Name: Asma Ağırlık Sistemi Fare Koroner Arter Tıkanıklığı için kullanın (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-04-19T11:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 30 s
Description: Öğrenin fare koroner arter tıkanıklığı için asma ağırlık sistemini kullanarak miyokard iskemisini ve iskemik önkoşullandırmayı in vivo çalışın. Bu yöntem kardiyoprotektif mekanizmaları araştırmada kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Mevcut çalışmalar, Ulusal Kalp, Akciğer ve Kan Enstitüsü Hibe R01-HL0921, R01-DK083385 ve R01-HL098294 HK Eltzschig, T. Eckle 1K08HL102267-01, ve Anestezi Eğitim ve T. için Araştırma Hibeler Vakfı tarafından desteklenen Eckle ve HK Eltzschig ve Amerikan Kalp Derneği, T. Eckle ve HK Eltzschig ve M. Koeppen Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) araştırma bursu Grant. Shelley Eltzschig sanat eseri için teşekkür ederiz.

Genel notlar: Tüm işlemler dik bir diseksiyon mikroskobu (Olympus, Z-Eksen Crank Post STU2 StandBoom Stand ile SZX10) altında yapılan bir cerrahi koagülatör ile yapılmalıdır. Havalandırma prosedürü için kritik öneme sahiptir ve bu nedenle belirli bir miktar zaman ventilatör seçme ve havalandırma tekniği optimize harcanan olmalıdır. Sıcaklık, kan basıncı ve anestezi boyunca sabit olmalıdır. 1. Anestezi, Entübasyon ve İzlenmesi <ol><li> C57BL / 6 farelerin en az 10 hafta kullanın. Bir doz 70 mg / kg vücut ağırlığı ip pentobarbital sodyum kullanarak neden anestezi anestezi yaklaşık 10 mg / kg / saat sodyum pentobarbital ile koruyun. Bu kan basıncını önemli ölçüde azaltabilirsiniz doz aşımı ile dikkatli olun. Pentobarbital yeniden dozlama sonra bile plazma düzeylerinde ciddi artışlara yol saat-. Kardiyoprotektif bileşik olarak izofluran ilgili güçlü kanıtlar dayanarak, 'soy' ve miyokard iskemisi 46-56 için bir model pentobarbital kurulan kullanmanızı öneririz . </li><li> 37 vücut ısısını korumak için termal geribildirim denetleyicisine bağlı bir rektal termometre probu ile sıcaklık kontrollü ısıtmalı masa (RT, Effenberg, Münih, Almanya) ° C Yeri fareler </li><li> Bir teyp ve ayak bileklerine kadar bağlanmış bir dikiş kullanarak tabloya bağlı üst ve alt ekstremite ile supin pozisyonda, anestezi indüksiyon güvenli fareler sonra. Dişler kullanarak kafa için de aynı işlemi yapın. Yeterli frenleyici başarılı bir entübasyon ve kontrollü bir cerrahi için önemlidir. Ameliyat öncesinde, fare saç alerji riskini azaltmak için, mineral yağ ile fare kaplayın. </li><li> Cerrahi trakea ortaya çıkarmak ve trakeal entübasyon bluntpolyethylene kanüller (Insyte 22g, Beckton Dickinson, ABD) kullanarak gerçekleştirmek. Iğne künt bir stile olarak kullanmak mümkün olacak. </li><li> Bir çift forseps kullanılarak dil çekin ve daha sonra vücudun doğru 15 derecelik bir açıyla yavaşça itin. Trakea bile maruz kaldıktan sonra bir mikroskop kullanılarak, bazı eğitim gerektirebilir. Trakea küçük bir hasar sütür boyunca hayvan havalandırılması yetersizlik sebep olacağının farkında olun. Bu nedenle, hava yolu problemleri karşılaşırsanız, küçük delikler için trakea kontrol edin. </li><li> Doğru tüp yerleştirme carina yukarıdaki önceden maruz trakea içinde kanül doğrudan görselleştirme onaylayın. </li><li> Tüpün bir vantilatör bağlayın. Biz Siemens (PRM Veteriner, ABD) Servo 900 C kullanarak bir basınç kontrollü ventilasyon tekniği tavsiye ederiz. Hayvanlar daha sonra FiO 2 = 0.4 ile 110 solunum / dk 10 mbar, frekans pik inspiratuar basınç ve 3-5 mbar bir pozitif ekspirasyon sonu basınç kullanarak havalandırılmalıdır. Ayarları açık toraks cerrahisi sırasında akciğerlere kontrol ederek en kolay elde edilebilir bazı ayarlamalar gerekebilir. Akciğerler çökmüş ya da aşırı genişlemiş emin olun. Servo 900 C, insanlar için vantilatör olarak inşa olduğu gerçeğine rağmen, bir basınç kontrollü ventilatör ortamda kullanılması farelerin havalandırma için mükemmel çalışır. </li><li> I-STAT kullanarak ventilasyon süresi 4 ila 6 saat sonra normal gaz değişimi (oksijen kısmi basıncı, PaO 2, 115 ± 15 mmHg ve kısmi basınç karbon dioksit, PaCO 2 38 ± 6 mmHg) onaylamak için kan gazı analizi yapın Sistemi (Abbott, ABD). </li><li> Monitör EKG (örneğin, Hewlett Packard, Böblingen, Almanya) ile kalp atım hızı. Kalp hızı 450 altına düştüğü olmadığından emin olun. Fare oluşursa bradikardi sıcaklık ve anestezi dozu / konsantrasyon kontrol edin. Xylacin / Ketamin anestezisi 250 / dk bir kalp neden olur ve bu nedenle tavsiye edilmez. </li><li> Uygun bir sıvı replasmanı uygulayın. Olan bir infüzyon serum fizyolojik 0.1 ml / saat arteriyel ya da venöz kateter yoluyla iskemi başlangıcından önce