Name: Yetişkin doğmuş Nöronlar Entegrasyon incelenmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-03-25T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min
Description: Öğrenin yetişkin fare hipokampusunda yeni doğan dentat granül hücrelerinin fonksiyonel sinaptik entegrasyonunu incelemek için retroviral etiketleme ve tam hücre yama kelepçesi yöntemlerini. Bu teknik nörogenez araştırmalarında devre oluşumunu analiz eder.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma NINDS ve S.Ge. Amerikan Kalp Derneği tarafından finanse edildi Bu yaklaşım başlangıçta Johns Hopkins Üniversitesi&#39;nden Dr. Hongjun Song laboratuvarda yazar tarafından kurulmuş ve geliştirilmiştir. Dr Hongjun Song Biz onun rehberlik ve destek için teşekkür etmek istiyorum.

1. Virüs Enjeksiyon Yüksek titrede mühendislik retrovirüs (1 × 10 9 birim / ml) co-retroviral vektörlerin transfeksiyon tarafından üretilen ve viral süpernatant Ultrasantrifügasyon tarafından takip HEK293T hücreleri içine VSVG. Kaynakları ve üretim yöntemleri, mükemmel vallahi gösteri (3) bkz. Not: Genç yetişkin (4-6 hafta) kadın C57BL / 6 fareler (Charles Nehri) standart şartlar altında muhafaza edilir. Tüm işlemler, Ulusal Araştırma Konseyi, Stony Brook Üniversitesi IACUC tarafından onaylanmış bir protokol kapsamında laboratuvar hayvanlarının bakımı ve kullanımı Kılavuzu izleyin. <ol><li> Buz üzerinde hayvan başına dondurulmuş retrovirüs çözülme 2ul. </li><li> Anesteziyoloji (100 mg ketamin + gram vücut ağırlığı başına 10 mg ksilizin) ve hayvan stereotaksik bir çerçeve (Steolting) monte edilir. Kafasına saç çıkarın ve% 70 etanol ile cilt silin. </li><li> Açığa kafatası ve diş aşağıdaki koordinatları bir matkap kullanarak (0.6mm matkap ucu) dört sığ delik: <ul><li> anterioposterior = -2 mm bregma; yanal = ± 1.6 mm; ventral = 2.5 mm; anterioposterior bregma = -3 mm; yanal = ± 2.6 mm; ventral = 3.2 mm. </li><li> anterioposterior = -2 mm bregma; yanal = ± 1.6 mm; ventral = 2.5 mm; anterioposterior bregma = -3 mm; yanal = ± 2.6 mm; ventral = 3.2 mm. </li></ul></li><li> Mount 1μl Hamilton, düz ucu şırınga ve sitenin yüzde 0,5 'ul retrovirüs 0.25 ul / dak hızında dentat girus içine enjekte edilir. Yavaş yavaş sıvı akışı önlemek için şırınga çekilmeden önce her enjeksiyondan sonra (ventral derinliği için yukarıdaki koordinatları bakınız.) Pause 2 dakika. Enjeksiyonlar arasındaki kısaca steril PBS ile şırınga ucu ve kan izlerini kaldırmak için bir aplikatör dış yüzeyi durulayın. </li><li> , Steril cerrahi sütür malzeme ile yara (P-1 Tipi Boyutu 6-0) kapatın ve enjeksiyondan sonra istenilen zaman aşamalarına kadar standart konut koşulları hayvan . </li></ol> 2. Dilim Hazırlık Erişkin farelerde yüksek kaliteli akut dilimler elde etmek için, (aşağıya bakın) dilim hazırlanması için modifiye edilmiş bir kesim çözüm. <ol><li> 0-4 ° C,% 95 ile buz ve kabarcık O 2 -5% CO 2 için en az 30 dakika ön-chill kesim çözüm . </li><li> Anesteziyoloji ve buz gibi oksijen doymuş kesim çözüm ile bir hayvan transcardially serpmek. </li><li> Hızlı