Name: Diseksiyon ve boyanması Drosophila Larvaların Yumurtalıkların (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-05-13T12:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 40 s
Description: Öğrenin Drosophila larvalarının yumurtalıklarının diseksiyon ve boyama yöntemini. Konfokal mikroskopi ile kök hücre niş oluşumunu ve gelişimsel biyolojiyi inceleyin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Sohbet Marie Curie yeniden bütünleşme hibe ile desteklenmektedir. Bu çalışma, İsrail Bilim Fonu Hibe No ile desteklenmiştir. 1146-1108, Helen ve Weizmann Bilim Enstitüsü Kök Hücre Araştırma ve Leir Vakfı Martin Kimmel Enstitüsü.

1. Döşeme Yumurta <ol><li> Diseksiyonu beş gün önce: 2-4 saat evlendirilen kadın, maya ile desteklenmiş taze gıda yumurtalarını bırakmak için izin verir. Senkronize ve iyi gelişmiş larva almak önemlidir kalabalık değil kültürlü (yaklaşık 30 yumurta / 25mm flakon). Tipik olarak, ne kadar iyi onlar yatıyordu bağlı olarak 7-16 kadın, şişe başına kullanılır. </li></ol> 2. Larvaları seçilmesi <ol><li> Ringer orta (128mm NaCl, 2mm KCl, 1.8mm CaCl 2, 4mm MgCl 2, 35.5mM Sakkaroz, 5mM HEPES pH 6.9) ile dolu bir 9-iyi cam diseksiyon tabak hazırlayın. </li><li> Ringer orta ve buz üzerine yerleştirin içeren altı plaka hücre süzgeçler hazırlayın. Alternatif olarak, naylon örgü ile donatılmış özel yapılmış kalıplar kullanın. </li><li> Flakon duvarları ince biyolojik cımbızla (forseps) kullanarak zaman larvaların seçin ve ringer içeren diseksiyon çanak koyun. </li><li> Temiz bir iyi bir kadın larva transferi. Biz kendi gonadlar tarafından erkek kadın ayırt eder. Testislere kolayca yağ vücudun posterior üçte gömülü büyük açık oval olarak tanımlanır. Kadın yumurtalıklar, yağ vücudun aynı kısmında bulunan çok daha küçük, açık, yuvarlak bir küre olarak tespit edilebilir. </li></ol> 3. Larva diseksiyonu <ol><li> Forseps ile beyin sadece arka larva tutun ve ikinci bir çift forseps ile baş kaldırmak. </li><li> Trakea aşağı bakacak şekilde, sırt tarafında kalan arka kısmı yerleştirin. </li><li> Forseps bir çift ile arka spiracles larva tutun ve diğer çifti, yaklaşık yarım larva yağ vücut çıkıncaya kadar posteriora manikür sürgülü ise içe doğru yavaşça itin. </li><li> Posterior ucunu sıkıca tutun ve manikür gevşek tutmak için forseps diğer çifti kullanın. Posterior uç ve yavaşça çekmeye aralağından manikür ve bağlı bağırsak slayt böylece. Bu sürecin sonunda, bağırsak ve manikür yağ vücut tamamen ayrılmış olmalıdır. Bağırsakta yağ vücudun ön kısmından ayırın. Boyama ve montaj kolaylaştırmak için, yağ vücut sağlam kalacağını önemlidir. </li><li> Tercihen de içeren disseke larvaları, Ringer orta mera pipet ile iyice ıslatın. Bu katın pipet yardımcı olur ve yağ vücuda yapışmasını önler. Yağlı vücut hücre süzgeç buz Ringer ortama aktarmak için mera pipet kullanın. </li></ol> 4. Fiksasyon ve Boyama Tüm adımlar 4, ilk antikor ile inkübasyon dışında, oda sıcaklığında yapılır ° C <ol><li> Ringer orta% 5 Formaldehit yağ vücut inkübe edin. 20 dakika boyunca yavaşça sallanarak. </li><li> % 1 PBT (% 1 Triton PBS içinde x-100) ile 5 dakika yıkayınız. 