Name: Yüksek Verimli MicroRNA Profil: Optimize edilmiş, Multiplex QRT-PCR Fluidigm Dinamik ArrayTM IFCS Nanoliter Ölçeğinde (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-08-03T12:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 27 s
Description: Öğrenin, çoklu qRT-PCR ve mikroakışkan platformu kullanarak serumdan RNA ile 384 farklı mikroRNA profilini nanolitre ölçeğinde nasıl analiz edeceğinizi.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Biz Blelloch laboratuar metin üzerinde yorum için teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışma NIH (K08 NS48118 ve R01 NS057221), California Rejeneratif Tıp Enstitüsü (CIRM) (Tohum Hibe RS1-00161, Yeni Fakülte Ödülü RN2-00.906) ve Pew Charitable Trust RB fon ve FM desteklenmiştir. Wissenschaftlich Urologische Gesellschaft eV.

<ol><li>Mitchell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circulating+microRNAs+as+stable+blood-based+markers+for+cancer+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Circulating microRNAs as stable blood-based markers for cancer detection.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 105, 10513-10518 (2008).</li>
<li>Tang, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((220-plex+microRNA+expression+profile+of+a+single+cell%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">220-plex microRNA expression profile of a single cell.</a> Nat Protoc. 1, 1154-1159 (2006).</li>
<li>Gertsenstein, M., Vintersten, K., Behringer, R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGertsenstein%2C+M+%22Manipulating+the+Mouse+Embryo%3A+A+Laboratory+Manual%22">Manipulating the Mouse Embryo: A Laboratory Manual</a>. 3, Cold Spring Harbor Laboratory Press. 644-645 (2003).</li>
<li>Suh, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroRNA+function+is+globally+suppressed+in+mouse+oocytes+and+early+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">MicroRNA function is globally suppressed in mouse oocytes and early embryos.</a> Curr Biol. 20, 271-277 (2010).</li>
<li>Babiarz, J. E., Ruby, J. G., Wang, Y., Bartel, D. P., Blelloch, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+ES+cells+express+endogenous+shRNAs%2C+siRNAs%2C+and+other+Microprocessor-independent%2C+Dicer-dependent+small+RNAs%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">Mouse ES cells express endogenous shRNAs, siRNAs, and other Microprocessor-independent, Dicer-dependent small RNAs.</a> Genes Dev. 22, 2773-2785 (2008).</li>
<li>Babiarz, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+RNAs%3A+their+biogenesis%2C+regulation+and+function+in+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22StemBook%22%5BJournal%5D)">Small RNAs: their biogenesis, regulation and function in embryonic stem cells.</a> StemBook. , (2009).</li>
<li>Friedman, R. C., Farh, K. K., Burge, C. B., Bartel, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Most+mammalian+mRNAs+are+conserved+targets+of+microRNAs%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Res%22%5BJournal%5D)">Most mammalian mRNAs are conserved targets of microRNAs.</a> Genome Res. 19, 92-105 (2008).</li>
<li>Wang, Y., Medvid, R., Melton, C., Jaenisch, R., Blelloch, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DGCR8+is+essential+for+microRNA+biogenesis+and+silencing+of+embryonic+stem+cell+self-renewal%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">DGCR8 is essential for microRNA biogenesis and silencing of embryonic stem cell self-renewal.</a> Nat Genet. 39, 380-385 (2007).</li>
<li>Kanellopoulou, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dicer-deficient+mouse+embryonic+stem+cells+are+defective+in+differentiation+and+centromeric+silencing%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">Dicer-deficient mouse embryonic stem cells are defective in differentiation and centromeric silencing.</a> Genes Dev. 19, 489-501 (2005).</li>
<li>Thomson, J. M., Parker, J., Perou, C. M., Hammond, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+custom+microarray+platform+for+analysis+of+microRNA+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">A custom microarray platform for analysis of microRNA gene expression.</a> Nat Methods. 1, 47-53 (2004).</li>
<li>Moltzahn, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfluidic+based+multiplex+qRT-PCR+identifies+diagnostic+and+prognostic+microRNA+signatures+in+sera+of+prostate+cancer+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Microfluidic based multiplex qRT-PCR identifies diagnostic and prognostic microRNA signatures in sera of prostate cancer patients.</a> Cancer Res. 71, 550-560 (2011).</li>
<li>Mestdagh, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+and+universal+method+for+microRNA+RT-qPCR+data+normalization%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Biol%22%5BJournal%5D)">A novel and universal method for microRNA RT-qPCR data normalization.</a> Genome Biol. 10, R64-R64 (2009).</li>
</ol>