soğuk, oksijenli kesim çözüm filtre kağıdı ile önceden ıslatılmış bir petri yemek beyin kaldırmak. Beyincik kesiniz ve en az 1mm anterior montaj yüzeyine (görünür) enjeksiyonu koordinatları dilim. Tutkal beyin üzerine bir vibrotome aşamada soğuk ve oksijenli kesim çözümü ile dolu kesme odasına monte. </li><li> Koronal veya yatay dilim (300-350μm) hazırlayın ve oda sıcaklığında ACSF içeren bir kuluçka odasına, büyük çaplı bir pipet yardımıyla transfer% 95 O 2 /% 5 CO 2 ile kabarmış. </li><li> Dilimleri, sürekli köpürme, 30-60 dakika süreyle 32 ° C'de inkübe edin. Kayıt süresi boyunca oda sıcaklığında odasına dönün. </li></ol> 3. Elektrofizyolojik deneyler <ol><li> 34 ° C - 32 ° C'de sürekli oksijen doymuş ACSF ile perfüze kayıt odasına Dilimleri aktarılır </li><li> Bipolar tungsten stimülasyon elektrot, düşük bir büyütme mikroskop objektif (10X) kullanarak dentat girus moleküler tabaka yerleştirilir. </li><li> Alt-granüler bölge / granüler hücre katmanı Yenidoğan KEGM GFP veya dTomato ifade tarafından tespit edilir. Tüm hücre patchclamp kayıt altında yeni doğmuş nöronlar yüksek büyütme (40X) yapılır. </li><li> Kaydedilen hücreleri Ateşleme özellikleri akım kelepçe modunda altında akımların bir dizi enjeksiyon yoluyla elde edilir. </li><li> Elektrik uyaranlara kayıt yazılımı tarafından kontrol edilen bir stimülasyon izolatör üzerinden uyarılması elektrot tarafından teslim ve kaydedilir yenidoğan KEGM postsinaptik akımların uyarılmış. </li></ol> 4. Veri Analizi Yetişkin doğumlu nöronların farklı gelişim evreleri, uyarılmış postsinaptik yanıtlar genlikleri analiz edilmektedir. 5. Temsilcisi Sonuçlar Yukarıdaki protokolünü kullanarak, Şekil 1 'e benzer yenidoğan dentat girus nöronlarda GFP ifade yaygındır. Yeni doğan nöronlar kolayca görüntülenebilmekte ve hem dendrit ve aksonlar sağlam etiketli olduğunu unutmayın. Kalite ve virüs titresi, kullanılan organizatörü ve in vivo ifade uzunluğu, ince DGC aksonlar ve küçük dikenler İfade bağlıdır. Bizim ellerde, yenidoğan hücreleri ve alt hücresel organelleri genellikle enjeksiyonu takiben bir kaç gün içinde görünür ve omurga ifade gelişiminin erken aşamalarında takip edilebilir. Wfarklı zaman aşamasında yeni doğmuş nöronlar delik hücre kayıtları benzersiz yeni doğan hücre özelliklerini, örneğin aksiyon potansiyelleri (Şekil 2a), sinaptik entegrasyon sürecinin yanı sıra olgunlaşma (Şekil 2b) sırasında mevcut nöral devrelerin çalışma izin verir. <img src="/files/ftp_upload/2548/2548fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1 yetişkin bir farenin yatay bir dentat girus bölümünde yeni doğan nöronlar 2 foton konfokal görüntü. Yeşil hücrelerin 21dpi (gün enjeksiyon) GFP ifade pUX-GFP retrovirüs ile etiketli yeni doğan KEGM. <img src="/files/ftp_upload/2548/2548fig2.jpg" alt="Şekil 2" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Şekil 2"> Şekil 2) Aksiyon potansiyeli, 21, yeni doğan bir DGC özellikleri ateş dpi b) temsilcisi, 21 dpi çözünürlükte yeni doğmuş bir DGC kaydedilmiş eksitatör postsinaptik akımlar (EPSCs ) uyandırdı.

