Name: Fare Tükürük Bezi Kök Hücre İzolasyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-02-08T18:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 52 s
Description: Öğrenin fare tükürük bezi kök hücre izolasyonunu enzimatik ve mekanik sindirim kullanarak. Bu yöntem salisferlerin yetiştirilmesini sağlar ve kserostomi tedavisinde uygulama potansiyeli sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

1. Regent Hazırlık <ol><li> Tampon:% 1 (w / v) Hank dengeli tuz solüsyonu sığır serum albumin </li><li> Sulandırın enzimler. Hyaluronidase enzim: 40 mg / mL tampon içinde çözünmüş. Kollajenaz II: 23mg / mL tampon içinde çözünmüş. Her izolasyonu için taze taze hazırlanan enzim çözümleri kullanın. çözünmüş, mağaza, 4 ° C sindirimi için kullanmak kadar. </li><li> Distile su ile 50 mM kalsiyum klorür. Filtre 0.2 um gözenek boyutu filtre ile sterilize. </li><li> Fare tükürük bezi (MSG) kültür ortamı: DMEM: penisilin ile F12 (100 IU / ml), streptomisin (100 mg / ml), glutamax (2 mM), epidermal büyüme faktörü-2 (20 ng / ml), fibroblast büyüme faktörü -2 (20 ng / ml), N2 takviyesi (% 1), insülin (10 mg / ml) ve deksametazon (1 mcM). </li></ol> 2. Mekanik ve enzimatik Doku Sindirim <ol><li> Tükürük bezleri diseke tartılır. </li><li> Bezleri, küçük bir petri steril kavisli diseksiyonu makas kullanarak homojen bir hamuru içine doğrayın. </li><li> 80mg submandibular doku başına 1 ml tampon kullanarak, 14 mL tüplerde kıyılmış doku toplayın. Tampon kullanarak bazı doku temiz petri kaplarına durulayın. </li><li> 25 mcL kollajenaz II enzim çözeltisi, 25 mcL hiyalüronidaz enzim çözeltisi, 80 mg doku başına 250 mcL kalsiyum klorür çözeltisi ile 80 mg doku başına tampon başka bir 1 ml ekleyin. 2.9 T25 kolaylık sağlamak için doku kültürü şişeleri yapılabilir büyük miktarda doku ile çalışıyorsanız, 2.4 adım. </li><li> 20 dakika boyunca 37 ° C sallayarak su banyosunda inkübe edin. Tüpleri çıkarın ve tekrar doku ile iyice enzim karışımı pipet ile çiğnemek. </li><li> 20 dakika su banyosunda değiştirin. </li><li> 8 dakika boyunca, 400 xg'de santrifüj yoluyla doku toplayın. Süpernatant atın. </li><li> Her biri 80 mg doku için 2 mL tampon içinde süspanse edin ve yukarıdaki gibi enzim ve kalsiyum klorür yanı sıra tekrarlayın. , Su banyosunda sallayarak 20 dakika inkübe edin. Tüpleri çıkarın ve iyice karıştırın enzimler pipet ile çiğnemek. </li><li> Su banyosu sallayarak son 20 dakika inkübe edin. Yukarıdaki gibi santrifüj hücreleri toplayın supernatant atın. </li></ol> 3. Yıkama Adımlar <ol><li> 2 mL tampon ve enzimler serbest doku yıkamak için pipet her biri 80 mg doku tekrar </li><li> Toplamak için önceden santrifüjleyin. Süpernatant atın. </li><li> 80 mg doku başına 1 ml tampon kullanarak yıkayın tekrarlayın. Santrifüj toplamak supernatant atmak için. </li></ol> 4. Süzme <ol><li> 80 mg doku başına 1 ml tampon içinde süspanse edin doku çözüm. </li><li> 50 ml Falcon tüp üzerine yerleştirilen 100 mikron gözenek boyutlu filtre çözüm ekleyin. Filtreler bloke olabilir, kıyılmış doku çözüm kolon başına en fazla 3 mL uygulanır. Yoluyla sızmasına izin verin. Pipet filtre alt asılı filtre malzemelerini çıkarın ve süzüntü eklemek. </li><li> 50ml tüpler süzüntü 5 ml tüpler 50 mikron gözenek boyutu filtreleri almak ve uygulamak, 26 gauge iğne ile şırınga kullanın. Gerekirse kapaklarının gevşemesine yardımcı olmak, süzülmeye bırakın. </li><li> Santrifüj tüpleri önceden toplamak için. Süpernatant atın. </li></ol> 5. Kaplama ve Ortam <ol><li> Bir hacim içine tüm pelet birleştirin. Otomatik Hücre sayıcı veya haemocytometer kullanarak güvenin. </li><li> Plaka hücrelerinin yoğunluğu 0.4 x 10 6 12 plaka her hücre, ya da 2.67 x 10 6 hücre T25 doku kültürü şişesi başına. Her T25 şişeyi her iyi veya 6 ml 1 ml MSG orta ekleyin. </li><li> 37 inkübe ° C Küreler 2 gün açıkça görünür olmalıdır. </li></ol> 6. Temsilcisi Sonuçlar: 2-3 gün sonra kültür hücreleri (salispheres) küçük agrega kültürlerin belirgin olacaktır. Salispheres kültür on gün bir süre içinde boyut olarak büyümeye devam edecektir. Salispheres Temsilcisi faz kontrast mikroskobu görüntüleri Şekil 1'de gösterilmiştir. Proliferatif hücreler kök hücre ile ilişkili protein işaretleyicileri ifade, bu alanlarda en iyi günde 3-5 yazılan izolasyon arasında izole edilmiş, ve fonksiyonel, tükürük üreten asiner hücreleri farklılaşma kapasitesine sahip olabilir. <img src="/files/ftp_upload/2484/2484fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1 in vitro Salisphere oluşum. Bugünkü protokolünü kullanarak mekanik ve enzimatik sindirim ardından, artan büyüklükte küreler yüzer kültürlerde bulunabilir. Paneller gün 0 (A), 4 küre temsilcisi faz kontrast mikroskobu görüntüleri (B), 7 (C) ve 10 (D). Ölçek çubuğu = 50 mm.

