Name: Farelerde Spontan İntraserebral Kanama Model Otolog Kan Enjeksiyon (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-08-24T12:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 2 s
Description: Öğrenin farelerde otolog kan enjeksiyonu ile spontan intraserebral kanama modeli oluşturmayı. Çift enjeksiyon tekniği ile kan reflüsü riskini azaltarak in vivo patoloji ve nöro davranışsal sonuçları inceleyin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu iş, Translasyonel Tıp ve Tedavi Enstitüsü dostluk ve Pennsylvania Üniversitesi ve Marlene L. Cohen ve Jerome H. Fleisch Scholar Grant, Tıp ve Mühendislik (T32HL007954) Enstitüsü eğitim bursu tarafından finanse edildi Connecticut Üniversitesi Sağlık Merkezi (LHS) ve NIH NS-029.331 (FAW).

1. Ekipmanların hazırlanması <ol><li> Bakteriyel kontaminasyonu en aza indirmek için,% 75 etanol ile stereotaksik çerçeve ve pompa aşağı doğru silin. </li><li> Hamilton şırınga ve erimiş silika iğne sterilize edin. Not: Eğer kimyasal sterilizasyon kullanılır, kullanmadan önce steril su ile birkaç kez durulama emin olun. </li><li> % 75 etanol ile parafin kağıt yüzeyi silin ve kurumasını bekleyin. </li></ol> 2. Enjeksiyon için fare hazırlanması Not: fareler var, onlara yeni bir çevre gelmesini ve stresi azaltmak için izin hayvan tesis ameliyattan önce en az 7 gün teslim. <ol><li> Ameliyat öncesi bazal için fare tartılır. </li><li> Tepkisiz kadar kuyruk tutam İsofluranın% 30 Oksijen,% 70 oksit ve% 4 ile anestezi neden </li><li> Post-operatif analjezi için buprenorfin 0.1mg/kg intraperitoneal fare enjekte </li><li> Kafa derisi Tıraş </li><li> Steril vazelin ile Coat gözleri </li><li> Betadin x 3 mendil ile kafa derisi hazırlayın, sonra kafa derisi kurumasını bekleyin </li><li> Kafa derisi steril cerrahi neşter kullanılarak 1 cm orta hat sagittal kesi Not: cömert bir kesi kafatası yerlerinden tam maruz sağlayacaktır. </li><li> Tabanından başlayan kuyruk 1 cm ventral yüzeyinin 1 cm Tıraş ve betadin x 3 mendil hazırlamak </li><li> Stereotaksik çerçeve yerleştirin fare Not: fare mükemmel bregma bregma sağ kalma ve en az 3 mm, çerçeve tabanı ile kafatası paralel yüzeyi ile çerçeve güvenli sağlamak için önemlidir. </li></ol> 3. Intraserebral kanama ameliyatı Notlar: tüm ameliyat boyunca sürekli 37 muhafaza İsofluranın% 30 Oksijen,% 70 oksit ve% 1-3, fare ile anestezi ± 0.5 ° C termistör kontrollü ısıtma yastığı ve rektal termometre ile izlenir. <ol><li> 1 cc şırınga çerçeve üzerinde steril 27 g iğne takın. </li><li> Stereotaksik kol tam bregma yerinde iğne kadar ayarlayın. </li><li> Bu iğne 2,5 mm kafatası yüzeyine bregma lateral ve alt böylece kol ayarlayın. </li><li> El tamamen kafatası delinecek çerçeve dikkate alarak hafif aşağı yönlü hareketi uygularken kafatası yüzeyinde burr hole şırınga döndürün. </li><li> Şırınga / iğne ile iğne ve tam burr hole elle çıkarın Not: Eğer kafatası ve beyin parankimi içine iğne yanlışlıkla itme riski en aza indirir iç tablo delikli varken el ile burr hole tamamlanması hemen tanınması için izin verir. </li><li> , Steril cerrahi bıçak kullanarak kuyruk ventral yüzeyinde enine kesi yapın ve arteryel kan 2-3 büyük damla parafin kağıt üzerine düşmesine