10 dakika ve 45 dakika için üçüncü kez bu adımı tekrarlayın. % 1 Triton X-100 larva yumurtalık perfore ve antikorlar nüfuz izin gereklidir. </li><li> Yavaşça sallanarak ile 1 saat boyunca,% 0.3 PBTB (% 0.3 Triton X-100 ve PBS içinde% 1 BSA) Blok </li><li> 4 gece boyunca% 0.3 PBTB seyreltilmiş istenen 1. antikor ° C yavaşça sallanarak ile inkübe edin. Bu adım, genellikle bir rulo 0.2 ml tüpler yapılır. </li><li> Yağ vücut hücre süzgeçler geri aktarın. </li><li> Yavaşça sallanarak ile% 0.3 PBTB ile 3 kez, her biri 30 dakika yıkayın. </li><li> % 0.3 PBTB yavaşça sallanarak ile 1 saat süreyle% 5 normal eşek serum ile takviye ile engelleyin. </li><li> (Üreticisinin teknik verilerine göre) ile 2 saat boyunca yavaşça sallanarak engelleme solüsyonu (% 0.3,% 0.3 PBT% 5 normal eşek serum ile desteklenmiş PBTB) seyreltilmiş uygun bir ikincil antikor ile inkübe edin. Antikor floresan ise, bu noktadan itibaren karanlıkta inkübe edin. Bu adım, genellikle bir rulo 0.2 ml tüpler yapılır. </li><li> 3 kez her yavaşça sallanarak% 0.3 PBT ile 30 dakika yıkayın. </li></ol> 5. Montaj <ol><li> Yağlı vücut temiz Eppendorf tüpüne aktarın. Çok dikkatli bir şekilde bütün sıvılar kaldırmak ve hemen Vectashield montaj medya ile kaplayın. Yumurtalıkların yağ vücuttan ayrılmış edilirken sertleşme olmadığından rutin vectashield kullanın. Bir hafta için numuneler 4 ° C'de montaj medya saklanabilir. </li><li> Bir pipet ucu sonunda kesin ve dikkatli bir mikroskop lamı üzerine montaj medya minimal volüm (30mm kapak kayma için 30 ul) ile yağlı vücut aktarmak için kullanabilirsiniz. </li><li> Yağlı vücut yaymak için 0,1 mm çapında pimleri tutarak, iki nikel kaplama pin sahipleri kullanın. Yumurtalıklar yağ vücudun posterior üçte yer almaktadır. Bunları çevreleyen yağ vücut genellikle bir 'çiçek' şeklindedir. Bu yumurtalıkların yerini belirlemenize yardımcı olur. Yağ vücudun geri kalanına 'çiçekler' inceleyin ve ikincisi atın. </li><li> Yağlı vücut surro çıkarındikkatli bir şekilde iki iğne etrafında geçerek gonad unding. Yağlı vücut kalıntı uzak slayt izole gonad yerleştirin. </li><li> Oje ile bir kapak kayma ve mühür ile kaplayın. </li><li> Konfokal bir mikroskop kullanılarak doğrudan gözünüzde canlandırın. Numuneler üç hafta kadar 4 ° C'de muhafaza edilebilir. </li></ol> 6. Temsilcisi Sonuçlar Lerin ve onların somatik nişler da dahil olmak üzere, somatik yumurtalık içinde birkaç hücre soyları, kurulmasını takip için yukarıdaki protokolünü kullandık. Bu amaçla, gelişmekte olan gonad farklı hücre tipleri ayırt etmek için özel antikorlar ve işaretleri kullanabilirsiniz. Burada antikorların farklı kombinasyonları ile boyanmış iki LL3 yumurtalıkların bir örnek göstermektedir. Şekil 1A birlikte niş somatik hücre oluşturan terminal filament ve kap hücreleri (yeşil), vurgulamaktadır. Şekil 1B, germ hücreleri (mavi) doğrudan temas Puntolu hücreler (IC, macenta) gösterir. <img src="/files/ftp_upload/2537/2537fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1 LL3 yumurtalıklar. (A) monoklonal antikor 1B1 (magenta), somatik hücre ve lekeleri fusome PGCs içinde bir hücre içi organel (oklar) özetlenir. Arttırıcı tuzak ss-lacZ (anti-β-galaktosidaz, yeşil) terminali filamentler olarak ifade edilir. Tabanda filament somatik kap hücreleri (ok başları) görülebilir. (B) 1B1 antikor (yeşil), yumurtalık tüm somatik hücre özetliyor. Anti-Vasa (mavi), tüm PGCs etiketler. PGCs doğrudan Puntolu hücreler (IC, anti-trafik sıkışıklığı, kırmızı) başvurun. Bar (A ve B için) 20 mikron.