<ol><li>Vissink, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+Sequelae+of+Head+and+Neck+Radiotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Rev+Oral+Biol+Med%22%5BJournal%5D)">Oral Sequelae of Head and Neck Radiotherapy.</a> Crit Rev Oral Biol Med. 14, 199-212 (2003).</li>
<li>Nape&ntilde, as, J, J., Brennan, M. T., Fox, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnosis+and+treatment+of+xerostomia+%28dry+mouth%29%5BTitle%5D)+AND+%22Odontology%22%5BJournal%5D)">Diagnosis and treatment of xerostomia (dry mouth).</a> Odontology. 97, 76-83 (2009).</li>
<li>Denny, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parenchymal+cell+proliferation+and+mechanisms+for+maintenance+of+granular+duct+and+acinar+cell+populations+in+adult+male+mouse+submandibular+gland%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Parenchymal cell proliferation and mechanisms for maintenance of granular duct and acinar cell populations in adult male mouse submandibular gland.</a> 235, 475-485 (2005).</li>
<li>Man, Y. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Persistence+of+a+perinatal+cellular+phenotype+in+submandibular+glands+of+adult+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Histochem.+Cytochem%22%5BJournal%5D)">Persistence of a perinatal cellular phenotype in submandibular glands of adult rat.</a> J. Histochem. Cytochem. 43, 1203-1215 (1995).</li>
<li>Cotroneo, E., Proctor, G. B., Carpenter, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regeneration+of+acinar+cells+following+ligation+of+rat+submandibular+gland+retraces+the+embryonic-perinatal+pathway+of+cytodifferentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Differentiation%22%5BJournal%5D)">Regeneration of acinar cells following ligation of rat submandibular gland retraces the embryonic-perinatal pathway of cytodifferentiation.</a> Differentiation. 79, 120-130 (2010).</li>
<li>Eirew, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+quantifying+normal+human+mammary+epithelial+stem+cells+with+in+vivo+regenerative+ability%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">A method for quantifying normal human mammary epithelial stem cells with in vivo regenerative ability.</a> Nat Med. 14, 1384-1389 (2008).</li>
<li>Gorjup, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glandular+tissue+from+human+pancreas+and+salivary+gland+yields+similar+stem+cell+populations%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Glandular tissue from human pancreas and salivary gland yields similar stem cell populations.</a> European Journal of Cell Biology. 88, 409-421 (2009).</li>
<li>Alonso, L., Fuchs, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cells+of+the+skin+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Stem cells of the skin epithelium.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 100, Suppl 1. 11830-11835 (2003).</li>
<li>Lombaert, I. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rescue+of+salivary+gland+function+after+stem+cell+transplantation+in+irradiated+glands%5BTitle%5D)+AND+%22Plos+One%22%5BJournal%5D)">Rescue of salivary gland function after stem cell transplantation in irradiated glands.</a> Plos One. 3, e2063-e2063 (2008).</li>
<li>Coppes, R. P., Goot, A. vander, Lombaert, I. M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+Cell+Therapy+to+Reduce+Radiation-Induced+Normal+Tissue+Damage%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Radiation+Oncology%22%5BJournal%5D)">Stem Cell Therapy to Reduce Radiation-Induced Normal Tissue Damage.</a> Seminars in Radiation Oncology. 19, 112-121 (2009).</li>
</ol>