izin. Sonra hızlı bir şekilde steril gazlı bez kullanarak basıncı ile kanamayı durdurmak. </li><li> 17 mcL kan Hamilton enjektör ve pompa üzerinde yer şırınga içine çekin. </li><li> Point 5 stereotaksik kol ayarlayın ° dikey eksen mediale göreceli. </li><li> Bu iğne ucu kafatasında burr hole üzerinde ve daha sonra alt iğne 3,5 mm kadar dikkatle stereotaksik kol ayarlayın. </li><li> 2 dakika sonra 0.5 mm iğne geri bekleyin (böylece ucu derin 3 mm) </li><li> Beyin iğne etrafında yeniden genişletmek ve enjeksiyon sırasında iğne ekleme parça geri kaçmasını kan riskini en aza indirmek için 5 dakika bekleyin. </li><li> 7.5 mcL kan 1 mcL / dakika enjekte edilir. </li><li> Ilk kan pıhtılaşması izin ve doku vardiya, intrakranial basıncı yükselmeleri en aza indirmek için meydana 5 dakika bekleyin. </li><li> 1 mcL / dakika kalan 7.5 mcL enjekte </li><li> Iğne, kan pıhtılaşması için izin vermek için 25 dakika boyunca yerinde kalması için izin verin Not: Başarısızlık, kan pıhtılaşması, kan iğne ekleme sitesi reflüye neden olacaktır iğne çekilirken beklemek </li><li> Yavaş yavaş geri çekilmesi ve iğne iğne herhangi bir kalıntı kan pıhtılaşma önlemek ve iğne tekrar kullanılabilirliği sağlamak için derhal sıcak su ile durulayın. </li><li> Çerçeveden çıkarın ve fareyi, veteriner cerrahi yapıştırıcı ile kuyruk ve kafa derisi kesiler yakın. </li><li> Anestezi kapalı açın. </li><li> Sürekli gıda nemlendirilmiş için ücretsiz erişim ile ısındı olurken uyandırmak için fare izin verin. </li><li> Littermates tamamen uyanık kafes fare dönün. Gıdaya erişim hayvanlara yardım etmek için kafesin altındaki ıslak gıda pelet yerleştirin. </li></ol> 4. Temsilcisi sonuçları: <img src="/files/ftp_upload/2618/2618fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1. Koronal bölümünde, 15 dakika ICH cerrahi sonra fare beyin . Hemen sonra kurban beyin iğne ekleme yerinde bir koronal bölümünde brüt muayene dayalı ICH başarısı için denetlendi. Korpus kallosum geçmiş, ya da ventriküller içine iğne izi kadar, beyin tabanına paletli kanamalar başarısız sayılır ve o fare tüm analizler elendi. Genel ICH success oranları% 0 mortalite ile 50 farelerde% 75-85 idi. <img src="/files/ftp_upload/2618/2618fig2.jpg" alt="Şekil 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 2"> Şekil 2 Silindir test sağ bazal ganglion ICH sonra sol hemiparezi göstermektedir. ICH cerrahi sonrası (A) Örnek fare arkada. Sadece sağ ön ayakları, sonra sol bazal ganglion ICH silindir duvara yerleştirilmesi unutmayın. (B) silindir test grafiği sonra farelerin kohortta 1 sonuç ICH cerrahi (n = 5) sahte karşılaştırıldığında (n = 4). Şam farelerin kan enjeksiyon (iğne beyin içine yerleştirilmiş) dışındaki tüm prosedürler vardı. Her fare, 12 cm çapında açık cam silindir yerleştirilir ve 20 rears gözlendi. Silindir duvara ön ayakları ilk yerleşim arka ortalama gol oldu. Fare yere geri döndü ve sonraki arka puan kadar daha sonraki hareketleri (yanal arama gibi) gol değildi. 0 hiçbir ön ayakları tercihi ve 1 sadece sağ ön ayakları nerede, (# + # sağ sol + # iki) / - lateralite indeksi olarak hesaplanır (silindir tarafında # # ön ayakları yerleşimleri sol sağ ön ayakları yerleşimleri) .