yapılmalıdır. Ayrıca, 500 ul tuzlu bolus cerrahi öncesi ip verilebilir. Thoractomy bir damla kan basıncı uyarabilir ve ilave olarak serum fizyolojik boli gerekebilir. Iskemi sonra, 1 ml / saat infüzyon hızı, ortalama arteryel kan basıncı 60 mmHg üzerinde korumak ve yeterli reperfüzyon TTC kullanarak infarkt boyama için kritik bir garanti etmek için gerekli olabilir. </li><li> Kan basıncı sürekli kayıt için karotis arter (PE10, İpucu OD (mm / "Konik)&gt; 0,024 mm/.011") yerleştirin. Karotis arter paratrakeal kasların künt diseksiyon ile maruz kalacaklar. Daha fazla maruz kalma ve herhangi bir doku travması (özellikle vagal sinir) dikkatli kaçınma ardından, iki sütür ve küçük bir kelepçe kullanılarak damar içine bir kateter yerleştirilir. Arter diseksiyon başlamadan önce vücut kol takın. Bu arter uzun bir parça gösterecektir. Karotis arter proksimalinde Knot sonuna. Sütür sonuna kadar büyük bir kelepçe takıngerilim elde edilir. Arter çevresinde başka bir dikiş yerleştirin ve çok distal ucu arter disseke. Burada, küçük bir kelepçe yerleştirin. Arter içine bir küçük çapraz açılış kesmek için mikro makas kullanın. Ince bir forseps (Dumont, TEFE) ile açılış tutun ve ellerinizi / forseps ile uygun büyüklükte kateter önceden. Ikinci sütür ile düğüm yapın ve arter güvenli. Kelepçe gevşetin ve kateter daha önceden. Kateter birkaç knot ve bant ile sabitleyin. </li></ol> 2. Koroner Arter Tıkanıklığı Tekniği <ol><li> Cildi inceleyin ve künt diseksiyon tekniği kullanılarak sol toraks duvar maruz. </li><li> Koter ile toraks duvarı açığa çıkarmak için kasları Pektoral binbaşı ve küçüklerin kesin. Pektoralis majör çekerek, akciğer böylece elektrocerrahi üniteden bir forseps, akciğer, Yırtılmaları koagüle geçen yatay bir çizgi üzerinde 1-3 mm eklenen ve, damla. </li><li> Köreldiğini makas kullanarak, toraks duvar kesti. Catch plaka kaldırılır ve künt ucu bükülmüş Modifiye çengelli iğne, toraks açık tutmak için kullanılır. </li><li> Sütür son yerleştirilmesini kolaylaştırmak için, koagüle ve göğüs kafesinin sol alt tarafına doğru diyafram boyunca toraks duvar kesmek. </li><li> Perikard diseksiyon kalp Açığa. Diyafragma hareketleri önlemek için kaldırmak ve frenik sinir kesmek. </li><li> Bir forseps ile küçük bir ıslak pamuk çubuğu kullanın ve kalbin sağ tarafına doğru çevirin. Sol koroner arter (LCA) belirlenmesi ve akciğerleri çok şişirilmiş olduğunu emin olun. Optimize toraks açılış dikiş verirken kalp güvenli tutun. Kan basıncı çok düşükse belirlenmesi karmaşık olabilir. Salin Ek boli LCA belirlenmesi artırabilirsiniz. LCA, yatay olarak kalp kapısı (dönen damarlar aksine) parlak kırmızı bir gemi. Bazen, LCA bir mikroskop olmadan en iyi görülür. Çok fazla ışık kullanmayın. Bu görselleştirme imkansız hale yansımaları koparmaya yol açabilir. </li><li> LCA görsel olarak tespit edildikten sonra, 8.0 naylon sütür (Prolen Ethicon, Notiefies, ABD) LCA etrafında bir yer. Aralıklı LCA oklüzyon amaçla, kardiyomiyopati (42) asılı bir ağırlık sistemi kullanarak kronik bir model benimsedi . </li><li> Künt kenarlı plastik tüp küçük bir parça (PE-10 tüp) ile dikiş ipliği ve her iki ucunda iki küçük ağırlıklar (1g, su ile dolu örneğin kullanımı Eppendorf tüpleri) ekleyin. Özgürce bir çubuk üzerinde asılı ağırlıkları ile LCA hemen tıkalı olmalıdır. Buna ek olarak, ağırlık rahatladım, LCA oklüzyon tek seferde iptal edilir. Başarılı LCA oklüzyon, koyu mor, gemi (parlak kırmızı beyaz) ve EKG ST yükselme varlığı tarafından sağlanan miyokard renk değişikliği kırmızı ışık geminin hemen bir renk değişikliği ile teyit edilmesi gerekir. Reperfüzyon sırasında, renk değişiklikleri anında kaybolur. 37 ° C, emici pamuk tuzlu batırılmış, parça boyunca (bkz. Şekil 1 de) ile kalp ıslak tutun. </li><li> Birincil ilgi göre iskemi zamanı seçti. Aslında, çalışmalar için IP kardiyoprotektif etkileri, bir infarkt boyutları yaklaşık 30 -% 40 AAR ile ilgili bir iskemi zamanı kullanmak için ideal olacaktır. Böylece, her iki yönde de değişiklik, örneğin kalp IP veya deneysel bir tedavi ya da belirli bir gen delesyonu ile büyük infarkt boyutları ile küçük infarkt boyutları göstermek için mümkün olacaktır. Buna ek olarak, 60 ila% 80 arasında infarkt boyutları genellikle hayatta ve reperfüzyon süresi tamamlanmadan önce hayvanlar ölür ise% 50'den daha az bir infarkt olan fareler genellikle, deney hayatta. 