Burada anlatılan doku kültürü yöntemi kök hücre içeren farelerin tükürük bezleri salispheres izolasyonu için tekrarlanabilir bir protokol temsil. Bu şekilde izole hücreler kullanılarak yapılan çalışmalar, tükürük bezi kök hücreler 9 rejeneratif kapasitesi sermiştir . Salispheres türetilen c-Kit + hücreler yüz Nakli ışınlanmış fare tükürük bezlerinin fonksiyonel iyileşmeye neden olmuştur. Bu veriler, heyecan verici ve kserostomi için kök hücre tabanlı tedavi soruşturulması için bir başlangıç ​​noktası sağlamak. Birçok caddeler, ancak kök hücrelerin tam işaretleyici protein ekspresyon profili, ışınlanmış tükürük bezleri parotis ve tersi işlevi kurtarmak için submandibular bezleri yeteneği ve in vivo kök hücre niş varsayılan karakterizasyonu da dahil olmak üzere keşfedilmeyi beklemektedir hücreler. Sonuçta, bu protokolün, insan doku örnekleri ve izole hücreler kullanarak insan hastalarda kserostomi tedavisi için sonraki potansiyel çeviri açıklanan yöntemin en heyecan verici bir uygulamadır.

<table><tbody><tr><td>Hiyaluronidaz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3506</td><td>&amp;#8211; 20 &amp;#x00B0;C'de saklayın</td></tr><tr><td>Kollagenaz II</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>17101-015</td><td>4 &amp;#x00B0;C'de saklayın</td></tr><tr><td>Epidermal Büyüme Faktörü-2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E9644</td><td>Fosfat tamponlu salin (PBS) içinde 10 &amp;#x03BC;g / mL'lik stok hazırlayın. Tek kullanımlık alikotlar halinde &amp;#8211; 20 &amp;#x00B0;C'de saklayın.</td></tr><tr><td>Fibroblast Büyüme Faktörü-2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F0291</td><td>PBS içinde 25 &amp;#x03BC;g / mL'lik stok hazırlayın. Tek kullanımlık alikotlar halinde &amp;#8211; 20 &amp;#x00B0;C'de saklayın.</td></tr><tr><td>N2 supplement</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>17502-048</td><td>Üretici talimatlarına göre.</td></tr><tr><td>İnsülin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I6634</td><td>Musluk suyunda 2 mg / mL'lik stok hazırlayın. Çözme işleminden önce glasiyal asetik asit kullanarak suyun pH değerini 2-3'e ayarlayın.</td></tr><tr><td>Deksametazon</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D4902</td><td></td></tr><tr><td>100 &amp;mu;M gözenek boyutlu steril hücre süzgeçleri</td><td>BD Biosciences</td><td>352360</td><td></td></tr><tr><td>Hücre süzgeci kapaklı polistiren yuvarlak tabanlı tüpler (50 &amp;mu;M gözenek boyutu)</td><td>BD Biosciences</td><td>352235</td><td></td></tr></tbody></table>

