Name: Nöromodülasyon ve Mitokondrial Ulaştırma: Uzun Süreleri içinde Hipokampal Nöronlar Canlı Görüntüleme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-06-17T12:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 50 s
Description: Öğrenin, hipokampal nöronlarda mitokondriyal taşımayı uzun süreli canlı görüntüleme ile incelemeyi. Serotonin gibi nöromodülatörlerin etkilerini floresan mikroskopi kullanarak değerlendirin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Biz Donald Hutson teknik uzmanlık ve büyük bir beceri sahne top kuluçka tasarım ve üretim sırasında yaptığı katkı için teşekkür etmek istiyorum. Biz de onu mükemmel bir teknik yardım için Ayda Dashtaei minnettarız. Tüm çalışmalar, Nörobilim Araştırma Vakfı tarafından desteklenmiştir.

<ol><li>Ligon, L. A., Steward, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Movement+of+mitochondria+in+the+axons+and+dendrites+of+cultured+hippocampal+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Movement of mitochondria in the axons and dendrites of cultured hippocampal neurons.</a> J Comp Neurol. 427, 340-350 (2000).</li>
<li>Miller, K. E., Sheetz, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+evidence+for+coherent+low+velocity+axonal+transport+of+mitochondria%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Direct evidence for coherent low velocity axonal transport of mitochondria.</a> J Cell Biol. 173, 373-381 (2006).</li>
<li>Macaskill, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Miro1+is+a+calcium+sensor+for+glutamate+receptor-dependent+localization+of+mitochondria+at+synapses%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Miro1 is a calcium sensor for glutamate receptor-dependent localization of mitochondria at synapses.</a> Neuron. 61, 541-555 (2009).</li>
<li>Morris, R. L., Hollenbeck, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Axonal+transport+of+mitochondria+along+microtubules+and+F-actin+in+living+vertebrate+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Axonal transport of mitochondria along microtubules and F-actin in living vertebrate neurons.</a> J Cell Biol. 131, 1315-1326 (1995).</li>
<li>Rintoul, G. L., Filiano, A. J., Brocard, J. B., Kress, G. J., Reynolds, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutamate+decreases+mitochondrial+size+and+movement+in+primary+forebrain+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Glutamate decreases mitochondrial size and movement in primary forebrain neurons.</a> J Neurosci. 23, 7881-7888 (2003).</li>
<li>Crawley, J. N. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCrawley%2C+JN+%22Current+protocols+in+neuroscience%22">Current protocols in neuroscience</a>. , J. Wiley. (1999).</li>
<li>Fedoroff, S., Richardson, A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFedoroff%2C+S+%22Protocols+for+neural+cell+culture%22">Protocols for neural cell culture</a>. , 3rd edn, Humana Press. (2001).</li>
<li>Chen, S., Owens, G. C., Crossin, K. L., Edelman, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serotonin+stimulates+mitochondrial+transport+in+hippocampal+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Serotonin stimulates mitochondrial transport in hippocampal neurons.</a> Mol Cell Neurosci. 36, 472-483 (2007).</li>
<li>Chen, S., Owens, G. C., Edelman, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dopamine+inhibits+mitochondrial+motility+in+hippocampal+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Dopamine inhibits mitochondrial motility in hippocampal neurons.</a> PLoS One. 3, e2804-e2804 (2008).</li>
<li>Chen, S., Owens, G. C., Makarenkova, H., Edelman, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HDAC6+regulates+mitochondrial+transport+in+hippocampal+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">HDAC6 regulates mitochondrial transport in hippocampal neurons.</a> PLoS One. , e10848-e10848 (2010).</li>
<li>Curran, M. A., Kaiser, S. M., Achacoso, P. L., Nolan, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+transduction+of+nondividing+cells+by+optimized+feline+immunodeficiency+virus+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Efficient transduction of nondividing cells by optimized feline immunodeficiency virus vectors.</a> Mol Ther. 1, 31-38 (2000).</li>
</ol>