<ol><li>Fuller, M. T., Spradling, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Male+and+female+Drosophila+germline+stem+cells%3A+two+versions+of+immortality%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Male and female Drosophila germline stem cells: two versions of immortality.</a> Science. 316, 402-404 (2007).</li>
<li>Li, L., Xie, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cell+niche%3A+structure+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+review+of+cell+and+developmental+biology%22%5BJournal%5D)">Stem cell niche: structure and function.</a> Annual review of cell and developmental biology. 21, 605-631 (2005).</li>
<li>Chen, D., McKearin, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+circuitry+controlling+a+stem+cell+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Gene circuitry controlling a stem cell niche.</a> Curr Biol. 15, 179-184 (2005).</li>
<li>Kai, T., Spradling, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+empty+Drosophila+stem+cell+niche+reactivates+the+proliferation+of+ectopic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">An empty Drosophila stem cell niche reactivates the proliferation of ectopic cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 100, 4633-4638 (2003).</li>
<li>Kai, T., Spradling, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiating+germ+cells+can+revert+into+functional+stem+cells+in+Drosophila+melanogaster+ovaries%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Differentiating germ cells can revert into functional stem cells in Drosophila melanogaster ovaries.</a> Nature. 428, 564-569 (2004).</li>
<li>Lopez-Onieva, L., Fernandez-Minan, A., Gonzalez-Reyes, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Jak%2FStat+signalling+in+niche+support+cells+regulates+dpp+transcription+to+control+germline+stem+cell+maintenance+in+the+Drosophila+ovary%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Jak/Stat signalling in niche support cells regulates dpp transcription to control germline stem cell maintenance in the Drosophila ovary.</a> Development. 135, 533-540 (2008).</li>
<li>Song, X., Zhu, C. H., Doan, C., Xie, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Germline+stem+cells+anchored+by+adherens+junctions+in+the+Drosophila+ovary+niches%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Germline stem cells anchored by adherens junctions in the Drosophila ovary niches.</a> Science. 296, 1855-1857 (2002).</li>
<li>Tazuke, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+germline-specific+gap+junction+protein+required+for+survival+of+differentiating+early+germ+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">A germline-specific gap junction protein required for survival of differentiating early germ cells.</a> Development. 129, 2529-2539 (2002).</li>
<li>Xie, T., Spradling, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((decapentaplegic+is+essential+for+the+maintenance+and+division+of+germline+stem+cells+in+the+Drosophila+ovary%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">decapentaplegic is essential for the maintenance and division of germline stem cells in the Drosophila ovary.</a> Cell. 94, 251-260 (1998).</li>
<li>Xie, T., Spradling, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+niche+maintaining+germ+line+stem+cells+in+the+Drosophila+ovary%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">A niche maintaining germ line stem cells in the Drosophila ovary.</a> Science. , 290-328 (2000).</li>
<li>Guo, Z., Wang, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+glypican+Dally+is+required+in+the+niche+for+the+maintenance+of+germline+stem+cells+and+short-range+BMP+signaling+in+the+Drosophila+ovary%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The glypican Dally is required in the niche for the maintenance of germline stem cells and short-range BMP signaling in the Drosophila ovary.</a> Development. 136, 3627-3635 (2009).</li>
<li>Wang, X., Harris, R. E., Bayston, L. J., Ashe, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Type+IV+collagens+regulate+BMP+signalling+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Type IV collagens regulate BMP signalling in Drosophila.</a> Nature. 455, 72-77 (2008).</li>
<li>Godt, D., Laski, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+cell+rearrangement+and+cell+recruitment+in+Drosophila+ovary+morphogenesis+and+the+requirement+of+bric+a+brac%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of cell rearrangement and cell recruitment in Drosophila ovary morphogenesis and the requirement of bric a brac.</a> Development. 121, 173-187 (1995).</li>
<li>Sahut-Barnola, I., Godt, D., Laski, F. A., Couderc, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+ovary+morphogenesis%3A+analysis+of+terminal+filament+formation+and+identification+of+a+gene+required+for+this+process%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+biology%22%5BJournal%5D)">Drosophila ovary morphogenesis: analysis of terminal filament formation and identification of a gene required for this process.</a> Developmental biology. 170, 127-135 (1995).</li>
<li>Song, X., Call, G. B., Kirilly, D., Xie, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Notch+signaling+controls+germline+stem+cell+niche+formation+in+the+Drosophila+ovary%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Notch signaling controls germline stem cell niche formation in the Drosophila ovary.</a> 134, 1071-1080 (2007).</li>
<li>Zhu, C. H., Xie, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clonal+expansion+of+ovarian+germline+stem+cells+during+niche+formation+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Clonal expansion of ovarian germline stem cells during niche formation in Drosophila.</a> Development. 130, 2579-2588 (2003).</li>
<li>Ward, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cells+signal+to+the+niche+through+the+Notch+pathway+in+the+Drosophila+ovary%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Stem cells signal to the niche through the Notch pathway in the Drosophila ovary.</a> Curr Biol. 16, 2352-2358 (2006).</li>
<li>Gilboa, L., Lehmann, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repression+of+primordial+germ+cell+differentiation+parallels+germ+line+stem+cell+maintenance%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Repression of primordial germ cell differentiation parallels germ line stem cell maintenance.</a> Curr Biol. 14, 981-986 (2004).</li>
<li>Gilboa, L., Lehmann, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Soma-germline+interactions+coordinate+homeostasis+and+growth+in+the+Drosophila+gonad%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Soma-germline interactions coordinate homeostasis and growth in the Drosophila gonad.</a> Nature. 443, 97-100 (2006).</li>
</ol>