Alan Mir Fluidigm Corporation&#39;ın bir çalışanı. Aksi halde, ifşa etmek için herhangi bir mali çıkarları var.

miRNA&#39;lar kısa (18-24 nükleotidler), non-coding RNA gen ekspresyonu düzenleyen istikrarsızlaştırıcı hem haberci RNA (mRNA) ve inhibe çeviri post-transkripsiyonel, 6 insan genlerinin en az üçte biri korunmuş içeren Aslında miRNA . kendi 3&#39;UTR bağlayıcı siteleri ve hücre kaderinin kararları, doku homeostazı ve kanser gibi hastalıkların önemli bir katkı pluripotency, proliferasyonu ve apoptozis genlerinin miRNA&#39;lar belirgin etkileşimler göstermektedir. 6,7 Dolayısıyla doğru microRNA ifade profilleri geniş bir ilgi. QRT-PCR miRNA ifade profil protokol 2 yayınlanan multipleks test etmek için, negatif kontrol olarak küçük RNA eksik Mesc kullanıldı . / - DGCR8 / - Dicer ise hücreler, tüm kanonik microRNA eksik. Hücreleri kanonik ve non-canoncial micoRNAs eksikliği 8,9 / - - DGCR8 MES-vahşi tip düzeyleri karşılaştırıldığında hücreler, birçok yabani tip hücrelerin 11 10 microRNA tespit edilmedi ifade doğruluk eksikliği ortaya çıkardı. Hatta bazıları nakavt hücreleri (Şekil 3a) göre daha düşük ekspresyon düzeyleri gösterdi. Biz, doğruluk eksikliği singleplex RT-kantifikasyon önce iki ardışık multipleks adımları büyük astar, carry-over (RT-PCR öncesi) neden olabileceğini varsaydık. Ancak, RNA başlangıç ​​konsantrasyonu sınırlıdır, özellikle multipleks öncesi amplifikasyon sinyal gücünü arttırmak için gereklidir. / - Yerli poliakrilamid jeller (Şekil 2) boyutu seçimi primerler pre-PCR ürünleri arındırarak, Dgcr8 hem daha microRNA ve yanlış pozitif sinyallerin kaybı tespit doğruluğu önemli bir gelişme gösteren ve Dicer - / Ayrıca arka planlar (Şekil 3a ve 3b) nadir Dgcr8 Independent / Dicer bağımlı küçük RNA&#39;lar (Şekil 3b) 11 doğru kategorizasyonu için izin değiştirilmiş QRT-PCR yaklaşım. Bu nedenle pre-PCR ürününün uzak aşırı primerler arındırmak için ek bir adım büyük multipleks astar kullanılarak örnek başına ayarlar, özellikle de açıkça avantajlıdır. Preamplifikatörde döngülerinin optimal sayıda giriş RNA konsantrasyonları belirlenir. Belirli bir denemenin hususlar değil altında veya denge overamplify yönlendirilmelidir. Binden fazla bilinen microRNA ile, standart 384-iyi, özellikle birden çok örnekleri karşılaştırarak tabak, geniş microRNA profili için en uygun olmayabilir. Fluidigm Dinamik Dizi IFC nanoliter ölçek (6.7 nL) tek bir deney (9216 reaksiyonlar) 96 farklı microRNA karşı 96 kadar bireysel örnekleri test pipetleme adımları ve gerekli kimya önemli bir azalma sağlar. Her çalışma için analiz yazılımı amplifikasyon eğrileri, renk kodlu ısı haritaları ve çevrim eşik değerleri (Ct) sağlar. Eş zamanlı geniş çaplı bir profil deneysel sapmaların azaltır ve küçük RNA denetimleri kullanan diğer normalleşme stratejileri performans anlamına ifade değer normalleştirme, sağlar . 12 Önceden atanmış TaqMan problar ile piyasada bulunan 384 platformları ile karşılaştırıldığında, ısmarlama primer setleri ile yüksek verim profil platformu kombinasyonu yüksek deneysel esneklik sunar. Dinamik Dizi platformu ile birlikte optimize edilmiş multipleks QRT-PCR yaklaşımı başarıyla bize aynı anda 384 miRNA (Şekil 4) düzeylerindeki değişiklikler için 48 prostat kanserli hasta serumlarının ekrana ve kontrollerde başak olmadan (yani sentetik microRNA) veri normalleştirmek için izin verdi. 11 Numunelerin hazırlanması profil sonuçları adımları artışa rağmen, açıklanan yaklaşım, hatta sınırlı başlangıç ​​materyali ile bir zaman ve maliyet-etkin miRNA ifade seviyeleri için büyük bir örneklem kümesi profil yüksek kapasiteli yöntemi.