Lentivirüs enfekte kültürlü nöronlar mitokondri hedefleyen bir floresan protein aracılı ifade ve uzun süreler için canlı hücreleri görüntüleme sağlayan bir ucuz laboratuvar inşa aşamasında üst inkübatör istihdam, mitokondriyal hareket ve nöromodülatör sinyalleri arasındaki bağlantıyı araştırmak için mümkün olmuştur serotonin (5-HT), dopamin (DA), asetilkolin (Ach) gibi. Sinir fonksiyon kalp çalışmalar ilk kez, 5-HT ve DA nörotransmitterler nöronlar modülasyonlu aktivite değişiklikleri mitokondriyal kaçakçılığı bağlantılar, sinyal yolağı aydınlatmak için yardımcı oldu. Biz hedefli floresan proteinleri kültürlü nöronların fizyolojik ilgili hayati boyalar kullanarak mümkün olan çok kısa süreleri daha uzun süre boyunca yaşayan etiketli mitokondri gözlem izin verdiğini bulabilirsiniz. Ayrıca, floresan protein sinyal yoğunluğu photobleaching veya fototoksisite olasılığını en aza indirerek, görüntü alımı sırasında bize poz süreleri kısa tutmak için izin verir. Son olarak, basit ve ucuz bir sahne üst inkübatör medya buharlaşma en aza indirerek, ortam sıcaklığı, nem ve CO 2 düzeyleri korur, bize saat ya da gün içinde bile yaşam nöronlar mitokondriyal hareketini takip sağlar . Canlı nöronlarda mitokondri uzun vadeli gözlemler için bir sahne üstü inkübatör imal etmek isteyen araştırmacılar koşuluyla, tasarım kesin ayrıntıları izleyin gerekmez medya buharlaşmasını önlemek için (örneğin, gaz geçirgen bir zar kullanılır malzemelerin özellikleri ) ve (örneğin, sıcaklık ve nem kontrolü, pH, bakım ozmolarite tamponlama) uygulanan ilkeler, bu protokol açıklanan ne ile tutarlı.

<table border="1"><tbody><tr><th> Miktar </th><th> Açıklama (Şekil 1 Yer ve) </th></tr><tr><td> 1 </td><td> Doku kültürü inkübatör (H) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> Isıya dayanıklı plastik muhafaza (delrin veya eşdeğeri) (A) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> 35mm GBM kapağı için plastik çerçeve (petri membran iliştirilmesi için) (M) </td></tr><tr><td> 1-2 </td><td> doğrusal ft Clear PFTE (Teflon) membran malzemesi </td></tr><tr><td> 4 </td><td> Pirinç parmak vida </td></tr><tr><td> 2 </td><td> Küçük 10kOhm soğutucu dirençleri (sahne top inkübatör muhafaza içinde ısıtma elemanları olarak kullanılır) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> Trafo (9V mevcut arz dirençler için) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> Terrarium sıcaklık kontrolörü ve prob (soğutucu dirençler güç trafosu üzerinden termostatik düzenleme) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> 2000ml Erlenmeyer şişesi (susturucu hortum önce sahne top inkübatör titreşim önleme için) (K) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> 1 / 8 &quot;sorbothane sheet (sahne üst inkübatör baz conta malzemesi) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> Hava geçirmez ABS (veya eşdeğeri) plastik kutu (akvaryum pompası için konut) (J) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> Akvaryum pompası (I) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> Küçük bilgisayar soğutma fanı </td></tr><tr><td> 1 </td><td> Soğutma fanı Plastik muhafaza (L) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> 9V bilgisayar trafo soğutma fanı </td></tr><tr><td> 20-30ft </td><td> Nalgene veya silikon hortum (doku kültürü ve sahne üstü inkübatörler arasındaki bağlantıları, nem tuzakları) (F, G, N) </td></tr><tr><td> 2 </td><td> Plastik stopcocks (evre-üst inkübatör öncesi ve sonrası hava akışını açmak ve kapatmak için) (O) </td></tr><tr><td> 4 </td><td> Dikenli pirinç hortum bağlantısı (hortum bağlantıları için / sahne top kuvöz ve akvaryum pompası muhafaza) </td></tr><tr><td> 2 </td><td> Pirinç hızlı kuplörler (hortum bağlantıları için / sahne top inkübatör) </td></tr><tr><td> 2 </td><td> Pirinç hızlı kuplörler (hortum bağlantıları için / sahne top inkübatör) </td></tr></tbody></table> Tablo 1. Sahne üstü inkübatör parçalar: <table border="1"><tbody><tr><th> Reaktifin Adı </th><th> Şirket </th><th> Katalog numarası </th></tr><tr><td> Poly-D-lizin </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P7280-5MG </td></tr><tr><td> laminin </td><td> Roche Uygulamalı Bilimler </td><td> 11243217001 </td></tr><tr><td> 35 mm cam alt yemekleri </td><td> Mattek </td><td> P35GC-0-14-C </td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Yaşam Teknolojileri </td><td> 10567 </td></tr><tr><td> B27 </td><td> Yaşam Teknolojileri </td><td> 17504-044 </td></tr><tr><td> Glutamax </td><td> Yaşam Teknolojileri </td><td> 35050 </td></tr><tr><td> Lipid-zengin BSA </td><td> Yaşam Teknolojileri </td><td> 11020-021 </td></tr><tr><td> L-Asparagin </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P0380-100G </td></tr><tr><td> L-prolin </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A8381-100G </td></tr><tr><td> Vitamin B-12 </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> V2876-100mg </td></tr><tr><td> 5-HT </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> H9523-25mg </td></tr><tr><td> 8-OH-DPAT </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> H8520-25mg </td></tr><tr><td> Dopamin </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> H8502-5G </td></tr><tr><td> Bromokriptin </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> B2134-25mg </td></tr><tr><td> SKF38393 </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> D047-100mg </td></tr></tbody></table>