<ol><li>Hua, Y., Schallert, T., Keep, R. F., Wu, J., Hoff, J. T., Xi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+Tests+After+Intracerebral+Hemorrhage+in+the+Rat%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Behavioral Tests After Intracerebral Hemorrhage in the Rat.</a> Stroke. 33, 2478-2484 (2002).</li>
<li>James, M., Warner, D., Laskowitz, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+Models+of+Intracerebral+Hemorrhage%3A+A+Translational+Perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Neurocritical+Care%22%5BJournal%5D)">Preclinical Models of Intracerebral Hemorrhage: A Translational Perspective.</a> Neurocritical Care. 9, 139-152 (2008).</li>
<li>Foerch, C., Arai, K., Jin, G., Park, K. -P., Pallast, S., van Leyen, K., Lo, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+Model+of+Warfarin-Associated+Intracerebral+Hemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Experimental Model of Warfarin-Associated Intracerebral Hemorrhage.</a> Stroke. 39, 3397-3404 (2008).</li>
<li>Nakamura, T., Xi, G., Hua, Y., Schallert, T., Hoff, J. T., Keep, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracerebral+hemorrhage+in+mice%3A+model+characterization+and+application+for+genetically+modified+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cerebral+Blood+Flow+and+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Intracerebral hemorrhage in mice: model characterization and application for genetically modified mice.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 24, 487-494 (2004).</li>
<li>Rynkowski, M. A., Kim, G. H., Komotar, R. J., Otten, M. L., Ducruet, A. F., Zacharia, B. E., Kellner, C. P., Hahn, D. K., Merkow, M. B., Garrett, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+intracerebral+hemorrhage+using+autologous+blood+infusion%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protocols%22%5BJournal%5D)">A mouse model of intracerebral hemorrhage using autologous blood infusion.</a> Nat. Protocols. 3, 122-128 (2008).</li>
<li>Wang, J., Fields, J., Doré, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+development+of+an+improved+preclinical+mouse+model+of+intracerebral+hemorrhage+using+double+infusion+of+autologous+whole+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">The development of an improved preclinical mouse model of intracerebral hemorrhage using double infusion of autologous whole blood.</a> Brain Research. 1222, 214-221 (2008).</li>
<li>Zhao, X., Sun, G., Zhang, J., Strong, R., Song, W., Gonzales, N., Grotta, J. C., Aronowski, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hematoma+resolution+as+a+target+for+intracerebral+hemorrhage+treatment%3A+Role+for+peroxisome+proliferator-activated+receptor+%CE%B3+in+microglia%2Fmacrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Hematoma resolution as a target for intracerebral hemorrhage treatment: Role for peroxisome proliferator-activated receptor γ in microglia/macrophages.</a> Annals of Neurology. 61, 352-362 (2007).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Intraserebral kanama, spontan bazal ganglia kanama tekrarlanabilir bir model otolog kuyruk arter kan sonuçlarını kullanarak farelerde Bu cerrahi modeli. Farelerde bir ICH modeli patofizyolojisi araştırmak amacıyla transgenik hayvanların durumu avantaj sunar; Ancak, bunların küçük boyutlu büyük hayvanların daha nöroşirürjikal işlemler teknik açıdan daha zor hale getirir. Kollajenaz model ve otolog kan enjeksiyonu modeli deneysel ICH iki köklü modelleri. Kollajenaz modeli daha kolay bir prosed...

Stereotaksik fare nöroşirürji için bir çerçeve (Stoelting, 51.925) Mikroinfüzyon pompa ve işlemci (UMP-3 ve Micro4, Dünya Hassas Aletler, Sarasota, FL) Fare sıcak (Stoelting, 50300) İnhalasyon fare anestezi (Braintree Bilimsel, EZ-AF9000) 25 mcL gaz geçirmez borosilikat Hamilton kaplı piston enjektör ve herhangi bir iğne (Hamilton şirket, Reno, NV, 1702RN şırınga: 765.401, halkalı: 30.949, mesafe: 30.946) erimiş silika iğne, 2 cm uzunluğunda (Hamilton, 17739) kesilmiş * Not Hamilton şırınga ve erimiş silika iğne eğer her ameliyat öncesi sterilize birden fazla ameliyatları için yeniden olabilir. Bu malzemeler, kan pıhtılaşmasını önlemek için çok önemlidir. Steril cerrahi eldiven Cerrahi önlük, bone ve maske Betadine % 75 etanol steril 27 g iğne (tek kullanımlık) steril 1 cc şırınga (tek kullanımlık) steril cerrahi bıçak Cidex steril su buprenorfin ve izofluran steril gazlı bez parafin kağıt kareler Veteriner cerrahi yapıştırıcı (Vetbond, 3M, St Paul, MN)