<ol><li>Zhao, C., Deng, W., Gage, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+and+functional+implications+of+adult+neurogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Mechanisms and functional implications of adult neurogenesis.</a> Cell. 132, 645-660 (2008).</li>
<li>Ge, S., Goh, E. L., Sailor, K. A., Kitabatake, Y., Ming, G. L., Song, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GABA+regulates+synaptic+integration+of+newly+generated+neurons+in+the+adult+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">GABA regulates synaptic integration of newly generated neurons in the adult brain.</a> Nature. 439, 589-593 (2006).</li>
<li>Gavrilescu, L. C., Van Etten, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+replication-defective+retrovirus+by+transient+transfection+of+293T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Production of replication-defective retrovirus by transient transfection of 293T cells.</a> J Vis Exp. , (2007).</li>
</ol>

Yetişkin memelilerin beyinlerinin hippocampus bölgesinde Sürekli nöron olgun beyindeki nöronal gelişim ve entegrasyon çalışmak için benzersiz bir deneysel model sistemi sağlar. Burada sunulan protokol retroviral etiketleme ve elektrofizyolojik yöntemler, yetişkin farelerin beyinlerinde yenidoğan dentat granül nöronların entegrasyonu çalışma birleştirir. Deneylerde başarılı olmasını sağlamak için, prosedürün kritik adımlar sırasında aşağıdaki öneriyor: Istenmeyen enfeksiyon ve inflamasyon önlemek için ameliyat öncesi tüm araçlar (otoklav, sterilizatör herhangi bir tür veya% 70 etanol) sterilize edilmelidir. Enjeksiyondan önce şırınga iğne ucu steril PBS yıkamak için kullanın. Virüs enjeksiyon için, hayvanların iyi stereotaksik cihaz monte edilmesi gerekir ve enjeksiyon sırasında gereksiz hareketinin kaynakları minimize edilmelidir. Kafası iyi sabit ve sağlam olduğundan emin olun ve seviyesi bregma ve lambda hesaplanırken enjeksiyon koordinatları önce burun farenin konumunu ayarlamak. Oda sıcaklığında maruz kalma en aza indirmek için virüs hızla şırıngaya Extract - retrovirüsler özellikle ısıya duyarlı. Basınç hasarı en aza indirmek için tavsiye edilen oranda yavaş virüs enjekte edilir. Önerilen düz uçlu bir enjektör (vs ortak Eğimli ucu) eşit olarak dağıtılmış bir dentat girus enfeksiyon alan sağlayacaktır. Hazırlamadan önce dilim, çözüm kesme ve ACSF kuluçka oksijen çözümleri doyurmak için izin vermek için en az 30 dakika süreyle% 95 O 2 -5% CO 2 ile kabarmış olmalıdır . Hayvanlar hızla perfüze ve doku soğuk, en iyi dilim kalitesi için oksijen doymuş çözüm sağlanmalıdır. Postsinaptik bir yanıt gelene kadar kayıt için, yavaş yavaş uyaran yoğunluğunu artırır. Dentat girus moleküler katman içinde gerektiğinde uyarı elektrot yerini değiştirin. Özet olarak, önerilen yaklaşım, aktif, olgun devresi içine erken evre entegrasyonu sırasında farklı özellikleri ve yetişkin doğumlu nöronların olası fonksiyonel rolleri keşfetmek için bir yol sunar.