3.5 infarkt 2 saat reperfüzyon sonucu miyokard iskemi modeli, 10 dakika ±% 1.3 AAR kullanma. Buna karşılık, 60 dakika 42 ortalama infarkt sonuçları iskemi zamanı AAR (p &lt;0.01) 39 ±% 5.2. Böylece, her iki yönde de değişiklik çalışmak için ideal olarak 60 dakika iskemi düşünün. Bununla birlikte, sever fenotip gen hedeflenen farelerde iskemi zamanını ayarlamak için olabilir. </li><li> Sağ reperfüzyon zamanı seçti. Reperfüzyon TTC boyama için büyük önem taşımaktadır. Renksiz boya, tuğla-kırmızı renkli bir çökelti, co-enzim NADH varlığında dehydrogenases tarafından düşürüldü. Dying hücreleri NADH ve bu nedenle, kırmızı lekeli canlı miyokardın içinde soluk alanlar olarak tarif korumak için yeteneklerini kaybederler. TTC tarafından infarkt tarif bu NADH nekrotik alan tamamen yıkanmış olmuştur gerektirir. Ancak reperfüzyon yeterince uzun değilse, TTC boyama infarkt tarif gerçek infarkt 43 küçümsenmesi neden olabilir. Bizim ellerde, 60 dakika iskemi zamanı sonra, infarkt ölçümü 11.5 arttı ± 42,2 ila 30 dakika sonra% 4.5 ±% 5.1120 dakika sonra. Infarkt daha fazla artış reperfüzyon kez daha uzun (240 dakika) 39 ile tespit edilebilir. Böylece, iskemi önkoşullamanın düşünün kardiyak enzim determination.If bağlamında da makul görünüyor 2 saat reperfüzyon süresi tavsiye ederiz, biz 60 iskemi zamanı takip, 4 kür IP (5 dakika iskemi, 5 dakika reperfüzyon) tavsiye dk ve 2 saat reperfüzyon süresi. Bu koşullar altında, IP 42.2 infarkt 3.2 kat azalma ± 5.1% 13.3 ± 3.3 AAR 39% ile ilişkili bulunmuştur. Ancak, asılı ağırlık sistemi sayesinde, farklı önkoşullamanın alayları kolaylıkla uygulanabilir olabilir. </li></ol> 3. 'Risk Altında' Alanının Belirlenmesi (AAR) ve Miyokard Enfarkt Boyutu Miyokard infarktüsü (IP ile veya olmadan) indüksiyonundan sonra, bölgede LCA (riskli alan, AAR) ve kendisi bir boyama tekniği kullanılarak tespit edilecektir infarkt boyutunu perfüze. Daha sonra, infarkt sonra AAR göre, miyokard enfarktüsü yüzdesi olarak hesaplanan olacaktır. Bunu yapmak için, Evan mavi ve triphenyltetrazolium klorür (TTC) ile daha önce açıklanan bir çift boyama tekniği 44 kullanılır . <ol><li> LCA tıkalı ise retrograd aort içine% 1 Evan mavi boya enjeksiyonu ile AAR belirleyin. Alternatif olarak, bir karotis kateter yerinde kalırsa, Evans mavi enjeksiyon için bu yolu kullanın. Evans mavi AAR hariç, tüm miyokard doku mavi boya. Koroner dolaşımı içine enjekte edilir ve Evan mavi boyama engel olduğu gibi, kateter içinde hava kabarcıkları önlemek için bu adım için kritik öneme sahiptir. Evans mavi boyama önce kardiyak enzim ölçümleri için kan toplamak için isteyebilirsiniz. Buna ek olarak, aort ya da karotis kateter aracılığıyla 5 ml serum fizyolojik enjekte edilerek kan kaldırılması tavsiye edilir. </li><li> Buz gibi% 0.9 salin Vergi kalp ve yıkama </li><li> % 2 agaroz içine gömün. Bu başarılı boyama önleyecek sıcak agaroz kullanıyor musunuz. </li><li> 30 dakika sonra +4 ° C (veya 15 dakika -20 ° C), kalp, kalp matrisi veya mikrotom kullanılarak 1 mm dilimler halinde kesilir. Kalp dondurucu içine koyarsanız olmayan lekeli kalplerine yol açacaktır kuru dondurma kaçının. </li><li> Az% 1 TTC ile 37 dilim inkübe ° C su banyosunda 15 ml mavi kapaklı kullanarak 10 dk. Bu süre canlı doku lekeleri enfarkte alan kırmızı, beyaz bir alan olarak sınırları belirgin olmasını sağlayacaktır. </li><li> Gece boyunca% 10 fomaldehyde ile boyandı dilim sabitleşmek. Bunu yaparak, enfarkte alanda daha iyi resim kalitesini iyileştirmek tezat. </li><li> Risk altındaki alanı (AAR) ve NIH yazılım Resim 1.0 45 planimetri ile infarkt belirleyin. </li><li> Risk altındaki alanı enfarkte miyokardın yüzde hesaplayın. </li></ol> 4. Kardiyak Enzim Ölçümü TTC boyama ile ilgili sınırlamalar nedeniyle miyokard infarktüsü şiddeti kardiyak troponin I (cTnI) farelerin serum düzeyleri belirlenmesi için ek okuma olarak tavsiye ederiz. Kan daha sonra nicel bir hızlı cTnI assay (Hayat Diagnostics, Inc, West Chester, PA, USA) ile belirlenir portal ven ve serum cTnI seviyeleri elde edilecektir. 5. Temsilcisi Sonuçlar: <img src="/files/ftp_upload/2526/2526fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1 koroner oklüzyonu asılı ağırlık sistemi kullanarak kalp IP (A) Model. Bu teknik, koroner oklüzyon için bir düğüm gerektirmez. (B, C) Cerrahi kurulum. (D), sonra sol koroner arter oklüzyon fare kalp (LCA, oklar) Resim. LCA Görsel kimlik, fareler ligasyonu ve iskemik ön için gerekli. LCA 1-2 mm çapında bir 8.0 naylon dikiş sol kulak kepçesi altına yerleştirilir. Dikiş, küçük bir plastik tüp (*) geçirilir. Her dikiş sonunda küçük bir ağırlığı (1g) bağlı olduğu ve her iki tarafta dikiş çubuklar üzerine yerleştirilir. (E) LCA oklüzyon ve retrograd aort içine Evan mavi boya enjeksiyonu sonra AAR belirlenmesi. Miyokardın geri kalanını mavi ise AAR boyasız kalır. Inkübasyondan sonra TTC enfarkte alan boyanmış beyaz AAR doku, canlı doku boyanmış kırmızı.