farelerde spontan İntraserebral kanama model otolog kan enjeksiyon

Autologous Blood Injection to Model Spontaneous Intracerebral Hemorrhage in Mice

İntraserebral kanama (ICH) sonrası yaralanmanın patofizyolojisinin incelenmesi, tekrarlanabilir bir hayvan modeli gerektirir. ICH, tüm inmelerin %10-15'ini oluşturmasına rağmen, hâlâ spesifik ve etkili bir tedavi yöntemi bulunmamaktadır. Farelerdeki otolog kan enjeksiyon modeli, insandaki spontan hipertansif kanamayı taklit ederek arteriyel kanın bazal ganglionlara stereotaksik olarak enjekte edilmesini içerir. Kanama sonrası yanıt bu şekilde in vivo olarak incelenebilir ve nörodavranışsal eksiklikler nicelendirilebilir; bu da ortaya çıkan patolojinin tanımlanmasına ve potansiyel terapötik ajanların test edilmesine olanak tanır. Bu protokolde açıklanan prosedür, kanın iğne yolundan geri kaçma riskini minimize etmek için çift enjeksiyon tekniğini kullanır, pompalama sisteminde antikoagülan kullanmaz ve sistemdeki tüm ölü hacmi ve genişleyebilir tüpleri ortadan kaldırır.

Bu protokolü açıklanan farelerde intraserebral kanama otolog kan enjeksiyonu modeli, iğne izi kadar kan reflü, pompa sistemi hiçbir antikoagülanlar riskini en aza indirmek için çift enjeksiyon tekniği kullanır ve sistemdeki tüm ölü boşluk ve genişletilebilir boru ortadan kaldırır.

Farelerde Spontan İntraserebral Kanama Model Otolog Kan Enjeksiyon

İntraserebral kanama (İSK) sonrası yaralanmanın patofizyolojisinin incelenmesi, tekrarlanabilir bir hayvan modeline ihtiyaç duyar. İSK vakaları %10-15 oranında gerçekleşirken...

Bu prosedürün genel amacı, in vivo ortamda kalıcı patolojiyi ve nörodavranışsal sonuçları incelemek için farede spontan intraserebral kanamayı modellemektir. Bu işlem, öncelikle farenin cerrahiye hazırlanmasıyla gerçekleştirilir. Ventral kuyruk ve kafa derisi tıraşlanır ve temizlenir.Ardından, kafatası işaretleri kullanılarak kafatası üzerinden hassas bir şekilde yerleştirilmiş bir bur deliği açılır. Üçüncü olarak, kuyruk arterinden kan alınır ve bazal gangliya stereotaktik olarak enjekte edilir. Daha sonra enjeksiyon iğnesi dikkatlice çıkarılır ve insizyon kapatılır.Sonuç olarak, immünohistokimya, akış sitometrisi ve fonksiyonel testlerin yanı sıra diğer yöntemler aracılığıyla lokalize inflamasyon, hücre ölümü ve nörolojik defisiti gösteren sonuçlar elde edilebilir. Genel olarak, prosedürde yeni olan araştırmacılar kan pıhtılaşmasıyla sorun yaşayacaktır; çünkü enjekte edilen küçük miktardaki kan, enjeksiyonun yapılmasına kadar geçen süre içinde sistem içinde pıhtılaşacaktır. İzoflorin ile anestezi indükledikten sonra kafa derisini tıraş edin ve cildi Betadine ile üç kez silin.Ardından, hayvanın gözlerini steril vazelin ile kaplayın. Kafa derisi kuruduktan sonra, steril bir bistüri

autologous-blood-injection-to-model-spontaneous-intracerebral

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Intraserebral kanama (İSK) ve Klinik ilgili hayvan modelleri hemorajik inme bilgimizi genişletmek ve yeni tedavi stratejileri incelemek gereklidir. Bu çalışmada, biz tanımlamak ve farelerin bazal ganglion (korpus striatum) içine otolog tam kan ya da bakteriyel kollajenaz ya tek taraflı enjeksiyon uygulamak iki ICH modelleri değerlendirir.

Farelerde Modelleme İntraserebral Kanama: Otolog Kan veya bakteriyel kollajenaz Enjeksiyon

Bu video, bir subaraknoid kanama sıçan modeli oluşturma prosedürünü göstermektedir. Anestezi uygulanmış bir sıçan, intrakraniyal basıncı ve serebral kan akışını ölçmek için problarla implante edilir. Hedef bölge belirlenir ve iğne ön kiazmatik bir pozisyonda yerleştirilir. Otolog kan daha sonra subaraknoid boşluğa enjekte edilir, kafa içi basıncı arttırır ve serebral kan akışını azaltır ve model oluşturulur.