<ul><li> Kesme: 110 kolin klorür, 2.5 KCl, 1.3 KH 2 PO 4, 25.0 NaHCO 3, 0.5 CaCl 2, 7 MgCl 2, 10 dekstroz, 1.3 sodyum askorbat, 0.6 sodyum piruvat, 5.0 kynurenic asit çözeltisi (mM). </li><li> Yapay beyin-omurilik sıvısı (ACSF, mM): 125,0 NaCl, NaHCO 3 25.0, 2.5 KCl, CaCl 2, 2, 1.3 KH 2 PO 4, 1.3 MgCl 2, 1.3 sodyum askorbat, 0.6 sodyum piruvat, 10 dekstroz . </li><li> Tam hücreli patchclamp İç çözeltisi (mM): 120 Potasyum glukonat, 15 KCl, 4 MgCl 2, 0.1 EGTA, 10,0 Hepes, 4 MgATP, 0.3, Na 3 GTP, 7 phosphocreatine (pH 7.4, 300 mOsm). </li></ul>

yetişkin doğmuş nöronlar entegrasyon incelenmesi

Studying the Integration of Adult-born Neurons

Nöron lateral ventrikülün alt-ventriküler zon (SVZ) ve hayatı boyunca hipokampal dentat girus alt granüler bölgesi (SGZ) yetişkin memelilerin beyinlerinde oluşur. Önceki raporlar, epilepsi, şizofreni, depresyon ve anksiyete (1) de dahil olmak üzere çeşitli beyin bozuklukları, yetişkin hipokampal nöron ile ilişkili olduğunu göstermiştir. Normal ve anormal yetişkin doğumlu nöron entegrasyon süreci Deşifre bu hastalıkların etyolojisi ışık tutacak ve yeni tedavilerin geliştirilmesi bilgilendirebilir. SGZ yetişkin nöron kaderi şartname, göç, sinaptik bütünleşme ve olgunlaşma aşamaları da dahil olmak üzere, embriyonik ve post-natal nöronal gelişim aynalar. Ancak, tam entegrasyon, 6 haftalık uzun bir süre içinde oluşur. İlk sinaptik giriş yetişkin doğumlu SGZ dentat granül hücreleri (KEGM), 14 gün (2) glutamaterjik girişi takiben, GABAerjik . Dentat girus yetişkin doğumlu nöronların devre oluşumunu düzenleyen özgü faktörler henüz bilinmemektedir. Laboratuvarımız bu hızla çoğalan hücreleri floresan proteinleri ve hipotez düzenleyici genler teslim Moloney fare lösemi virüsü dayalı bir çoğaltma eksikliği retroviral vektör kullanır. Bu viral teknik hücre doğum tarihini, soy, morfoloji ve sinaptogenez analizi için yüksek özgüllük ve çözünürlük sağlar. Tipik bir deney, genellikle benzersiz bir etiket, transgen, ve in vivo olarak istenen bir gelişim sürecinin tek hücreli analiz için organizatörü unsurları içeren iki ya da üç virüsler kullanmaktadır. Aşağıdaki protokol fonksiyonel yeni doğan nöron entegrasyonu tek bir yeşil (GFP) veya kırmızı (dTomato) floresan proteini retrovirüs ve yama klemp elektrofizyoloji kullanarak analiz etmek için bir yöntem açıklanır.

Yetişkin hayvanlarda yenidoğan dentat granül hücrelerin entegrasyonu çalışma bir şekilde açıklanmıştır. Bu teknik, yeni doğan nöronlar, in vivo işlevsel entegrasyonu belirlemek için elektrofizyolojik kayıtlar takip etiketlemek için tasarlanmış bir retrovirüs kullanır.

Yetişkin doğmuş Nöronlar Entegrasyon incelenmesi

Nörojenez, yetişkin memeli beyinlerinde lateral ventrikülün subventriküler zonunda (SVZ) ve ...'nin subgranüler zonunda (SGZ) meydana gelir.