Bu çalışmada, sağlam bir fare modeli asılı ağırlık sistemi kullanarak IP performans ve böylece bir düğüm koroner arter oklüzyonu kaçınarak bir roman tekniği açıklar. Aslında, bu çalışmada, IP, böylece düğümü tabanlı koroner oklüzyon modelleri ile ilişkili değişkenlik en aza indirerek yüksek tekrarlanabilir infarkt boyutları ve kardiyak koruma gösterir. Farelerde IP cardioprotection okuyan düşünen Müfettişler bu model yararlı olabilir.

<table><tbody><tr><td>Sodyum Pentobarbital (Fatal Plus)</td><td>Vortech Pharmaceutical Ls, Ltd</td><td>V.P.L. 9372</td><td>salin içinde 4mg/mL</td></tr><tr><td>TTC</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>17779 Fluka</td><td>PBS içinde % 1.5</td></tr><tr><td>Evans Blue</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E2129</td><td>1 L PBS içinde 10g</td></tr><tr><td>Insyte 22 G</td><td>BD Biosciences</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Sütür, ipek 4.0</td><td>Harvard Apparatus</td><td>517698</td><td></td></tr><tr><td>Sütür, Prolene 8.0</td><td>Ethicon Inc.</td><td>M8739</td><td>yeniden kullanılabilir</td></tr><tr><td>Kalp Matrisi</td><td>Zivic Instruments</td><td># HSMS001</td><td></td></tr><tr><td>Siemens 900 C</td><td>DRE Veterinary</td><td># 336</td><td>yenilenmiş</td></tr><tr><td>diseksiyon mikroskobu (SZX10 )</td><td>Olympus Corporation</td><td>n/a</td><td>geniş çalışma mesafesi dikkate alınmalıdır</td></tr><tr><td>Isıtma Tablası</td><td>Rt, Effenberger, Germany</td><td>n/a</td><td>tek ve yegane sağlayıcı</td></tr><tr><td>Kan basıncı cihazı</td><td>Cyber Sense, Inc</td><td>BPM02</td><td></td></tr><tr><td>I STAT</td><td>Abbott Laboratories</td><td>n/a</td><td></td></tr></tbody></table>