Bu video geç üçüncü instar larva yumurtalıkların bir izolasyon ve boyama protokolü göstermektedir. Bu protokol rutin ve güvenilir yapmak için, dikkat, aşağıdaki noktalara dikkat edilmelidir: <ol><li> Senkronize ve iyi gelişmiş larvalar için, üzerinde kalabalık kaçınılmalıdır. </li><li> Küçük saydam yumurtalıkların kaybını önlemek için, yağ vücut sağlam incelemek için emin olun. Bu aynı zamanda, özellikle (ikinci ya da üçüncü instar başında) genç yumurtalıklar montaj, montaj aşamasında yumurtalıkların yerini yardımcı...

<table><tbody><tr><td>NaCl</td><td>JT Baker</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kcl</td><td>Merck &amp;amp; Co., Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CaCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MgCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;</td><td>Merck &amp;amp; Co., Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sükroz</td><td>JT Baker</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hepes</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bovin Albümin Fraksiyon V</td><td>MP Biomedicals</td><td>160069</td><td></td></tr><tr><td>Dumont biyoloji pensi 5 dumstar cilalı</td><td>Fine Science Tools</td><td>11295-10</td><td></td></tr><tr><td>Nikel kaplı pin tutucu</td><td>Fine Science Tools</td><td>26018-17</td><td></td></tr><tr><td>paslanmaz çelik minutien pinler 0.1mm çap, 10mm boy</td><td>Fine Science Tools</td><td>26002-10</td><td></td></tr><tr><td>9 kuyucuklu plakalar 85X100 mm, 22mm dış çap x 7mm derinlik</td><td>Corning</td><td>7220-85</td><td></td></tr><tr><td>Standart iletim ışığı tabanlı TL ST'ye sahip Stereo Mikroskop MZ 16.5</td><td>Leica Microsystems</td><td></td><td></td></tr><tr><td>6 kuyucuklu plakalar</td><td>Costar</td><td>3516</td><td></td></tr><tr><td>Lamlar</td><td>Menzel-Glaser</td><td>798</td><td></td></tr><tr><td>Lameller</td><td>Corning</td><td>2940-223</td><td></td></tr><tr><td>Montaj medyası</td><td>Vectashield</td><td>H-1200</td><td></td></tr><tr><td>Hücre süzgeci</td><td>Falcon BD</td><td>FAL352350</td><td></td></tr><tr><td>1B1 antikoru</td><td>Developmental Studies Hybridoma Bank</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anti-Traffic Jam</td><td>Laboratory of Dr. Dorothea Godt</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anti-Vasa</td><td>Laboratory of Dr. Ruth Lehmann</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anti &amp;#946;-Galaktosidaz</td><td>Cappel</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sekonder Antikorlar</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