Bu prosedürün genel amacı, yetişkin dönemde doğan dentat granül hücrelerin fonksiyonel entegrasyonunu incelemenin bir yolunu sunmaktır. Bu işlem, öncelikle yeni doğan dentat granül hücrelerini işaretlemek amacıyla yetişkin farelerin dentat girusuna stereotaksik yöntemle retrovirüs enjekte edilerek gerçekleştirilir. Prosedürün ikinci adımı, farelerin belirli zaman aşamalarında soğuk kesme çözeltisi ile perfüze edilmesi ve beynin çıkarılmasıdır.Prosedürün üçüncü adımı, bir vibratom ile akut beyin dilimlerinin hazırlanmasıdır. Prosedürün dördüncü adımı, yeni doğmuş dentat granül hücrelerinde tüm hücre patch clamp kayıtlarının gerçekleştirilmesi ve akut beyin dilimlerinin moleküler tabakasının stimüle edilmesidir. Sonuç olarak, yeni doğmuş dentat granül nöronlarda uyarılan postsinaptik akımların kaydedilmesi ve analiz edilmesiyle, yeni doğmuş nöronların fonksiyonel sinaptik entegrasyonunu gösteren sonuçlar elde edilebilir.Bu tekniğin temel avantajları, yetişkin beynindeki yeni doğmuş nöronların retroviral olarak etiketlenmesi ve yetişkin hayvanlardan akut beyin dilimi preparasyonu elde edilmesidir. Bu yöntem, yetişkin beynindeki yeni doğmuş nöronların fonksiyonel kaybı gibi, yetişkin nörojenezi alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Retrovirüsle GFP yeşil floresan protein veya D tomato kırmızı floresan proteinini dondurucudan çıkarıp buz üzerinde çözerek virüs enjeksiyonuna hazırlık yapın.Dört ila altı haftalık dişi bir fareyi hayvan başına iki mikrolitre retrovirüs ile anestezi yapın. Patisini sıkarak anestezinin etkisini test edin, fareyi stereotaksik frame üzerine yerleştirin, başındaki tüyleri tıraş edin ve cildi %70 ethanol ile silin. Cildi kesmek ve kafatasını açığa çıkarmak için bir skalpel kullanın.0,6 milimetrelik bir matkap ucu kullanan dişle matkabı ile, bgma ve lambda aynı yatay düzleme gelene kadar farenin burun pozisyonunu ayarlayın. Kafatası üzerinde burada gösterilen koordinatlarda dört delik açın. Bir mikrolitrelik Hamilton düz uçlu şırıngayı çözülmüş retrovirüs ile hızla doldurun.Retrovirüsü dentate gyrus'a enjekte etmek için, -2 mm bgma'da oluşturulan deliklerden birinin üzerine konumlandırın. Şırıngayı 2,5 mm dikey derinliğe indirin. Sıvı geri akışını önlemek için 0,5 µL retrovirüsü dakikada 0,25 µL hızla enjekte edin.Şırıngayı yavaşça geri çekmeden önce her enjeksiyondan sonra iki dakika bekleyin. Kan kalıntılarını temizlemek için şırınga ucunun dış yüzeyini steril PBS ve bir aplikatör ile kısaca durulayın. Aynı prosedürü kullanarak, 2,5 veya 3,2 milimetre ventral derinlikteki diğer üç bölgeye 0,5 mikrolitre retrovirüs enjekte edin.Yarayı steril cerrahi sütür materyali ile kapatın ve yeni doğmuş nöronlar istenen olgunluk tarihine ulaşana kadar hayvanı kafesine geri koyun. 21 gün geçtikten sonra, gerekli solüsyonları hazırlayarak fare beynini dilimleme işlemine hazırlanın. Kesim solüsyonunu sıfır ila dört derece santigrat derece arasında buz üzerinde soğutun ve en az 30 dakika boyunca %95 oksijen, %5 karbondioksit ile havalandırın.Yapay beyin omurilik sıvısını veya A CSF'yi oda sıcaklığına getirin ve en az 30 dakika boyunca %95 oksijen, %5 karbondioksit ile köpürtün. Buz üzerinde 30 dakika bekledikten sonra, kardiyak perfüzyon için buz gibi soğuk olan oksijenle doyurulmuş kesme solüsyonunu hazırlayın. Fareyi anesteziye aldıktan sonra kardiyak perfüzyonu gerçekleştirin.Ardından beyni hızlıca çıkarın ve içinde kesim solüsyonu ve bir parça filtre kağıdı bulunan bir Petri kabına yerleştirin. Serebellumu kesin ve ardından montaj işlemini kolaylaştırmak için düz bir yüzey oluşturmak amacıyla enjeksiyon bölgelerinin bir ila iki milimetre anteriorundan koronal bir kesi yapın.Beyni bir vibram platformuna yapıştırın. Platformu, oksijenlendirilmiş