asma ağırlık sistemi fare koroner arter tıkanıklığı için kullanın

Use of a Hanging Weight System for Coronary Artery Occlusion in Mice

Knockout farelerde farklı genler 1-38 giderek daha fazla kullanılabilir hale akut yaralanma murin çalışmalar, yoğun bir soruşturma alan. Iskemik ön (IP) Cardioprotection yoğun bir soruşturma bir alan kalır. Moleküler temeli daha da aydınlatmak için, nakavt fare çalışmalarında kullanımı, 39 30 14 7 özellikle önemlidir. Zaten önceki çalışmalarda farelerde başarıyla kardiyak iskemi ve reperfüzyon olması gerçeğine rağmen, bu model, teknik olarak çok zor. Özellikle koroner arter, görsel kimlik, desteklenen bir düğüm ile geminin kapalı bağlayarak geminin etrafında ve koroner oklüzyon sütür yerleştirilmesi teknik olarak zordur. Buna ek olarak, cerrahi travmaya neden olmadan IP sırasında koroner arter aralıklı reperfüzyon için yeniden açılması düğüm ek bir zorluk ekler. Ayrıca, kusurlu koroner oklüzyonu nedeniyle yeterince güçlü, yanlışlıkla reperfüzyon aşağı düğüm bağlı değilse sonuçlarını etkileyebilir. Aslında, bu kolayca kalpte hareketi nedeniyle oluşabilir. Düğümlü koroner oklüzyon sistemi ile ilgili potansiyel sorunlar hakkında dayanarak, IP 39 sırasında aralıklı olarak koroner arter oklüzyonu asılı ağırlık sistemi dayalı kronik kardiyomiyopati daha önce yayınlanmış bir model benimsedi . Aslında, koroner arter oklüzyonu böylece bir düğüm koroner kapamak zorunda olmadan elde edilebilir. Ayrıca, geminin reperfüzyon kardiyak dokularda uzak bir lokalizasyonu asılı ağırlıkları destekleyerek kolayca elde edilebilir. Biz iskemi ve reperfüzyon kez önkoşullamanın alayları, vücut ısısı ve genetik geçmişleri 39 değişimi de dahil olmak üzere, sistematik olarak, bu sistem test edildi. Boyanma enfarkt ek olarak, biz bu model miyokard infarktüsü bir marker olarak kardiyak troponin I (cTnI) test ettik. Aslında, cTnI plazma düzeyleri infarkt boyutları (R2 = 0.8) ile ilişkili. Son olarak, biz bu tekniği fare IP ve miyokard enfarktüsü 6, 8, 30, 40, 41 sırasında çeşitli çalışmalarda yüksek tekrarlanabilir infarkt boyutları verir gösterilebilir . Bu nedenle, bu teknik hedefli gen delesyonu olan farelerde, genetik bir yaklaşım kullanarak IP cardioprotection yer alan moleküler mekanizmalar takip araştırmacılar için yararlı olabilir. Transgenik farelerin kalp IP üzerinde ileri çalışmalar bu tekniğin düşünebilirsiniz.

Miyokard iskemisi ve iskemik ön fare modeli önemli bir araç çalışma kardiyoprotektif mekanizmalar<em&gt; In vivo</em&gt;. Burada, kolay uygulanabilir rapor<em&gt; In situ</em&gt; Koroner arter oklüzyonu için Asılı ağırlık sistemi kullanarak kalp IP modeli.