fare tükürük bezi kök hücre İzolasyonu

Isolation of Mouse Salivary Gland Stem Cells

Olgun insan ve fare kökenli tükürük bezleri, ağız boşluğuna tükürük üretimi ve atılımını kolaylaştırır, her biri beş hücre tipleri, en az oluşmaktadır. Seröz ve mukoza asiner hücrelerinin sırasıyla protein ve mukoz bezi üreten fabrikalar ve tükürük üretimi kökeni temsil eder. Sentezlenmiş, tükürük çeşitli enzimatik ve diğer protein bileşenleri, tükürüğün ağız boşluğuna önemli bir kanal vasıtasıyla nihai uzaklaştırma kadar duktal hücrelerin epitel-tipi morfolojisi taşıyan bir dizi aracılığıyla salgılanan. Tükürüğün bileşimi de bu işlem sırasında duktal hücreler tarafından değiştirilir. Sjögren sendromu gibi hastalıkların belirtisi ve bezleri tarafından baş ve boyun kanserleri, tükürük üretimi için radyoterapi gibi bazı klinik durumlarda, dramatik bir şekilde 1,2 azalır . Ağız kuruluğu, ağız kuruluğu öznel bir duygu, yutmak ve konuşma yeteneği hastanın sadece etkiler, ama aynı zamanda diş çürüğü gelişmesine teşvik eder ve dertli sosyal zayıflatıcı olabilir. Bu nedenle tükürük üretimi yukarıda bahsedilen klinik koşullarda restorasyon karşılanmamış bir klinik ihtiyaç temsil eder ve tükürük bezleri 3-5 rejeneratif kapasitesi gibi çeşitli çalışmalar göstermiştir . Izolasyon, fare ve insan bedenleri 6-8 içinde çeşitli dokulardan hücrelerinin, kök hücre benzeri popülasyonlarının Ayrıca, fare tükürük bezleri izole edilen kök hücreleri, ışınlanmış tükürük tükürük üretimini kurtarmak için kullanılabilir olması açıklanan yöntemi kullanarak göstermiştir bezleri 9,10. Bu keşif, kendini yenileyen multipotent yetenekleri ile hücreler içeren bir mikro olarak tükürük bezi keşfi için de insanlarda xerostomic koşulların tedavisi için kök hücre tabanlı tedavilerin geliştirilmesi için önünü açıyor.

Farenin tükürük bezi kök hücrelerin izolasyonu için optimize edilmiş bir protokol açıklanmıştır. Yöntemi, enzimatik ve mekanik sindirim istihdam ve hücrelerin kök hücre özelliklerini içeren salispheres izolasyonu izin verir.

Fare Tükürük Bezi Kök Hücre İzolasyonu

Hem insan hem de fare kökenli olgun tükürük bezleri, her biri ... üretimini ve salgılanmasını kolaylaştıran en az beş hücre tipinden oluşur.