diseksiyon ve boyanması drosophila larvaların yumurtalıkların

Dissection and Staining of Drosophila Larval Ovaries

Birçok organların embriyogenez sırasında ve yetişkin ömrü boyunca bakım ve onarım için onların gelişimi için kök hücreleri bağlıdır. Onların çevre ile etkileşim kök hücre nasıl form ve nasıl olduğunu anlamak geliştirme, homeostaz ve hastalığı anlamak için bu nedenle çok önemlidir. Meyve sineği Drosophila melanogaster yumurtalık somatik destek hücreleri (niş) 1, 2 germ line kök hücreler (lerin) etkileşim için etkili bir model olarak görev yaptı. Genetik olarak onları manipüle etme yeteneği ile birleştiğinde, niş ve lerin bilinen yerde, araştırmacılar kök hücreleri ve nişler 3-12 arasındaki etkileşimleri çeşitli aydınlatmak için izin verdi. GSC bakım ve farklılaşma kontrol mekanizmaları hakkında bilgi zenginliği rağmen, nispeten daha az lerin ve somatik nişler gelişimi sırasında formu hakkında bilinmektedir. Olan hücresel bileşenleri terminal filament ve kap hücreleri (Şekil 1), 13-17 sırasında instar üçüncü larva formu somatik nişler, yaklaşık 18. Lerin primordial germ hücrelerinin (PGCs) kaynaklanır. PGCs erken larva aşamasında çoğalırlar, ancak niş oluşumu takip PGCs bir alt lerin 7, 16, 18, ​​19 olur. Birlikte, somatik niş hücre ve lerin organizmanın ömrü boyunca yumurta üreten işlevsel bir birim. GSC birim oluşumu ile ilgili birçok soru cevapsız kalmaktadır. Prekürsör hücreler, nişler ve kök hücre öncülleri veya lerin haline PGCs içinde asimetri nesil arasında koordinasyon gibi işlemler en iyi larva incelenebilir. Bununla birlikte, larva yumurtalık gelişme metodik bir çalışma, fiziksel olarak zordur. Birincisi, larva, yumurtalıklar küçük. Geç larva aşamasında bile onlar arasında sadece 100μm. Buna ek olarak, yumurtalıklar, şeffaf ve beyaz yağ vücut gömülü. Burada floresan antikorlar ile boyanarak takip geç üçüncü instar (LL3) Drosophila larvaları, yumurtalıklar izole etmek için bir adım-adım protokolünü açıklar. Biz, gibi sorunlar, yumurtalıkların yerini, lavabo değil doku boyama ve yıkama ve antikorlar doku içine nüfuz emin olun bazı teknik çözümler sunuyoruz. Bu protokol, daha önce larva aşamaları ve larva testisler gibi uygulanabilir.

Nişler ve kök hücre gelişimi sırasında formu nasıl pratik etkileri olan önemli bir soru. Giriş<em&gt; Drosophila</em&gt; Yumurtalık, germ line kök hücreleri ve somatik nişler larva gelişimi sırasında oluşturur. Bu video geç üçüncü instar (LL3) kadın gonadlar, teşrih leke ve monte etmek için nasıl gösterir<em&gt; Drosophila</em&gt; Larvaları.