yüksek verimli microrna profil: optimize edilmiş, multiplex qrt-pcr fluidigm dinamik arraytm ifcs nanoliter Ölçeğinde

High Throughput MicroRNA Profiling: Optimized Multiplex qRT-PCR at Nanoliter Scale on the Fluidigm Dynamic ArrayTM IFCs

MiRNA&#39;lar, gelişme, doku homoeostasis ve hastalığın altında yatan kritik süreçlerin geniş katılımı, araştırma ve ilaç topluluklar arasında kabaran ilgi açmıştır. MiRNA&#39;lar çalışma için, microRNA düzeylerinin ölçülmesi, doğru ve sağlam olması gereklidir. Küçük RNA eksik fare embriyonik kök hücreleri (Mesc) yabani tip karşılaştırarak, biz daha önce yayınlanmış multipleks QRT-PCR teknikleri doğruluk ve sağlamlık eksikliği saptandı. Burada, tekniğin doğruluk ve sağlamlık önemli ölçüde artırır singleplex gerçek zamanlı algılama, önce önceki multipleks adımları aşırı primerler uzak arıtma da dahil olmak üzere optimize edilmiş bir yöntem açıklanmaktadır. Ayrıca, mikroakışkan nanoliter hacimlerinde bir çip üzerinde tekniği performans nasıl biz açıklamak reaktif maliyetlerini önemli ölçüde azaltır ve zaman etkili yüksek kapasiteli miRNA ifade profil izin verir.

Burada örnek sınırlı miktarda çalışma, özellikle microRNA (miRNA) ekspresyon düzeyleri için bir maliyet ve zaman etkili yüksek verimli bir tarama aracı olarak mikroakışkan platformu ile birlikte optimize edilmiş bir multiplex ters transkriptaz kantitatif PCR (QRT PCR) protokolü açıklamak.

Yüksek Verimli MicroRNA Profil: Optimize edilmiş, Multiplex QRT-PCR Fluidigm Dinamik ArrayTM IFCS Nanoliter Ölçeğinde

miRNA'ların gelişim, doku homeostazı ve hastalıkların temelinde yatan kritik süreçlerdeki geniş kapsamlı rolü, ... arasındaki ilginin hızla artmasına yol açmıştır.