nöromodülasyon ve mitokondrial ulaştırma: uzun süreleri içinde hipokampal nöronlar canlı görüntüleme

Neuromodulation and Mitochondrial Transport: Live Imaging in Hippocampal Neurons over Long Durations

Mitokondriyal ulaşım ve nöronal fonksiyonu arasındaki ilişkiyi anlamak için, 1-3 uzun süreler için canlı kültürlü nöronlar mitokondriyal davranışlarını gözlemlemek için kritik öneme sahiptir. Bu iskelet parçaları, organeller ve canlı hücrelerin diğer yapıların dinamik floresan mikroskobu ile görüntülenmiştir sonra etiketli ve hangi hayati boyalar ve floresan proteinlerle kullanımı ile artık mümkün. Örneğin, embriyonik tavuk sempatik nöronlar, mitokondriyal hareket hayati boya rodamin 123 4 ile karakterize edildi. Başka bir çalışmada, mitokondri mitochondrially hedef eYFP 5 transfeksiyon sıçan önbeyin nöronları görüntülendi. Ancak, bir takım konularda bile birincil dakika içinde nöronlar, saat veya gün görüntüleme sunar. Bunların başında: 1) uzun görüntüleme oturumları sırasında, sıcaklık, nem, ve pH gibi kültür koşullarında bakım, 2) elde edilen görüntü ve görüntü analizi sırasında sinyal yoğunluğu doğru ölçüm kalitesini sağlamak için güçlü, istikrarlı bir floresan sinyal; 3) görüntü alımı sırasında pozlama süreleri sınırlayıcı photobleaching en aza indirmek ve fototoksisite önlemek. Burada, gözlem, görselleştirme ve yüksek temporal çözünürlük ve uygun yaşam destek koşulları altında kültürlü hipokampal nöronlarda mitokondriyal hareketin analizi izin veren bir protokol açıklar. Biz, iyi bir ısı düzenleme ve atmosferik gaz akışı sağlayan uygun bir sahne top inkübatör inşa edilmiş, ve aynı zamanda kararlı pH ve osmolarite temin medya buharlaşma derecesi sınırlar var. Bu inkübatör, sabit sıcaklık ve nem seviyeleri ve% 5-10 CO 2 / hava bir atmosfer sağlayan standart bir doku kültürü inkübatör, giriş ve çıkış hortumları ile bağlı . Bu tasarım, mutlaka uzun saatler hatta günler içinde hücre canlılığı sağlamak önemli ölçüde daha pahalı mikroskop inkübatörler bir düşük maliyetli bir alternatif sunmaktadır. Mitokondri görselleştirmek için, biz, mitokondri hedeflenen bir kırmızı floresan proteini kodlayan bir lentivirüs hücreleri enfekte. Bu istikrarlı bir xenon ışık kaynağı kullanımı ile birlikte, görüntü alımı sırasında pozlama süresini sınırlamak için bize izin verir ve tüm ama photobleaching ve fototoksisite engeller, kalıcı ve güçlü bir sinyal sağlar. İki enjeksiyon noktaları sahne top kuluçka üstüne amaçlanan nörotransmitter ve diğer reaktifler akut yönetim mitokondriyal hareketi modüle izin verir. Toplamı, bir organel hedefli kırmızı floresan proteini ve sahne üstü inkübatör, geleneksel bir ters floresan mikroskop, CCD kamera ve xenon ışık kaynağı kombinasyonu lentivirüs aracılı ifade bizimle mitokondriyal ulaşım zaman atlamalı görüntüler elde etmek için izin geleneksel hayati boyalar ve off-the-raf ömrü destek sistemleri dağıtımı çalışmalar mümkün olan daha uzun bir süre boyunca yaşayan nöronlar.