Otolog Kan Enjeksiyonu ile İndüklenen Subaraknoid Kanama Sıçan Modelinin Kurulması

Kaynak: Tang, X. et. al., Otolog Kanın İkili Enjeksiyonu ile Masif Pontin Kanaması. J. Vis. Uzm. (2021)Bu protokol, masif pontin kanamasını modellemek için bir sıçanın beyninin pontin bölgesine otolog kanın kontrollü infüzyonunu tanımlar. Amaç, lokalize basıncı artırarak lokalize bir beyin kanamasını simüle etmektir.

Otolog Kan Enjeksiyonu ile Bir Sıçan Modelinde Masif Pontin Kanamasının İndüklenmesi

Willis perforasyon intralüminal Circle subaraknoid kanama standartlaştırılmış bir fare modeli tarif edilmektedir. Gemi perforasyon ve subaraknoid kanama intrakranial basınç izleme tarafından izlenir. Buna ek olarak, çeşitli çok önemli parametreler kaydedilir ve fizyolojik koşulları sağlamak için kontrol edilir.

Subaraknoid Kanama bir fare modeli

İntraserebral kanamanın klinik öncesi modelleri, klinik hastalığın belirli yönlerini taklit etmek için kullanılır. Bu nedenle, yaralanma mekanizmaları ve potansiyel terapötik stratejiler araştırılabilir. Bu protokolde, intrastriatal (bazal gangliyonlar) otolog kan veya kollajenaz enjeksiyonları olmak üzere iki intraserebral kanama modeli tanımlanmıştır.

İntraserebral Kanama Fare Modellerinden olarak Otolog Blood veya Klostridyal Kollajenazının intrastriatal Enjeksiyon

Bu protokolde, otolog tam kandan cisterna magna'ya çift enjeksiyon la standart laştırılmış subaraknoid kanama (SAH) fare modeli tanımlanmıştır. Çift enjeksiyon prosedürünün yüksek standardizasyon derecesi mortalite ile ilgili göreceli güvenlik ile SAH bir orta-akut modeli temsil eder.

Subaraknoid Kanama Modeli olarak Cisterna Magna içine Kan Çift Doğrudan Enjeksiyon

Otolog kanın çift enjeksiyonu yoluyla bir sıçanda büyük bir pontin kanama modeli oluşturmak için bir protokol sunuyoruz.

Otolog Kanın Çift Enjeksiyonu ile Masif Pontine Kanaması

Subaraknoid kanama insanda yüksek mortalite ve morbidite yükü taşımaya devam etmektedir. Durum ve patofizyolojisi hakkında daha fazla araştırmayı kolaylaştırmak için, kiazmatik öncesi, tek enjeksiyon modeli sunulmaktadır.

Bir sıçan modelinde deneysel subaraknoid kanamayı indüklemek için kiazmatik öncesi, tek otolog kan enjeksiyonu

Parkinson hastalığı hareket yeteneği etkilere neden, merkezi sinir sistemindeki dopaminerjik nöronların dejenerasyonu ile sonuçlanan bir nörodejeneratif hastalıktır. Rotenon modelleri Drosophila Parkinson hastalığı bulunmaktadır. Bu kağıt rotenone neden spontan ve irkilme-kaynaklı hem lokomosyon eksiklikleri niteleyen iki deneyleri özetliyor.

Yöntem Spontan Karakterizasyonu Ürkütme kaynaklı hareket yeteneği bir Rotenon ile uyarılan Parkinson Hastalığı Modeli için<em&gt; Drosophila</em

Burada fare Zika virüs kaynaklı microcephaly bir model oluşturmak için bir yöntem açıklanmaktadır. Bu iletişim kuralı embriyonik, Yenidoğan ve yetişkin-sahne intraserebral aşılama Zika şunun için yöntemler içerir.

İntraserebral enjeksiyon stratejileri kullanarak Zika virüs kaynaklı nörolojik bozukluklar için fare modelleri oluşturma: embriyonik, Yenidoğan ve yetişkin

Öğrenin farelerde otolog kan enjeksiyonu ile spontan intraserebral kanama modeli oluşturmayı. Çift enjeksiyon tekniği ile kan reflüsü riskini azaltarak in vivo patoloji ve nöro davranışsal sonuçları inceleyin.

Farelerde Spontan İntraserebral Kanama Model Otolog Kan Enjeksiyon

Daha fazla video keşfet