Bu prosedürün genel amacı, multipleks kantitatif R-T-P-C-R'ı bir mikroakışkan platformla birleştirerek, minimal başlangıç materyali ile mikro RNA ekspresyonunu verimli, düşük maliyetli ve etkili bir şekilde profillemektir. İşlem, ekstrakte edilen RNA'nın konsantre edilmesiyle başlar, ardından multipleks ters transkripsiyon ve multipleks ön amplifikasyon işlemleri izler. Bir sonraki adım, fazla primerlerin saflaştırılarak uzaklaştırılmasıdır.Son olarak, mikroakışkan bir platform kullanılarak singleplex mikro RNA ekspresyon profili çıkarılır. Sonuç, ilgilenilen örnekler genelinde doğru ve yüksek düzeyde tekrarlanabilir mikro RNA ekspresyon seviyeleridir. Bu tekniğin mevcut yöntemlere göre temel avantajı, pre-EMP amplifikasyonu sonrası ek saflaştırma adımının, multiplex Q-R-T-P-C-R yönteminin doğruluğunu ve tekrarlanabilirliğini artırmasıdır.Serumden ekstrakte edilmiş RNA ile başlayın. Homojenize edilmiş dokudan triol gibi fenol kloroform tabanlı RNA yöntemi veya bir RNA saflaştırma kiti kullanarak yapılan tüm ekstraksiyonları bir yıkama adımı takip etmeli ve tüm saklama işlemleri minus 80 degrees Celsius'da gerçekleştirilmelidir. RNA çözeltisini konsantre edin.Öncelikle serumdan elde edilenler gibi sınırlı miktarda numune ile başlanıyorsa, bir MicroCon numune rezervuarını bir viyale yerleştirin, ardından pipet ucunun membrana değmemesine çok dikkat ederek RNA solüsyonunu rezervuara pipetleyin. Şimdi, viyali ve filtreyi, çatlak bandı rotora bakacak şekilde santrifüje yerleştirin ve santrifüj işlemini yaklaşık üç saat boyunca çalıştırın. Üç saat sonra, RNA'yı elüe etmek için RNA tamamen membran üzerinde konsantre olacaktır.Membrana istenen miktarda RNAsปลอด su ekleyin, rezervuarı ters çevirerek yeni bir tüpe yerleştirin. Ardından, 4 °C'de maksimum 3000 ×g hızda üç dakika boyunca santrifüjleyin. Konsantre edilmiş RNA'yı ihtiyaç duyulana kadar -80 °C'de saklayın. RNA üzerinde xpl ters kök döngü (reverse stem loop) primerleri kullanılarak bir RT reaksiyonu ve ardından 12 ila 18le PCR döngüsü gerçekleştirildikten sonra, mikroRNA'lar cDNA zincirleri ile temsil edilir.Buna pre-PCR ürünü denir ve bu, yaklaşan QPCR işlemini ifade eder. Pre-PCR ürününün, 10 baz çiftli bir DNA merdiveni ile birlikte %10'luk poliakrilamid jel üzerinde saflaştırılması gerekir; her kuyucuğa 6x orange G'den 5,5 µL ile 27,5 µL pre-PCR ürününün karışımı yükleyin.Jeli 150 volt değerinde 55 ila 60 dakika boyunca çalıştırın. Romo fenol mavisi bu jelde 20 baz çifti bölgesinde ilerler. Jel çalıştırıldıktan sonra, ışığa maruz bırakmadan bir çalkalayıcı üzerinde 25 dakika boyunca cyber gold ile boyayın.60 ile 80 baz çifti arasındaki PCR öncesi ürün bandını kesin ve jel bloğunu etiketli tüplere aktarın. Ürün konsantrasyonu düşükse bant görünmeyebilir, ancak yine de jel içerisinde yer alacaktır. Şimdi, tüp içinde tüp santrifügasyon yöntemiyle jel bandını ezin ve 300 mikrolitre TEN tamponu ekleyin.Tampon jel karışımını 37 °C'de, ajitasyonla dört saat boyunca inkübe edin. Dört saat sonra, sıvıyı yeni bir tüpe aktarın ve 300 µL daha TEN tamponu ekleyin. Bu karışımı 4 °C'de, ajitasyonla gece boyunca inkübe edin.Ertesi gün, tüp içeriğini tekrar aktarın ve pre-PCR ürününün etanol çöktürme işlemine geçin. Bir çip paketinden çıkarıldığında, 24 saat içinde hazırlanmalı ve hazırlama işleminden sonraki 60 dakika içinde yüklenmelidir. Çip üzerindeki her bir akümülatöre 150 µL kontrol hattı sıvısı enjekte ederek dizinin hazırlama işlemine başlayın.