kesme çözeltisiyle doldurulmuş vibram kesme haznesine yerleştirin. Bıçağı indirin ve Vibram üzerindeki kesme penceresini ayarlayın.Dokuyu dilimlemeye başlayın. Her dilimi orta hattı boyunca ikiye bölün. Bu dilimleri, oda sıcaklığında bekletme haznesine aktarmak için geniş ağızlı bir pipet kullanın.Sıcaklık A, %95 oksijen ve %5 karbondioksit ile havalandırılmış bir BOS ile ayarlanır. Hipokampusun ön ucu görünene kadar dilimleme işlemine devam edin. Dilimleri, 32 °C'lik su banyosunda sürekli havalandırarak 30 ila 60 dakika boyunca inkübe edin.Kayıt süresince inkübasyon haznesini kenar sıcaklığına geri getirin. Dilimler artık kayıt için hazırdır. Kayıt haznesini, yaklaşık iki mililitre/dakika hızında, 32 ila 34 °C sıcaklıkta oksijenle doyurulmuş A CSF ile perfüze ederek başlayın.Bir dilimi kayıt haznesine aktarmak için geniş bir domuz kıllı fırça kullanın. Dilimi sabit tutmak için düşük büyütmede üzerine naylon ipli U şeklinde bir platin tel yerleştirin. Dentat girusun moleküler tabakasını belirleyin.Ardından stimülasyon elektrodunu dentat girusun moleküler tabakasına indirin. Yüksek büyütme altında, subgranüler bölgedeki veya granüler tabakadaki yeni doğmuş dentat granül hücrelerini, yeşil veya kırmızı floresan protein markalamasının ekspresyonu aracılığıyla tanımlayın.DIC ve floresan filtreler arasında geçiş yaparak GFP veya D tomato eksprese eden yeni doğmuş nöronları bulun. Tüm hücre yama kenetleme (whole cell patch clamp) kaydı için nispeten parlak floresan özelliklerine ve sağlıklı bir hücre gövdesine sahip bir hücre seçin. Uygun iç solüsyonla doldurulmuş, üç ila altı mega ohm uç direncine sahip bir cam mikropipeti, mikroskobun yüksek büyütmeli objektifi altında amplifikatör kafa aşamasındaki mikropipet tutucuya yerleştirin.Mikropipeti bir mikro manipülatör yardımıyla seçilen dentat granül hücresine indirin ve bütün hücre yaması (whole cell patch) oluşturun. Akım kenetleme (current clamp) modunda bir dizi akım enjekte edin ve yeni doğmuş nöronun ateşleme özelliklerini kaydedin. Stimülasyon elektrodu aracılığıyla tekli darbe veya çiftli darbe elektriksel uyarı uygulayın ve uyarılan post-sinaptik akımları kaydedin.Postsinaptik yanıt yoksa, stimülasyon elektrodunu moleküler tabakadaki başka bir konuma taşıyın ve yeni stimulus konumundan uyarılan postsinaptik akımları kaydetmeyi deneyin. Deney bittikten sonra, yeni doğan nöronlardan uyarılmış postsinaptik yanıtların genliğini ölçmek için clamp fit kullanın. Bu şekil, GFP Retrovirüs enjeksiyonundan 21 gün sonra yetişkin bir farenin dentat girusundaki yeni doğan nöronlarda GFP ekspresyonunu göstermektedir.Yeni doğmuş nöronların kolayca görselleştirilebildiği ve hem dendritlerin hem de aksonların güçlü bir şekilde işaretlendiği görülmektedir. Dendritler, somadan dentate gyrus'un moleküler tabakasına doğru uzanan uzantılardır ve aksonlar da hilus ve ca3 bölgelerinde görünür durumdadır. Bu şekil, yetişkin bir fareye P-U-X-G-F-P retrovirüs enjeksiyonundan 21 gün sonra, yeni doğmuş bir dentate granül hücresinden alınan tüm hücre akım kenetleme (current clamp) kayıtlarını göstermektedir.Üstteki iz, akım enjeksiyonu ile uyarılan aksiyon potansiyellerini göstermektedir. Bu şekil, virüs enjeksiyonundan 21 gün sonra yeni doğmuş bir dentat granül hücresinde uyarılan post-sinaptik akımları göstermektedir. Moleküler tabakada stimülasyon yapılarak.Post-sinaptik yanıtın varlığı, yeni doğmuş nöronun mevcut sinir devrelerine halihazırda entegre olduğunu ve gelişiminden sonra çeşitli kökenli ENT'lerden sinaptik girdiler aldığını göstermektedir. Bu teknik, yetişkin nörojenez alanındaki araştırmacıların, yetişkin beynindeki yeni doğmuş nöronların fonksiyonel entegrasyonunu keşfetmelerinin önünü açmıştır.