Asma Ağırlık Sistemi Fare Koroner Arter Tıkanıklığı için kullanın

Farklı genler için nakavt farelerin giderek daha erişilebilir hale gelmesiyle birlikte, akut yaralanmaya ilişkin murin çalışmaları yoğun bir araştırma alanı haline gelmiştir 1-38. ...

Bu prosedürün genel amacı, iskemi öncesi koşullandırma ile veya koşullandırma olmadan nöron kalbinde miyokardiyal iskemi oluşturmaktır. Bu işlem, öncelikle anestezi, pozisyonlandırma, ventilasyon ve sıvı replasmanı için optimize edilmiş bir teknik kullanılarak gerçekleştirilir. Prosedürün ikinci adımı, koroner artere erişimi kolaylaştırmak için lateral torakotomi uygulamaktır.Üçüncü adım, arterin altına ultra ince bir sütür yerleştirmek ve bir oklüzyon oluşturmak için asılı ağırlık sistemi uygulamaktır. Son olarak, karotis arterine Evan's blue boyası enjekte edilir ve enfarktüs geçirmiş dokuyu görselleştirmek için kalbe TTC boyaması uygulanır. Nihayetinde, genetiği değiştirilmiş veya farmakolojik olarak tedavi edilmiş hayvanlarda hasarlı miyokardın boyutunu gösteren sonuçlar elde edilebilir.Genellikle, bu yöntemde yeni olan kişiler, koroner arterin tanımlanmasındaki zorluk ile anestezi, ventilasyon ve sıvı replasmanının karmaşıklığı nedeniyle zorluk yaşayacaklardır. Başlamak için, anestezi uygulanmış bir fareyi sıcaklık kontrollü ısıtılmış bir masaya sırtüstü pozisyonda yerleştirin, her bir ekstremiteye dikiş malzemesiyle halka şeklinde düğümler atın ve ardından dikişleri masaya bantlayın. Daha sonra, üst dişlerin altından bir dikiş geçirerek başı sabitleyin.Sabitleme sırasında fare hareketleri. Dikişe tepki verilmesi, cerrahi prosedür için anestezi derinliğinin yetersiz olduğunu gösterir. Bu durum gözlemlenirse, başlangıç pentobarbital dozunun üçte biri ile dörtte biri oranında yeniden dozlama yapılmalı ve anestezi kuyruk sıkıştırma testi ile doğrulanmalıdır.Hazırlandıktan sonra, tüylerden kaynaklanan alerjenlere maruz kalmayı azaltmak için fare mineral yağı ile kaplanabilir. 500 µL'lik bir salin bolusu uygulayın ve vücut sıcaklığının 37 °C'de kalmasını sağlamak için termal geri besleme kontrol cihazına bağlı bir rektal prob yerleştirin. Trakeyi açığa çıkarmak için boyun boyunca bir insizyon yapın ve kütleştirin.Çevredeki kas ve bağ dokusunu diseke edin. Dili pensetle tutun ve küt uçlu bir polietilen kanülü vücuda doğru 15 derecelik bir açıyla nazikçe yerleştirin. Kanülün önceden açığa çıkarılmış trakea içindeki konumunu doğrudan gözlemleyerek tüpün doğru yerleştirildiğini doğrulayın.Corina'nın üzerine yerleştirin. Tüpü bir servo 900 C ventilatöre bağlayın. Tepe inspiratuar basıncını 10 millibars, frekansı dakikada 110 soluk, pozitif ekspiratuar son basıncı üç ila beş millibars ve inspire edilen oksijen fraksiyonunu 0.4 olarak ayarlayın.Hayvan ventilatöre başarıyla bağlandıktan sonra, kan basıncını ve kalp hızını ölçmek için karotis arterine bir kateter yerleştirilir. Kol önce vücudun yan tarafına sabitlenirse, arterin daha uzun bir bölümü açığa çıkarılacaktır. İzole edilen karotis arterini açığa çıkarmak için paratrakeal kasların küt diseksiyonu ile başlayın, arterin proksimal ucuna bir sütür atın ve bir klemple veya bantla sabitleyin.