Biz uzun bir süre boyunca floresan mikroskobu ile yaşam nöronlar mitokondri görüntüleme sağlayan bir protokol açıklar. Uzun süre üzerinden Görüntüleme mitochondrially hedef floresan protein ve laboratuvarımızda tasarlanmış ve inşa edilmiştir ucuz bir sahne top inkübatör kullanımı lentivirüs aracılı ifade aracılığıyla gerçekleştirilir.

Nöromodülasyon ve Mitokondrial Ulaştırma: Uzun Süreleri içinde Hipokampal Nöronlar Canlı Görüntüleme

Mitokondriyal transport ile nöronal fonksiyon arasındaki ilişkiyi anlamak için, canlı kültürlenmiş ... içindeki mitokondriyal davranışları gözlemlemek kritik öneme sahiptir.

Bu prosedürün genel amacı, canlı hücre floresan mikroskopi yöntemiyle, kültürlenmiş nöronlarda mitokondriyal transportun uzun süreler boyunca görselleştirilmesidir. Bu işlem, öncelikle kültürlenmiş nöronlardaki mitokondrilerin organel hedefli bir floresan proteinle işaretlenmesiyle gerçekleştirilir. Prosedürün ikinci adımı ise, kontrol koşulları altında mitokondriyal transport görüntülerinin elde edilmesidir.Prosedürün üçüncü adımı, serotonin gibi nöromodülatörlerin akut uygulamasının ardından mitokondriyal transportun zaman ayarlı (time-lapse) görüntü serilerinin elde edilmesidir. Prosedürün son adımı ise elde edilen zaman ayarlı görüntü serilerinin analizinin gerçekleştirilmesidir. Nihayetinde, nörotransmitterlerin mitokondriyal transportu modüle ettiğini gösteren sonuçlar elde edilebilir.Bu sonuçlar, yalnızca nöronlardaki floresan işaretli mitokondrilerin uzun süreler boyunca görüntülenmesiyle elde edilir. Bu yöntemin, canlı boya işaretlemesi veya GFP'nin geçici transfeksiyonu gibi mevcut tekniklere göre temel avantajı, sağlıklı kültür nöronlarında mitokondriyal taşımanın uzun süreli gözlemlerini gerçekleştirmeyi mümkün kılmasıdır. Sabit ısıtılmış ve nemlendirilmiş bir ortam sağlamak amacıyla bu prosedürü, laboratuvarımdan yardımcı araştırmacı Chen uygulamalı olarak gösterecektir.Sahne üstü inkübatör, standart bir doku kültürü inkübatörüne kapalı bir devre ile bağlanmıştır; 35 milimetrelik cam tabanlı kültür kapları için kullanılan A-P-F-T-E membran kapak, nöronal kültür ile inkübatör içindeki ortam arasında gaz değişimine olanak tanır. Bunlar ve diğer özellikler birlikte, kültüre edilmiş nöronların çeşitli deneysel koşullar altında uzun süreli gözlemlenmesini sağlar. Mito turbo red proteini eksprese eden kültüre edilmiş hipokampal nöronları içeren kültür kabını bir doku kültürü steril kabinine transfer edin.Plastik kapağı PFTE membran kapakla değiştirin ve kültür kabını mikroskoba taşıyın. İnkübatör tabanını mikroskop tablasına klipsleyin ve ardından membran kaplı kültür kabını dikkatlice yerleştirin. Gömülü açıklıkta, inkübatör muhafazasını inkübatör tabanındaki çelik direklerle hizalayın ve muhafazayı tabanın üzerine indirin.Kasa ile taban arasında iyi bir sızdırmazlık sağlanana kadar başparmak vidalarını sıkın. Görüntüleme yazılımını açmadan önce mikroskop filtre tekerleği kontrol cihazını, ışık kaynağını ve CCD kamerayı açın. Bu protokolde görüntüleme için beş numaralı lam kullanılır.63x yağ daldırma objektifine geçiş yapın ve objektif taretini indirin. Objektifin yüzeyine dikkatlice daldırma yağı uygulayın. Araç çubuğundaki odak penceresi simgesine tıklayın ve lamba sürgüsünü hareket ettirerek parlak alan lambasını açın.Işık yoğunluğunu ayarlamak için okülerleri kullanarak bir hücre alanına odaklanın ve ilgilenilen bir hücre bulun. Mikroskop sekmesi altından XI üç filtreyi seçin, mito turbo red proteini ile işaretlenmiş hücrelerdeki mitokondriler için odak düzlemini bulun ve ardından CCD kameraya geçiş yapın. Araç çubuğundaki görüntü yakalama simgesine tıklayarak, 100 milisaniyelik bir başlangıç pozlama süresi ile işleme başlayın.Yakalama penceresindeki test ve en iyi (best) butonlarını kullanarak optimum pozlamayı bulun. Yakalama türü kutusunun altında, zaman atlamalı (time-lapse) seçeneğini işaretleyin ve zaman atlamalı yakalama seçenekleri altından istenen görüntüleme aralığını ve görüntüleme oturumu süresini seçin.Yakalama penceresinin sağ alt kısmındaki başlat düğmesine tıklayarak zaman ayarlı görüntüleme işlemini başlatın. Bir kontrol görüntüleme oturumu gerçekleştirdikten sonra, sahne üstü inkübatörün üst kısmındaki enjeksiyon portları aracılığıyla nörotransmitterleri veya diğer reaktifleri uygulayın. Serotonin reseptör agonisti 8-OH-DPAT eklendiğinde, ok başı ile belirtilen ve önceden hareketsiz olan mitokondriler hipokampal nöronun aksonu boyunca hareket eder.Serotonin eklenmeden önce bireysel mitokondrilerin ortalama hızı ve yönelimi özetlenmiştir. Mitokondrilerin çoğunluğu durağandır; ancak serotonin eklemesinden sonra, mitokondrilerin %42'si artık yönlü hareket sergilemekte ve serotonin yokluğunda yönlü hareket sergileyenlere göre daha uzak mesafeler katetmektedir. Aksine, dopamin eklenmesinin ardından, bu prosedürün takibindeki bir görüntüleme oturumunun son 15 dakikasında mitokondrilerin %92'si durağandır.Ek soruları yanıtlamak amacıyla birden fazla sinyali izlemek için diğer yöntemler uygulanabilir. Örneğin, nöronlardaki kalsiyum aktivitesi ile mitokondriyal transportun birbiriyle nasıl ilişkili olduğu incelenebilir.