Çip veya girişlere herhangi bir sıvı dökmemeye dikkat edin, aksi takdirde çip kullanılamaz hale gelecektir. Ardından çipi entegre akışkan devreye veya IFC kontrolörüne yerleştirin ve kontrolörün hazırlama (priming) betiğini çalıştırın. Program başlar başlamaz örnekleri hazırlamaya başlayın.Pres numuneyi hazırlayarak başlayın. TaqMan, universal master mix ve yükleme reaktiflerinden oluşan bir karışım hazırlayın. Ardından 96 kuyucuklu yükleme formatını kullanarak, yüklenmiş sıvıyı toplamak için her bir numuneden 2,25 µL'yi 2,75 µL pres numune karışımı ile birleştirin. Plakayı kısa süreliğine vorteksleyin ve 4 °C'de hızlıca santrifüjleyin.Örnek plaka hazırlanmıştır. Şimdi, assay karışımının 13 x konsantrasyonlarını hazırlamak için yeni bir 96 kuyucuklu plaka kullanın. Bu işlem, her kuyucuğa bir evrensel primer, ileri primer ve gene özgü tacman probu karıştırılarak gerçekleştirilir.1X konsantrasyonları; üniversal ve ileri primer için 1 µM, TaqMan probu için ise 0,2 µM'dur. Ardından, 5 µL'lik nihai kuyucuk hacminde 0,25% Tween nihai konsantrasyonu elde etmek için yeterli miktarda Tween ekleyin. Kabarcık oluşumunu önleyerek iyice karıştırın ve sıvının toplanması için plakayı kısa süreliğine santrifüjleyin.Bu, analiz plakasıdır. Çipi yükleyerek 96.96 Q-R-T-P-C-R işlemine başlayın. Önce örnekleri, ardından her giriş için final hacmi 5 µL olacak şekilde analizleri IFC'ye yükleyin.İkinci olarak, örnekleri ve assay'leri çipe yüklemek için yükleme karışımı (load mix) betiğini çalıştırın. Betik tamamlandığında, yüklü çip üzerindeki koruyucu filmi soyun ve yapışkan bant kullanarak çip yüzeyindeki toz parçacıklarını veya kalıntıları temizleyin. Şimdi biyo sistem amplifikasyon programını ayarlayın.Çipi sisteme yerleştirin ve programı çalıştırın. Sonuçlar; amplifikasyon eğrileri, tüm çip ısı haritaları ve her biri için CT değerleri sağlamak amacıyla fluid dime yazılımı ile analiz edilebilir. Natif poliakrilamid jellerde boyut ayrımıyla saflaştırılmış, wild type DG CR eight ve ER null mutant pre-PCR ürünleri kullanılmıştır.RNA, önceki protokollerle karşılaştırıldığında farklı şekilde hazırlanmıştır. Saflaştırma adımı sayesinde, hem DGCR8 null hem de ER null arka planlarda daha fazla mikroRNA elde edilmiş ve yalancı pozitif sinyallerin kaybı gerçekleşmiştir. Ayrıca, modifiye edilmiş QR TPCR R yaklaşımı, nadir bulunan D gcr eight bağımsız dicer bağımlı küçük RNA'ların uygun şekilde kategorize edilmesine olanak tanır.Burada, hastalar ve kontrollerden alınan 48 cera, 384 farklı mikroRNA'nın ekspresyon değişimi açısından taranmıştır. Veriler, kontrollerde bir spike kullanmadan, ilgili medyan çıkarılarak her örnek için normalize edilmiştir. Bu videoyu izledikten sonra, sınırlı miktarda girdi RNA ile başlansa dahi, bir flu line platformu üzerinde multiplex Q-R-T-P-C-R'ın birçok örnekte yüzlerce mikroRNA'yı aynı anda profillemek için nasıl kullanılabileceğine dair iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.