İlk dikişten yaklaşık 0.5 santimetre uzağa ikinci bir dikiş atın ve bağlayın, ancak arteri saran dikişi sıkmayın. Arteri en distal uca kadar disseke edin ve kan kaybını önlemek için küçük bir klemple kapatın. Mikro makas kullanarak, ilk dikişin altındaki artere küçük diyagonal bir açıklık yapın.Kateteri yerleştirirken açıklığı ince pensle tutun. Kateteri ilerletin. İkinci süturu geçirin ve sabitlemek için düğümü sıkın.Ardından, klempi gevşetin ve kateteri daha ileriye sürün. Kateteri birkaç düğüm ve bantla sabitleyin. Kateter yerleştirildikten sonra, saatte 0.1 mililitre hızla normal salin infüze edin ve kateteri kan basıncı ölçüm cihazına bağlayın.Son olarak, kalp atış hızını izlemek için ekstremitelere klempler takın. Cerrahi hazırlıklar tamamlandığına göre, göğüs üzerinden bir insizyon yapın ve pektoral kasları açığa çıkarın. Pektoralis kaslarını, dikey olarak yukarı çekilebilecek şekilde kesin.Cordy kası kullanırken, insizyonun yapılacağı yer olan göğüs duvarı üzerinde yatay bir hat oluşturmak için bir kordon kullanın. Kasılmalar, uygulanan akıma karşı verilen normal tepkilerdir. Bu hareketlerin, anestezi derinliğinin yetersizliğiyle karıştırılmaması için parmaklarınızla veya pensle ayak parmaklarını sıkarak kontrol yapılması gerekir.Akciğerlerin aşağıya doğru sarkarak yoldan çekildiğinden emin olmak için kesme işleminden önce kası yukarıda tutun. Toraks duvarını künt uçlu makasla kesin ve toraksı açık tutmak için modifiye edilmiş güvenlik iğneleri kullanın. Ardından, toraksı diyafram boyunca torasik boşluktan uzağa doğru kesin.Öncelikle, öngörülen kesim hattını bir qy ile belirleyin ve ardından diyafram boyunca toraksın sol alt tarafına doğru dikey bir kesi yapın. Kalbi açığa çıkarmak için perikardı disseke edin ve frenik siniri kesin. Diyafram hareketlerini önlemek için, kalbi sağ tarafa doğru çevirmek amacıyla nemli bir pamuklu aplikatör kullanın.Sol koroner arteri veya LCA'yı belirleyin ve toraks açılışını optimize edin. Bunlar kalbin güvenli bir şekilde tutulmasını sağlar. Sütür yerleştirirken, işlem boyunca kalbi 37 °C'lik salinle ıslatılmış bir pamuk parçasıyla nemli tutun. Belirlendikten sonra, LCA'nın altına bir naylon sütür yerleştirin.Suturun her iki ucunu, küt kenarlı küçük bir plastik tüp parçasından geçirerek asılı ağırlık sistemini hazırlayın. Suturun her iki ucuna küçük birer ağırlık takın ve ağırlıkların bir çubuk üzerinden serbestçe sarkarak gerginlik oluşturması için çubuğa asın. LCA derhal tıkanmış olmalıdır. Başarılı.LCA oklüzyonu, damarın açık kırmızıdan koyu menekşe rengine ve damar tarafından beslenen miyokardın parlak kırmızıdan beyaza dönen anlık renk değişimiyle doğrulanabilir. Ağırlıklardaki basıncı hafifleterek LCA oklüzyonunu önceden belirlenmiş bir zamanda sonlandırın. Başarılı reperfüzyon, risk altındaki alanı belirlemek için rengin geri döndüğü an belirginleşir.Veya, LCA tıkanıkken aortaya %1 Evans blue boyası enjekte edin. Evans blue, r alanı hariç tüm miyokardiyal dokuyu maviye boyayacaktır.Enfarkt bölgesinin daha ayrıntılı analizi için kalbi çıkarın ve buz gibi soğuk, 0,9% sodyum klorür çözeltisiyle yıkayın. Kalbi %2'lik aeros içine yerleştirin ve 30 dakika boyunca dört santigrat derecede bekletin. Kalbi bir milimetre kalınlığında dilimler halinde kesin.Bir kalp matrisi veya mikrotom kullanarak, kesitleri %1 TTC ile 37 °C'de 10 dakika boyunca inkübe edin. Su banyosunda mavi kapaklı 15 ml'lik bir kap kullanarak, gelişimin ardından enfarkt alanı beyaz kalırken canlı dokular kırmızıya boyanacaktır. Bu teknik, miyokardiyal iskemi alanındaki araştırmacıların genetik ve farmakolojik modeller kullanarak kardiyoprotektif etkileri incelemelerine yol açmıştır.

use-of-a-hanging-weight-system-for-coronary-artery-occlusion-in-mice

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Iskemi nedeniyle akut böbrek hasarı için kesin bir fare modeli (AKI), akut böbrek hasarı incelemek ve muhtemelen böbrek hasarı tedavi etmek için tedavi araçları bulmak için önemli bir araçtır. Asılı ağırlık sistemi, böbrek tıkanıklığı neden olmadan, hızlı ve güvenilir renal arter oklüzyonu ve reperfüzyon bir araç sunuyor.