Diseksiyon ve boyanması Drosophila Larvaların Yumurtalıkların

Birçok organ, embriyogenez sırasındaki gelişimleri ve yetişkinlik dönemindeki bakımları veya onarımları için kök hücrelere bağımlıdır. Kök hücrelerin nasıl ...

Bu prosedürün genel amacı, üçüncü instar döneminin sonlarındaki drosophila larvalarından izole edilen yumurtalıkların konfokal mikroskop ile görüntülenmesidir. Bu işlem, öncelikle senkronize bir popülasyondan dişi larvaların seçilmesiyle gerçekleştirilir. Prosedürün ikinci adımı, sağlam bir yağ vücudunun diseke edilmesi, bağırsak ve kütikülden ayrılması ve buz üzerine yerleştirilmesidir.Prosedürün üçüncü adımı, gömülü yumurtalıklarla birlikte yağ vücudunun fiksasyonu, boyanması ve yıkanmasıdır. Prosedürün son adımı ise montaj sırasında yumurtalıkların yağ vücudundan ayrılmasıdır. Sonuç olarak, immünofloresan mikroskopi aracılığıyla hücreye özgü boyamanın görüldüğü sonuçlar elde edilebilir.Genellikle, bu yöntemde yeni olan kişiler, hassas diseksiyonlar ve montaj işlemleri çok fazla pratik gerektirdiği için zorlanacaklardır. Diseksiyondan beş gün önce, 25 mm'lik taze bir sinek besini şişesine maya ekleyin. Şişenin içine çiftleşmiş 7 ila 16 dişi meyve sineği yerleştirin.Dişilerin iki ila dört saat boyunca veya vial başına yaklaşık 30 yumurta olana kadar yumurta bırakmalarına izin verin. Yumurta içeren vialleri 25 °C'de ve minimum %70 nemde inkübe edin. Beş gün sonra, larvalar üçüncü i

dissection-and-staining-of-drosophila-larval-ovaries

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu video, Drosophila yumurtalığının genel anatomisini açıklar ve canlı veya sabit görüntüleme için yumurtalıkları diseksiyon yöntemini içerir.

Drosophila melanogaster Over Diseksiyonu: Ex Vivo Doku Hazırlığı İçin Bir Teknik

İmmün boyama, dokulardaki belirli hücre tiplerini ve proteinleri görselleştirmek için etkili bir tekniktir. Sonikasyonu kullanarak, burada açıklanan protokol, immünostainingden önce Drosophila melanogaster dokularını geç evre embriyolardan ve larvalardan ayırma ihtiyacını hafifletir. Formaldehitle sabitlenmiş bütün mount larvalarının immün boyaması için etkili bir metodoloji sunuyoruz.

Geç evre embriyonik ve larva soniklenmesi-kolaylaştırdı Immunoflorasan Boyama<em&gt; Drosophila</em&gt; Dokular<em&gt; Yerinde</em

Drosophila'nın yetişkin yapıları, hayali diskler adı verilen kese benzeri yapılardan türetilmiştir. Bu disklerin analizi, doku tayini, kompartman sınırı oluşturma, hücre proliferasyonu, hücre kaderi spesifikasyonu ve düzlemsel hücre polaritesi dahil olmak üzere birçok gelişimsel süreç hakkında bilgi sağlar. Bu protokol, ışık/floresan mikroskobu için hayali diskleri hazırlamak için kullanılır.

Diseksiyon ve hayali Disklerin immün itibaren Drosophila melanogaster

Bu protokolde açıklanan dik görüntüleme yöntemi, gelişmekte olan bir Drosophila melanogaster yumurtasının kutuplarının ayrıntılı olarak görüntülenmesine olanak sağlar.  Bu uçtan bakış, foliküler epitelde çoklu hücre tiplerinin düzenlemelerine ve morfolojilerine yeni bir bakış açısı sağlar.