neuromodulation-mitochondrial-transport-live-imaging-hippocampal

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Organel ticareti dinamiklerini inceleyerek canlı hücre görüntüleme özellikle yardımcı programı. Burada geniş alan floresan mikroskobu kullanarak kültürlü nöronların yoğun çekirdekli veziküller canlı görüntüleme için bir protokol. Bu protokol, esnek ve diğer organeller gibi mitokondri gibi görüntü adapte edilebilir, endosomes ve peroksizomlara.

İlköğretim Kültür Hipokampal Nöronlar Yoğun çekirdekli veziküller Canlı Görüntüleme

Kaynak: Katsalifis, A., et al. Primer Nöronlarda Mitokondriyal Glutatyon Redoks Durumunun Ratiometrik İndikatör Kullanılarak Canlı Görüntülenmesi. J. Vis. Uzm. (2021)Bu video, bir oransal floresan indikatörü kullanılarak birincil nöronlarda mitokondriyal redoks durumunun görüntülenmesini göstermektedir. Bir floresan mikroskobu altında iki uyarma dalga boyu uygulanarak, mitokondriyal oksidasyonu değerlendirmek için floresan yoğunluk oranı ölçülür. Protokol, kalsiyum akışını ve reaktif oksijen...

Primer nöronlarda mitokondriyal redoks durumunun bir oransal gösterge kullanılarak görüntülenmesi

Yaşlanmada hücre içi Ca2+ yeniden şekillenmesi, Ca2+ aşırı yükünün aracılık ettiği süreçler olan eksitotoksisiteye ve nöron hasarına katkıda bulunabilir. Bu çalışmada, bir nöronal yaşlanma modeli olan sıçan hipokampal nöronlarının uzun süreli kültürlerinde sitozolik ve mitokondriyal Ca2+'nın floresan ve biyolüminesans görüntülemesi kullanılarak yaşlanan beyinde Ca2+ yeniden şekillenmesini araştırmayı amaçladık.