studying-the-integration-of-adult-born-neurons

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Koku ampul Yetişkin doğumlu nöronlar optogenetically Channelrhodopsin2-implant minyatür rostral göçmen akışı ve kronik photostimulation lentiviral enjeksiyon ifade LED kullanılarak kontrol edilebilir.

Kronik Yetişkin doğmuş Koku Nöronlar Seçici Viral İletimi In vivo Optogenetic Uyarım

Kültür Yetişkin Dorsal Root Ganglion Nöronlar ile Axon Rejenerasyon Genetik Çalışma

Source: Gómez-Villafuertes, R., et. al., canlı görüntüleme ve ardından hücre biyolojisini ve çoklu nöral popülasyonların soy ilerlemesini izlemek için tek hücre izleme. J. Vis. Exp. (2017) Video, hücresel çalışmayı incelemek için yetişkin nöral kök hücreleri gerçek zamanlı olarak hazırlama, görüntüleme ve izleme sürecini göstermektedir bölme ve farklılaşma dahil olmak üzere davranışlar.

 Yetişkin Nöral Kök Hücrelerde Nöral Kökeni İzlemek için Canlı Görüntüleme ve Tek Hücreli İzleme

NF-KB-bağımlı yetişkin hipokampal nöron manipülasyonu ve analiz için yöntemler tarif edilmiştir. Ayrıntılı bir protokol farelerin bilişsel sonuçların araştırılması için bir dentat girus-bağımlı davranış testi (uzaysal desen ayrılık-Barnes labirent adlandırılır) için sunulmuştur. Bu teknik aynı zamanda, diğer deneysel ortamlarda araştırmaları sağlama yardımcı olmalıdır.

NF-KB-bağımlı yetişkin nöron Modülasyon ve Analiz Yöntemleri

Bu video makale, aynı doku kesitinde yetişkin hipokampal nörogenezin tüm aşamalarını tespit etmek ve ölçmek için kapsamlı bir protokolü göstermektedir. Farklı konakçı türlerden uygun antikorlar mevcut olmadığında ortaya çıkan dolaylı çoklu immünofloresan sınırlamalarının üstesinden gelmek için bir yöntem geliştirdik.

