli olunmalıdır. Ardından, perikardı yerinde bırakacak şekilde açın. Mümkünse, cerrahi stereo mikroskop kullanarak proksimal sol ön inen veya LAD arterini tanımlayın.

İskemi oluşturmak için LAD'yi geçici olarak ligatleyin veya kayan bir düğümle bağlayın. Kalbin kendisini dışarı çıkarmamaya dikkat edin. LAD ligasyonu, süturun distalindeki miyokard dokusunun ağarmasının ve iskemik dönem boyunca anterior duvarın disfonksiyonunun gözlemlenmesiyle doğrulanır.

30 dakikalık bir iskemik dönemin ardından, LAD etrafındaki ligatürü mikrocerrahi makasla keserek veya gevşeterek kardiyak reperfüzyonu başlatın. Reperfüzyon, miyokard dokusunun tekrar kırmızı renge dönmesi ve LAD ligasyonunun serbest bırakılmasını takiben ön duvar hareketinin kısmen geri döndüğünün gözlemlenmesiyle doğrulanır. Prosedür, LAD'nin geçici olarak ligatlanmadığı durum haricinde, sham kontrol fareleri için de aynıdır.

Göğüs ekartörünü çıkarın ve kaburgaları kesikli bir sütür paterni ile birleştirin. Kaburgalar kapatıldıktan sonra, göğüs boşluğundan hava çekerek uygun solunumu sağlamak için negatif göğüs basıncı oluşturun. Son olarak, cildi sürekli bir sütür paterni ile kapatın. Ameliyat sonrası sıçanı ısıtma pedi ve su bulunan bir kafese yerleştirin; hayvan hareket edebilir hale gelene kadar vücut sıcaklığını rektal termometre ile, solunum hızını görsel inceleme ile, kalp hızını palpasyonla ve ağrının anormal belirtilerini takip ederek izleyin.

Steril salin uygulanmalıdır. Dehidrasyon belirtileri gözlemlenirse, cerrahi işlemin hemen ardından buprenorfin uygulayın. Dört saatlik bir reperfüzyon döneminden sonra, yeniden anestezi uygulanmış sıçanı cerrahi alana geri yerleştirin.

Daha önce gösterildiği gibi sol ventrikülü görüntüleyin ve LADA'yı ikinci kez bağlayın veya sürgülü düğümü yeniden bağlayın. Sağ ventrikül boşluğuna bir mililitre %5 Evans blue ve salin enjekte edin ve iki dakika boyunca perfüzyona izin verin. Bu sürenin ardından, kalbin atmasını durdurmak için sağ ventrikül boşluğuna bir mililitre doygun potasyum klorür çözeltisi enjekte edin, kalbi hızla çıkarın ve ısıtılmış %2 agro fosfat tamponlu salin içine yerleştirin.

Agar oda sıcaklığında katılaştıktan sonra, kalbi bir ila iki milimetrelik kesitlere ayırın. Canlı miyokardı %2 trien tetra oleum klorür veya TTC ile 20 dakika boyunca boyayın ve görünen her bir kesitin görüntüsünü alın. Burada sıçan kalbinin temsili bir görüntüsü yer almaktadır.

Dört saatlik reperfüzyondan sonra, mavi renkle gösterilen alan oklüde olmayan veya risk altında bulunmayan perfüze alanı temsil eder. Kırmızı alanlar enfarktüs riski taşıyan bölgeyi, sarımsı beyaz alanlar ise risk altındaki bölge içindeki enfarktüs geçirmiş miyokardı belirtir. Bu videoyu izledikten sonra, sıçanlarda akut miyokard enfarktüsü modelinin nasıl oluşturulacağı ve insan iskemik kalp hastalığını taklit etmek için kullanılan hayvan modeli hakkında kapsamlı bir bilgi edinmiş olmanız gerekir.

Bu model; infarkt boyutu, risk alanı ve hücre ölümü gibi, iskemiyeye verilen ani yanıtların yanı sıra ilk birkaç saat içindeki reperfüzyon hasarının incelenmesi için kullanılabilir. Videoda izlediğiniz üzere, deneylerinizde başarılar dileriz.