İzole Renal Arter Tıkanıklığı Asılı ağırlık Sistemi

Biz portal triad oklüzyonu Asılı ağırlık sisteminin yeni bir fare modelini kurdu. Bu teknik, sıçan karaciğer modellerinde iskemi gelecekteki araştırmalar için yararlı olabilir.

Farelerde Karaciğer İskemi için Asılı ağırlık Sistem Kullanımı

Çok sayıda genetik manipülasyonlar ve / veya genler, proteinler, hücre ve / veya biyomalzemeler intramiyokardiyal enjeksiyonu, akut iskemi / reperfüzyon hasarı ve farelerde kronik remodeling çalışmaları zaman boyutu üzerine bindirilmiş. Bu video iskemi / reperfüzyon için mikrocerrahi prosedürleri, kalıcı koroner arter ligasyonu ve intramiyokardiyal enjeksiyon çalışmaları göstermektedir.

Enfarktüsü bir murin Model Koroner Arter ligasyon ve intramiyokardiyal Enjeksiyon

Farelerde Deneysel miyokardiyal enfarktüs indüklemek için kullanılan cerrahi prosedür kalp ve akciğer sol ön yüzeyine görselleştirmek için üçüncü ve dördüncü kaburgalar arasındaki sol torakotomi ile başlar. Sol koroner arter ligasyonu olduğu, göğüs kapalı ve fare kendiliğinden kurtarmak için izin verilir.

Fare Koroner Arter Ligasyonu için Modifiye Tekniği

Cerrahi travma inflamatuvar yanıt indükler. Sitokinler ve endojen ligand iskemi ve reperfüzyon sonrası miyokard infarkt modüle bilinmektedir. Biz torakotomi etkilerini en aza indirmek için asılı ağırlıklar kullanılarak murin iskemi ve reperfüzyon değiştirilmiş bir kapalı göğüs modeli sunuyoruz.

Miyokard İskemi ve Reperfüzyon bir Mürin Kapalı göğüs Modeli

Bu videoda, sol ön inen koroner arteri kalıcı olarak bağlayarak miyokard enfarktüsünün bir fare modelini oluşturmak için cerrahi bir prosedürü açıklıyoruz.

Miyokard Enfarktüsünün Murin Modelinin Oluşturulması: Fare Modelinde Sol Ön İnen Koroner Arterin Kalıcı Ligasyonu İçin Cerrahi Bir İşlem

Kalp yetersizliği hastaneye yatışların önde gelen nedeni ve mortalitenin önemli bir nedenidir. Miyokard enfarktüsü sonrası ventriküler yeniden şekillenme ve kardiyak disfonksiyonu araştırmak için farelerde sol ön inen koroner arterin kalıcı ligasyonu modeli uygulanır. Farelerde invaziv hemodinamik ölçüm tekniği sunulmuştur.

Farelerde Sol Ön İnen Koroner Arter Daimi ligasyonu: Post-miyokard Enfarktüs Remodelling ve Kalp Yetmezliği Bir Model

entübasyon ile bir vantilatör kullanımını ortadan kaldırırken Minimal invaziv enine aort daralma (MTAC) normal enine aort daralma (TAC) temellerini korur. Özellikle translasyonel çalışmalarda sol ventrikül aşırı, yüksek verimli çalışmalar için oldukça aranan bir yöntem olduğu kanıtlanmıştır.

Farelerde Minimal İnvaziv Enine Aort Konstrüksiyon

Burada farelerde sol anterior inen koroner arterin kalıcı ligasyonunun nasıl elde edilebildiğini gösteren bir cerrahi prosedürü açıklıyoruz. Bu model miyokard enfarktüsü ve eşlik eden biyolojik süreçlerin patofizyolojisini araştırmak için yüksek öneme hemşilir.

Sol Anterior İnen Koroner Arterin Kalıcı Ligasyonu ile Murine Miyokard Enfarktüsü Modeli

Burada sunulan, farelerde sol koroner arterin kalıcı olarak bağlanması için cerrahi bir prosedürdür. Bu model, miyokard enfarktüsü sonrası patofizyolojiyi ve ilişkili inflamatuar yanıtı araştırmak için kullanılabilir.

Sol Koroner Arter Ligasyonu: Miyokard Enfarktüsünün Cerrahi Murin Modeli

Öğrenin fare koroner arter tıkanıklığı için asma ağırlık sistemini kullanarak miyokard iskemisini ve iskemik önkoşullandırmayı in vivo çalışın. Bu yöntem kardiyoprotektif mekanizmaları araştırmada kullanılır.

Asma Ağırlık Sistemi Fare Koroner Arter Tıkanıklığı için kullanın

Daha fazla video keşfet