Subselüler Ca Floresans ve Biyoparlaklık Görüntüleme<sup&gt; 2+</sup&gt; Yaşlı Hipokampal Nöronlar

Bu yöntem, yaşayan farelerin Hippocampus optik erişim sağlayan kronik bir hazırlık açıklar. Bu hazırlık, birkaç hafta boyunca nöronal yapısal plastisite ve aktivite-uyarılmış hücresel plastisite uzunlamasına optik görüntüleme gerçekleştirmek için kullanılabilir.

Canlı fareler içinde dorsal hipokampal CA1 uzunlamasına Iki foton görüntüleme

Bozulmuş mitokondriyal taşıma ve morfolojisi çeşitli nörodejeneratif hastalıklarda rol oynamaktadır. Sunulan protokol, kalıtsal spastik paraplejide mitokondriyal taşıma ve morfolojiyi değerlendirmek için indüklenmiş pluripotent kök hücre kaynaklı ön beyin nöronlarını kullanır. Bu protokol, aksonların boyunca mitokondriyal ticaretinin karakterizasyonuna ve nörodejeneratif hastalıkların incelenmesini kolaylaştıracak morfolojilerinin analizine olanak sağlamaktadır.

Kalıtsal Spastik Paraplejide İnsan Kaynaklı Pluripotent Kök Hücre Kaynaklı Nöronlarda Mitokondriyal Taşıma ve Morfolojinin Analizi

Bu makale, infüzyon kanülü ile desteklenmiş özel yapım bir görüntüleme penceresinin hazırlanmasını ve farelerde hipokampüsün CA1 bölgesine implantasyonunu göstermektedir.

Behaving Farelerinin Hipokampusunda Nöronal Aktiviteleri Görselleştirmek için Kraniyotomi Prosedürü

Bu makalede, konfokal canlı mikroskopi kullanılarak primer hipokampal ve kortikal nöronlarda bazal redoks durumundaki farklılıkları ve akut pertürbasyonlara redoks yanıtlarını belirlemek için bir protokol açıklanmaktadır. Protokol, diğer hücre tiplerine ve mikroskoplara minimum değişiklikle uygulanabilir.

Primer Nöronlarda Mitokondriyal Glutatyon Redoksu Durumunun Oranmetrik Gösterge Kullanılarak Canlı Görüntülenmesi

Bu yazıda, fare hipokampal CA1'deki istirahat mikrogliasının kronik in vivo gözlemi için hassas kontrollü cerrahi ve iki foton mikroskobu kullanılarak bir yöntem açıklanmaktadır.

İn Vivo Fare Hipokampüsünde Mikroglia'nın Kronik İki Foton Görüntülemesi

Mevcut yöntemler, kolayca bulunabilen genetik olarak kodlanmış kalsiyum göstergelerini kullanarak Caenorhabditis elegans'ta in vivo olarak yüksek çözünürlüklü, sub-kompartmanlı kalsiyum görüntüleme için orantılı olmayan bir yaklaşımı tanımlamaktadır.

Nöronal Kalsiyum Kullanımının In Vivo Subsellüler Görüntülemesi

Mitokondriyal ağ son derece karmaşıktır ve analiz edilmesini çok zorlaştırır. Yeni bir MATLAB aracı, hızlandırılmış görüntülerde canlı konfokal görüntülenen mitokondriyi analiz eder, ancak bireysel manuel dikkat gerektiren büyük bir çıktı hacmine neden olur. Bu sorunu çözmek için, hızlı dosya analizine olanak tanıyan rutin bir optimizasyon geliştirildi.

İzoforma Özgü Retinoik Asit Reseptörleri ile Canlı Nöronal Mitokondri Homeostaz Modülasyonunun Optimize Edilmiş Otomatik Analizi

Burada, aksonal taşıma üzerindeki patolojik protein kaynaklı etkileri analiz etmek ve bu etkilere aracılık eden mekanik yolları belirlemek için primer hipokampal kemirgen nöronlarının transfeksiyonunun canlı hücre konfokal görüntüleme ile nasıl birleştirileceğini gösteriyoruz.

Primer hipokampal nöronlarda patolojik proteinlerin aksonal taşıma üzerindeki etkilerini ölçmek için canlı hücre görüntülemenin kullanılması

Öğrenin, hipokampal nöronlarda mitokondriyal taşımayı uzun süreli canlı görüntüleme ile incelemeyi. Serotonin gibi nöromodülatörlerin etkilerini floresan mikroskopi kullanarak değerlendirin.

Nöromodülasyon ve Mitokondrial Ulaştırma: Uzun Süreleri içinde Hipokampal Nöronlar Canlı Görüntüleme

Daha fazla video keşfet