Bu prosedürün genel amacı, nöron SIV bezlerinden muhtemel kök hücrelerin izolasyonunu göstermektir. Bu işlem, öncelikle yetişkin farelerden submandibuler tükürük bezlerinin toplanmasıyla gerçekleştirilir. Prosedürün ikinci adımı, dokuyu homojen bir bulamaç haline getirmek için kavisli makas kullanmaktır.Prosedürün üçüncü adımı, dokuyu kollajenaz ve daha yüksek lyase enzimleri kullanarak daha fazla sindirmektir. Dokunun aşırı sindirilmemesine dikkat edilmelidir. Tam bir hücre süspansiyonu çok fazla küre üretmediğinden, iki ila üç hücreli kümeler optimaldir.Prosedürün son adımı, homogenatın 100 mikronluk ve 50 mikronluk filtrelerden süzülmesidir. Sonuç olarak, bütün SIV bezlerinin mekanik ve enzimatik sindiriminin birlikte kullanılmasıyla, siv bezi kök hücrelerinin kültürü ve izolasyonunu gösteren sonuçlar elde edilebilir. Bu tekniğin uygulamaları, radyoterapi tedavisinden kaynaklanabilen ve ağız kuruluğu olarak da bilinen Kserostomi tedavisine kadar uzanmaktadır.Tükürük bezi kök hücreleri, baş ve boyun kanserlerinden muzdarip hastalarda kserostomiyi tedavi etmek için kullanılabilir. Bu prosedüre başlamadan önce; tampon çözeltileri, fareyi, tükürük bezi kültürünü, besiyerlerini ve enzim çözeltilerini hazırlayın. Ekteki yazılı protokole göre, tüm diseksiyon ve doku kültürü adımları steril bir doku kültürü kabininde gerçekleştirilmelidir.Fare tükürük bezleri izole edilip disseke edildikten sonra, tükürük bezi dokusunu bir teraziyle tartın ve ağırlığı kaydedin. Tükürük bezlerini küçük bir Petri kabına aktarmak için bir spatula kullanın ve kavisli disseksiyon makasıyla tükürük bezlerini homojen bir püre haline gelene kadar doğrayın. Daha geniş bir açıklık elde etmek için bir P 1000 pipet ucunun ucunu kesin.Petri kabındaki her 80 mg doku başına 1 mL tampon çözelti pipetlemek ve homojenatı 15 mL'lik bir santrifüj tüpüne aktarmak için bunu kullanın. Petri kabına her 80 mg doku başına 1 mL daha tampon çözelti ekleyin. Kalan küçük doku parçalarını toplamak için bu çözeltiyi santrifüj tüpüne ekleyin.Ardından hızlıca 250 µL kalsiyum klorür çözeltisi, 25 µL hyaluronidaz çözeltisi ve 25 µL kollagenaz ekleyin. 80 mg doku başına iki enzim çözeltisi kullanılır. Doku ve enzim karışımını içeren tüpü 37 °C sıcaklıktaki çalkalayıcı su banyosuna yerleştirin ve 20 dakika boyunca inkübe edin.İnkübasyonun ardından tüpleri çıkarın. Doku ve enzim solüsyonunu yaklaşık 10 kez iyice karıştırmak için, daha önce olduğu gibi ucu kesilmiş bir P 1000 pipet ucu kullanın. Tüpü 20 dakika daha 37 degrees Celsius su banyosuna geri yerleştirin.İkinci inkübasyon süresinin ardından, örneği 8 dakika boyunca 400 ×g'de santrifüjleyin; santrifüj işleminin ardından süpernatantı atın ve peleti, başlangıç dokusunun her 80 mg'ı için iki ml tampon çözelti içerisinde dikkatlice yeniden süspande edin. Daha sonra, dokunun her 80 mg'ı başına 250 µL kalsiyum klorür çözeltisi, 25 µL hiyalüronidaz çözeltisi ve 25 µL kollagenaz çözeltisi ekleyin.Ardından tüpü 20 dakika boyunca 37 °C'deki çalkalamalı su banyosuna geri yerleştirin. Dokuları su banyosundan çıkarın ve inkübasyon sonrası önceki inkübasyonlarda olduğu gibi işlemi tekrarlayın. Örneği 400 ×g'de sekiz dakika boyunca santrifüj edin.Bir kez daha tekrarlayın ve ardından süpernatanı atın. Doku, önceki santrifüj işleminin ardından filtreleme hazırlığı için yıkanmaya hazırdır. Tüpe iki mililitre tampon ekleyin ve