high-throughput-microrna-profiling-optimized-multiplex-qrt-pcr-at

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Thermo Scientific Matrix çok kanallı pipet ile el gibi bir robot kullanarak qPCR için 96-iyi dizileri Biz ön microRNA kurulum ve analiz gösterecektir.

Kantitatif Gerçek-zamanlı PCR (qPCR) Diziler kullanarak Pre-mikro RNA&#39;lar ve microRNA, Profilleme

Exosomes istikrarlı microRNA (miRNA'lar) varlığı biyolojik olarak ve terapötik müdahale için bir yol olarak potansiyel programı için, hücreler arası iletişim yeni bir mod olarak büyük ilgi üretti. Burada taşınmaları miRNAs tespit etmek kantitatif PCR tarafından takip edilir ve kan kültür ortamından saflaştırılması exosome göstermektedir.

Kan ve Kültür Medya türetilen Exosomes saflaştırılması ve microRNA Profil

Biz beyin omurilik sıvısı (BOS) microRNA profili gerçek zamanlı PCR bir protokol açıklar. RNA ekstre etme protokolleri hariç, prosedür diğer vücut sıvıları, kültürlenmiş hücreler ya da doku örneklerinden elde edilen RNA ile uzatılabilir.

Kantitatif Real Time PCR kullanarak Beyin Omurilik Sıvısı MicroRNA Profil

Östrojen ve mikroRNA'lar hem aracılığıyla sinyal Moleküler meme kanseri gelişiminde ve büyümesinde önemli olan. Östrojen transkripsiyon faktörleri olan östrojen reseptörleri aktive eder. Pek çok transkripsiyon faktörleri microRNA ekspresyonunu düzenleyen ve estrojen ile düzenlenen microRNA farklı büyük ölçekli teknikler kullanılarak profilli olabilir.

Meme Kanseri Hücrelerinde östrojen düzenlenmiş microRNA profil

Sirkülasyon mikroRNAlar son zamanlarda çeşitli kanser ve diğer hastalıklar için umut verici ve yeni biyolojik belirteçler olarak ortaya çıkmıştır. Bu makalenin amacı üç farklı prob-tabanlı gerçek zamanlı PCR platformları ve ölçmek ve microRNA dolaşan bereket belirlemek için kullanılabilir yöntemleri tartışmaktır.

Probe-tabanlı Real-time PCR microRNA Kantitatif Ölçüm Yaklaşımları

Amplifikasyona ihtiyaç duymadan biyolojik substratlardaki molekülleri barkodlayarak ve sayarak gen ekspresyonunu ölçen çoğullanmış yüksek verimli bir gen ekspresyon platformunun kullanımını açıklıyoruz. Platformu, irritabl bağırsak sendromu olan ve olmayan kişilerde tam kandaki mikroRNA (miRNA) ekspresyonunu ölçmek için kullandık.

İrritabl Bağırsak Sendromu içinde miRNA&#39;lar Sirkülasyon tedirginlikler bir Çoklanmış Yüksek verim Gen İfadesi Platformu Kullanma Algılanan

Nano ölçekli PCR ile DNA ve RNA bazlı patojenlerin yüksek verimlilik testi bir sendromik köpek ve at solunum PCR panelini kullanarak tarif edilir.

Nano PCR ile Hayvan Örnekler Solunum Patojenler yüksek verimlilik Algılama

Bu protokol klonal düzeyde genlerin büyük bir dizi ifadesini değerlendirmek açıklamaktadır. Tek hücreli RT-qPCR örnekleri ve yüzlerce genin için güçlü bir hassasiyetle oldukça güvenilir sonuçlar verir.

Multiplex RT-qPCR kullanarak tek hücreli Gen İfadesi Nadir Lenfoid Populasyonlarının Farklılıkları karakterize etmek

Tek memeli hücrelerini sıralamak ve her hücrede ilgilenilen 96'ya kadar hedef genin ekspresyonunu ölçmek için bir yöntem açıklıyoruz. Bu yöntem, mutlak transkript sayılarının tahminini sağlamak için dahili qPCR standartlarının kullanılmasını içerir.

İç Standartları FACS ve qPCR kullanma Tek hücreli Gen İfadesi Profil

Burada, lipoprotein parçacıklarının yerel Micro-RNA içeriğinin (mutlak/göreceli) belirlenmesi için nicel gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyon tabanlı protokol sunulur. Buna ek olarak, Mikro-RNA seviyesini artırmak için bir yöntem, hem de lipoprotein parçacıkları hücresel alımını oranını belirlemek için bir yöntem gösterilmiştir.

MicroRNA ile yerli lipoprotein parçacıkları zenginleştirme ve onların mutlak/bağıl microRNA Içerik ve onların hücresel transfer hızı sonraki belirlenmesi

Bu makalede, tek veya toplu C. elegans örneklerinde gen ekspresyon seviyelerinin hızlı ve güvenilir bir şekilde belirlenmesi için yüksek aktarım hızı protokolü açıklanmıştır. Bu protokol RNA yalıtımı gerektirmez ve doğrudan örneklerden cDNA üretir. Yüksek verimli çok katlı nanoakışkan gerçek zamanlı qPCR platformları ile birlikte kullanılabilir.

Nanoakışkan Teknoloji Kullanarak Tek ve Toplu C. elegans Örneklerinde Yüksek Verimli Nicel RT-PCR

Öğrenin, çoklu qRT-PCR ve mikroakışkan platformu kullanarak serumdan RNA ile 384 farklı mikroRNA profilini nanolitre ölçeğinde nasıl analiz edeceğinizi.

Yüksek Verimli MicroRNA Profil: Optimize edilmiş, Multiplex QRT-PCR Fluidigm Dinamik ArrayTM IFCS Nanoliter Ölçeğinde

Daha fazla video keşfet