Aynı Sunucu Türlerin Antikorlar ile İmmünohistokimya ve Çoklu Etiketleme Yetişkin hipokampal nöron Eğitim için

Yeni beyin bölgelerindeki genç nöronlar zorlu nasıl çevre nöronal kader ve olgunlaşma sculpts içine önemli anlayışlar ortaya çıkarabilir. Bu iletişim kuralı interneuron öncüleri belirli beyin bölgelerinden hasat ve onları her iki homotopically nakli için bir yordam açıklanır veya beyin ve postnatal yavrularını içine heterotopically.

Erken Postnatal fare beyin içine Interneuron öncüleri Homochronic nakli

Bu protokolün amacı, belirli bir lokal nöral devrenin kemogenetik manipülasyonuna yanıt olarak yetişkin nöral kök/progenitor hücrelerin davranışını analiz etmek için bir yaklaşım tanımlamakta.

Yetişkin hipokampal sinirsel precursor hücrelerinin devre spesifik Yönetmeliği

İndüklenebilir bir transgenik soy izleme fare çizgisi kullanarak kök hücreleri ve soylarını bir florofor ile kalıcı olarak işaretleme yeteneği, in vivo aktivasyon, proliferasyon, göç ve / veya farklılaşmanın mekansal ve zamansal analizine izin verir. Soy izleme, soy bağlılığı, müdahaleye yanıt ve çok potansiyelli hakkında yeni bilgiler ortaya çıkarabilir.

Yetişkin Fare Beynindeki İndüklenebilir Floresan Etiketli Kök Hücrelerin Soy İzi

Burada, floresan ile aktive olmuş çekirdekler (FAN) sıralama yoluyla çoğu nöronu dışlayan fare dentat girusundan izole edilen tek çekirdekleri sıralamak için bir yöntem sunulmaktadır. Bu yaklaşım, yüksek kaliteli ekspresyon profilleri oluşturur ve nöral kök hücreler gibi kıt popülasyonlar da dahil olmak üzere niş içinde temsil edilen diğer hücre tiplerinin çoğunun incelenmesini kolaylaştırır.

Hipokampal Nörojenik Nişi İncelemek için Tek Çekirdekli RNA Dizilimi ile Birleştirilmiş Floresan Aktive Edilmiş Çekirdekler Negatif Nöronik Sıralama

Burada, özellikle hipokampal, koku soğanı devreleri ve insan nöronal ağlarında, büyük ölçekli nöronal toplulukların hesaplama dinamiklerini araştırmak için HD-MEA'yı kullanıyoruz. Hesaplama araçlarıyla birlikte uzay-zamansal aktiviteyi yakalamak, nöronal topluluk karmaşıklığı hakkında içgörüler sağlar. Yöntem, beyin fonksiyonlarının anlaşılmasını geliştirir, potansiyel olarak biyobelirteçleri ve nörolojik bozukluklar için tedavileri tanımlar.

CMOS Entegre Yüksek Yoğunluklu Mikroelektrot Dizisi Üzerinde Multimodal Büyük Ölçekli Nöronal Topluluk Dinamiğinin Kaydedilmesi ve Analizi

Modern sinirbilimler, laboratuvar kemirgenleri ve insanlar dahil olmak üzere birçok tür arasındaki farkları keşfetmelidir. Ancak büyük beyinli memeliler söz konusu olduğunda teknik zorluklar ortaya çıkar. Bu yaklaşım, çok farklı memelilerde nöronal popülasyonların türler arası varyasyonlarını ele alır ve evrimsel kalıpların ortaya çıkarılması için haritalanacak benzer sonuçlar sunar.

Farklı Memeli Beyinlerinde Nicel Hücre Sayımı Çalışmaları İçin Karşılaştırmalı Yaklaşım

Öğrenin yetişkin fare hipokampusunda yeni doğan dentat granül hücrelerinin fonksiyonel sinaptik entegrasyonunu incelemek için retroviral etiketleme ve tam hücre yama kelepçesi yöntemlerini. Bu teknik nörogenez araştırmalarında devre oluşumunu analiz eder.

Yetişkin doğmuş Nöronlar Entegrasyon incelenmesi

Daha fazla video keşfet