Dik Görüntüleme<em&gt; Drosophila</em&gt; Yumurta Odaları

Yaprak biti embriyoları üzerinde tam montajlı immün boyama protokolü sunulmuştur, burada arka plan boyamasını azaltmak ve doku geçirgenliğini artırmak için kritik koşullar ele alınmaktadır. Bu koşullar, yaprak bitlerinin embriyonik dokularında protein ekspresyonunun etkili bir şekilde tespit edilmesi için özel olarak geliştirilmiştir.

Bezelye Afit Embriyolar immün için kritik Koşulların Belirlenmesi: Doku geçirgenliğini arttırarak ve Arka Plan Boyama azaltılması

Biz diseksiyon, tespit ve steroid hormon biyosentezi ve düzenleyici mekanizma çalışmaya Drosophila larvaları ve yetişkin kadınlarda Sterpidojenik organların immün için bir protokol açıklar. steroidojenik organlara ek olarak, böyle germ çizgili kök hücreleri gibi steroidojenik organların innervasyon olarak steroidojenik hedef hücreleri görselleştirmek.

Sineği boyanmasına ile steroidogenik organları ve İnteraktif Organlar görselleştirme için Protokoller<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Drosophila yumurtalık kök hücre niş geliştirme eğitim için mükemmel model bir sistemdir. Larva ve yetişkin yumurtalık dissekan için yöntemleri yayımlanmış olsa, Pupa yumurtalık diseksiyonlarının ayrıntılı olarak yayınlanmamıştır farklı teknikler gerektirir. Burada diseksiyon, boyama ve pupa yumurtalık montaj için bir protokol anahat.

Diseksiyon ve Drosophila pupa yumurtalık boyama

Burada, lipit damlacılığa özgü floresan boya olan BODIPY 493/503 kullanılarak Drosophila larvalarında oenositlerin diseksiyon ve lipid damlacık boyama sıyrıklarının diseksiyonu ve lipid damlacık boyaması için ayrıntılı yöntemler sunulmuştur.

Drosophila Larvalarında Oenositlerin Diseksiyonu ve Lipid Damlacık Boyaması

Burada, geç embriyonik Drosophila erkek gonadını canlı olarak görüntülemek için gerekli bir diseksiyon protokolü sunuyoruz. Bu protokol, normal koşullar altında veya transgenik veya farmakolojik manipülasyondan sonra dinamik hücresel süreçlerin gözlemlenmesine izin verecektir.

Geç Embriyonik Drosophila Gonad'ın Diseksiyonu ve Canlı Görüntülemesi

Bu protokolün amacı, Drosophila yumurtalıklarındaki hücre altı yapıların lokalizasyonu ve dinamikleri üzerindeki oksidatif hasarın etkilerini görselleştirmek için canlı görüntüleme kullanmaktır.

Canlı Görüntüleme Kullanarak Oksidatif Hasarın Drosophila Yumurta Odaları Üzerindeki Etkilerini Görselleştirme

Bodrum zarı, gelişim sırasında doku ve organ morfogenezi için gereklidir. Bu yapının uygun şekilde yerleştirilmesine yol açan mekanizmaları daha iyi anlamak için, sunulan protokol, konfokal ve süper çözünürlüklü mikroskopi kullanarak epitel hücrelerinde bazal membran proteinlerinin hücre içi kaçakçılığını ve sekresyonunu görselleştirmek ve karakterize etmek için yöntemleri açıklamaktadır.

Drosophila Oogenezi Sırasında Polarize Hücre İçi Kaçakçılığın ve Bazalton Membran Proteinlerinin Sekresyonunun Konfokal ve Süper Rezolüsyonlu Görüntülenmesi

Öğrenin Drosophila larvalarının yumurtalıklarının diseksiyon ve boyama yöntemini. Konfokal mikroskopi ile kök hücre niş oluşumunu ve gelişimsel biyolojiyi inceleyin.

Diseksiyon ve boyanması Drosophila Larvaların Yumurtalıkların

Daha fazla video keşfet