karıştırarak homojenize edin.Resüspansiyonu takiben peleti süspande edin. Örneği 400 ×g'de sekiz dakika boyunca santrifüjleyin. Ardından süpernatantı pipetle uzaklaştırın.Tüpe, dokunun her 80 miligramı başına bir mililitre tampon ekleyin ve tekrar tritüre edin. Peleti yeniden süspanse etmek için santrifüj işlemini tekrarlayın.Sekiz dakika boyunca 400 ×g kuvvetinde santrifüjleyin. Santrifüjleme sırasında, bir 50 mL santrifüj tüpünün üzerine 100 µm gözenek boyutunda bir filtre yerleştirerek filtrasyon aşaması için hazırlık yapın; santrifüjleme sonrası süpernatantı atın ve tüpe doku başına 80 mg için nihai 1 mL tampon çözelti pipetleyin. Peletin tamamen yeniden süspanse edildiğinden emin olmak için, uç kesicileri olan bir P 1000 uç kullanarak pipetle yukarı aşağı çekme işlemi uygulayın.Ardından homogenatı 100 mikron gözenek boyutundaki filtreye aktarın ve filtreden süzülerek 50 mililitrelik santrifüj tüpüne geçmesini sağlayın. Filtrenin tıkanma ihtimali nedeniyle üç mililitreden fazla homogenat uygulamamak önemlidir. Bu hacim aşılırsa, filtrenin alt kısmında biriken dokuları uzaklaştırmak için bir P 1000 pipet kullanın ve bu dokuları filtratı içeren 50 mililitrelik santrifüj tüpüne aktarın.26 gauge iğne takılı bir mililitrelik şırınga kullanarak, 50 mililitrelik santrifüj tüpündeki homogenatı aspire edin ve beş mililitrelik tüpün üzerine takılı olan 50 mikron gözenek boyutlu filtre kapağına uygulayın. Homogenatın filtreden süzülmesini bekleyin. Filtrasyon yavaş gerçekleşirse, filtre kapağı çok sıkı olabilir, hafifçe gevşetin.Homojenatın tamamı filtreden tüpe geçtiğinde, bir tıkaç filtrelemeyi engelleyebilir. Örneği 8 dakika boyunca 400 ×g'de santrifüjleyin. Santrifüj işleminin ardından, çökelen hücreler plakaya ekilmeye hazır hale gelir.Tükürük bezi hücreleri, her 80 mg doku başına 1 mL MSG ortamında yeniden süspanse edilerek hazırlanır. Hücreler standart protokollere göre sayılır. Burada, hücre sayısını belirlemek için otomatik bir hücre sayacı kullanılmıştır.0,4 × 10⁶ hücre için gereken hücre süspansiyonu hacmini ve buna bağlı olarak ekim yapılabilecek kuyucuk sayısını hesaplayın. 12 kuyucuklu bir kültür plakasına, her kuyucuğa 1 mL MSG besiyeri ekleyin. Hücre süspansiyonunun iyice karıştırıldığından emin olun ve her bir kuyucuğa 0,4 × 10⁶ hücre için hesaplanan hücre süspansiyonu hacmini ekleyin.Plakaları %5 karbon dioksit içeren 37 degrees Celsius'lik bir inkübatöre aktarın. İki günlük inkübasyonun ardından, kültürleri SLO kürelerinin varlığı ve hücrelerde asenik eksikliği açısından inceleyin. Bu, açıklanan şekilde işlenmiş ve kültürdeki sıfırıncı günden onuncu güne kadar faz kontrast mikroskobu ile görüntülenmiş fare tükürük bezi dokusu örneğidir; küçük hücre agregatları, bu süre boyunca boyutları büyüyen SLO küreleridir.Burada, kök hücre belirteci için temsili üç ila beş günlük SLO küre kültürünün immün boyaması gösterilmektedir. Protein C kiti. Akış sitometrisi ile analiz edildiğinde, sea kit ekspresyonu, SLO küre kültürlerinde varsayılan kök hücrelerin varlığını doğrulamaktadır; üç ila beş günlük SLO küreleri, doğal tükürük bezindekilere benzer morfolojiye sahip asinus ve kanal benzeri yapılar oluşturmak üzere farklılaştırılabilir.Bu videoyu izledikten sonra, fare tükürük bezlerinin ve fare tükürük bezlerinden kaynaklanan kök hücrelerin nasıl izole edileceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.

isolation-of-mouse-salivary-gland-stem-cells

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu video yolk kesesi ve aort-gonad mesonephros bölge embriyolardan mikro incelemek ve hematopoietik kök hücreler sıralamak için flow sitometri kullanmak nasıl gösterir.

Murin Yolk Sac ve AGM Erken Hematopoetik Kök Hücre İzolasyonu

Ilkel germinal hücrelerin ayırt etmek için erken geliştirme aşamasında, embriyonik germinal hücreler, kanser ve kısırlık hakkındaki hipotezi adresine yeteneği mükemmel bir model. Bu protokol, 10,5-11,5 gün coitum fare embriyoları, gelişmekte olan gonadlar ilkel germinal hücreleri izole etmek için nasıl gösterir.

Fare Embriyonik Germinal Hücreleri İzolasyon ve türetilmesi

Wharton kanalı üzerinden fare submandibular tükürük bezi kanülasyonu için bir protokol açıklanmıştır. Bu deneme için, tripan mavi çözümü, bu tekniği etkin bir şekilde hedeflenen bezine infüzyonları dağıtımını nasıl göstermek için, bu yeni yaklaşımın güvenilirliğini ve tükürük bezlerinin rejenerasyonu için potansiyel bir klinik ilaç / hücre tedavisi olarak önermek için bir boyacı olarak kullanılır.

Wharton Kanalı üzerinden Fare Submandibular Tükürük Bezi kanülasyonu

Burada fare tracheas bazal ve submukozal bez kanal hücrelerinin izolasyonu için bizim protokol göstermektedir. Ayrıca, bir oluşturmak için dorsal fare yağ yastığı içine kök hücreleri enjekte yöntem...

Fare Trakea gelen Bazal Hücre ve Submukozal Bezi Kanal Hücre İzolasyonu

Yetişkin kök hücre biyolojisini incelemek için ideal bir model fare kılı folikülüdür. Burada, fare sırt derisinin enzimatik sindirimini ve ardından FACS analizini kullanarak farklı saç folikülleri kök hücre ve epidermal keratinosit popülasyonlarını izole etmek için bir protokol sunuyoruz.

Dorsal Fare Cilt Saç Folikül Kök Hücreler ve epidermal keratinositler Ayırma

Burada, hücre dışı Matriks (ECM) ifade ve duktal Morfoloji araştırmak için meme dokuları bütün, olduğu gibi fare yalıtım için bir iletişim kuralı mevcut. Fare #4 karın bezleri tarafsız tampon formalin içinde sabit kesitli ve ECM proteinler için immünhistokimya kullanarak lekeli 8-10 hafta eski kadın nulliparous fareler, elde.

Sağlam, Bütün fare meme dokuları yalıtım hücre dışı matriks ifade ve bezi Morfoloji analizi için

Burada, E13 fare embriyo ganglionic itibar bir roman mikrocerrahi teknik nöral kök hücrelerin izolasyonu için tanıtmak.

Yalıtım ve kültür embriyonik fare nöral kök hücrelerin

Lakrimal bezi (LG), α-pürüzsüz Kas aksini (αSMA) ifade eden iki hücre türüne sahiptir: miyoepitelyal hücreler (MECs) ve perikayt. MECS ektodermal orijinli, birçok glandüler dokularda bulunan, perikayt endodermal kökeni vasküler pürüzsüz Kas hücreleri iken. Bu protokol, murine LGs 'den MECs ve perikaytları yalıtır.

Yetişkin Murine lacrimal ve submandibular bezlerden Myoepitelyal hücrelerin izolasyonu

Birincil insan tükürük bezi türevi epitelyal hücreleri izole etmek ve yetiştirmek için bir yöntem sunuyoruz. Bu hücreler onları tükürük epitelyal orijinli olmak ile tutarlı gen ifade desenleri sergiler ve Engelbreth-Holm-Swarm tümör hücrelerinden türetilen Bodrum membran matrisleri üzerinde salispheres olarak veya tedavi kültür yemekleri monolayers olarak yetişebilir.

Salispheres veya Monolayers olarak In vitro büyüme için ınsan tükürük bezlerinden tükürük epitelyal hücrelerin yalıtım

İmmünofloresan görüntüleme, karmaşık, zamana bağlı biyolojik süreçleri zaman içinde tek bir anlık görüntüde gözlemleme yeteneği ile sınırlıdır. Bu çalışma, hassas kesilmiş fare submandibular bez dilimleri üzerinde yürütülen canlı görüntüleme yaklaşımını özetlemektedir. Bu yaklaşım, homeostaz ve rejenerasyon ve onarım süreçleri sırasında hücre-hücre etkileşimlerinin gerçek zamanlı olarak gözlemlenmesine izin verir.

Tükürük bezindeki hücre-hücre etkileşimlerinin ex vivo canlı hücre görüntüleme ile sorgulanması

Öğrenin fare tükürük bezi kök hücre izolasyonunu enzimatik ve mekanik sindirim kullanarak. Bu yöntem salisferlerin yetiştirilmesini sağlar ve kserostomi tedavisinde uygulama potansiyeli sunar.

Fare Tükürük Bezi Kök Hücre İzolasyonu

Daha fazla video keşfet