Name: İzolasyonu Drosophila melanogaster Testisler (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-05-13T13:00:00.000+00:00
Duration: 3 min 13 s
Description: Öğrenin Drosophila melanogaster testis izolasyonunu soğuk PBS ve diseksiyon iğneleri kullanarak. Bu hızlı yöntem genetik ve moleküler biyoloji araştırmaları için RNA ve protein analizlerine olanak tanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Yazarlar Vasia Vagin laboratuvarımızda bu tekniği tanıtmak için teşekkür ederiz.

<ol><li> Siyah bir arka plan ile bir cam mikroskop lamı olun: mikroskop, slayt olarak aynı boyutta 20 # beyaz kağıt kesin. Slayt boyutlu kağıt siyah renkli bir tarafı (örneğin, Sharpie) kalıcı bir kalem kullanarak. Siyah tarafı beyaz tutkal (Elmer) uygulayın ve slayt için kağıt yapışır. Slayt yeniden kullanılabilir. Kullanarak ¾ "etiketi bant (Fisherbrand), CO 2 sinek pedi bir yere sabitlemek için, mikroskop lamı, cam tarafı güvenli. </li><li> 0-3 gün eski erkek sinekleri toplayın. </li><li> Bir kova buz hazırlayın, salin (PBS), diseksiyon iğneleri fosfat tamponlu. </li><li> CO 2 akışı kullanarak 50-100 sinekler Anesteziyoloji ve mikroskop lamı yakın sinek ped şişe veya flakon aktarabilirsiniz. </li><li> Pipet ~ mikroskop lamı ortasında bir damla 50 ul buz gibi soğuk PBS. </li><li> Yavaşça bir erkek sinek pick up diseksiyon PBS düşüş içine iğne yerinde sinek PBS, nazik bir dokunuş ventral tarafı (yani, kanatları yakın) içine diseksiyon iğne iğne daldırma. </li><li> Sıkıca aşağı iterek, toraks ve karın arasında, sinek ortasına bir iğne yerleştirin. Altıncı (A6) ve yedinci (A7) karın kesimleri (alttan ikinci ve üçüncü çizgiler) arasındaki diğer iğne yerleştirin; karın toraks uzak çekin. </li><li> Testis dışında diğer organları, özellikle bağırsak Tease. Özellikle beyaz mutantlar, testis ve bağırsak benzer. Önemli farklılıklar her zaman çift testis ki; her testis bir spiral desen ve gut daha renkli daha beyaz. </li><li> Testislerin bir polipropilen mikrosantrifüj tüp buz gibi soğuk PBS içinde saklayın. </li></ol> Temsilcisi Sonuçlar: <img src="/files/ftp_upload/2641/2641fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1. Flybase.org/reports/FBim0000074.html erkek üreme sisteminin Dorsal görünümüdür. Flybase atıf. "Sayfa 508 Şekil 38 A Miller (1950) sonra A. Miller Drosophila melanogaster imago iç anatomi ve histoloji M. Demerec, editör, Drosophila, bölüm 6, sayfaları 420 Biyoloji 534. Cold Spring Harbor Laboratuvarı'nda basın, faks baskı, 1994 Copyright Cold Spring Harbor Laboratuvarı'nda Press tarafından 1994. tür izin Basın Cold Spring Harbor Laboratuvarı (CSHL) ile birlikte kullanılır. <a href="http://www.cshlpress.com">http://www.cshlpress.com</a> .

<ol><li>Singh, S. R., Hou, S. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunohistological+Techniques+for+Studying+the+Drosophila+Male+Germline+Stem+Cell%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Immunohistological Techniques for Studying the Drosophila Male Germline Stem Cell.</a> Methods Mol Biol. 450, 45-59 (2008).</li>
</ol>

Biz yetişkin erkek Drosophila melanogaster testisler izole etmek için bir protokol sağlar. Teknik biri iki el koordinasyonu gerektirdiğinden, beceri, sadece uygulama ile geliyor.

<table><tbody><tr><td>Diseksiyon iğnesi</td><td>Araç</td><td>Fisher Scientific</td><td>S17346</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskobik Lamlar, Düz</td><td>Araç</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-553</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop Işığı</td><td>Araç</td><td>Schott AG</td><td>KO-1500</td><td></td></tr><tr><td>CO&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; pedi</td><td>Araç</td><td>Genesee Scientific</td><td>59-172</td><td></td></tr><tr><td>Benchtop Flowbuddy Komple Sistemi</td><td>Araç</td><td>Genesee Scientific</td><td>59-122WCU</td><td></td></tr><tr><td>Kabarcıklı Nemlendirici</td><td>Araç</td><td>Salter Labs</td><td>7100</td><td></td></tr><tr><td>Top doldurma iğnesi</td><td>Araç</td><td>Genesee Scientific</td><td>54-119</td><td></td></tr><tr><td>&amp;#190;&amp;#8221; Etiket Bandı</td><td>Sarf Malzeme</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-901-5B</td><td></td></tr></tbody></table>

İzolasyonu drosophila melanogaster testisler

Isolation of Drosophila melanogaster Testes

Drosophila melanogaster testisler, kök hücre bakım ve farklılaşma, mayoz ve soma-germline etkileşimleri çalışmaları için önemli bir model sağlar . Testisler genellikle 0-3 gün, pupa halinde eclosion sonra yetişkin erkekler izole edilmiştir. Yabani tip sineklerin testisler kolaylıkla çünkü sarı diğer dokulardan ayrılır, ama beyaz mutant sinekler testisler, laboratuvar deneyleri için ortak bir genetik arka plan sinek gut şekil ve renk olarak benzer. Cam bir mikroskop lamı üzerine siyah bir arka plan ile diseksiyon Sahne testisler oldukça kolay tanımlanmasını sağlar. Testisler diseksiyon iğneleri kullanarak sinekleri kaldırılır. Testis diseksiyonu için forseps kullanımı protokolleri ile karşılaştırıldığında, yöntem, iyi uygulanan bireysel 400-600 testis alındı, saatte 200-300 yabani tip sinekler testisler incelemek sağlayarak, çok daha hızlıdır. Beyaz sinek veya testislerin boyutu azaltmak mutantlar Testisler incelemek ve genellikle saat başına verim 200-400 testisler zor.

Drosophila melanogaster testisler hızla ve verimli bir şekilde diseksiyon iğneleri kullanarak yetişkin erkekler izole. Uygulama ile kolayca yüksek verim sıralama ya da daha geleneksel bir moleküler biyoloji yöntemleri ile DNA veya RNA veya protein analizi için yeterli antikor veya enzim tabanlı deneyleri için testislerin bir ya da iki gün içinde bir miktar ayırabilirsiniz.

İzolasyonu Drosophila melanogaster Testisler

Drosophila melanogaster testisleri; kök hücrelerin korunması ve farklılaşması, mayoz bölünme ve soma-germ hattı etkileşimlerinin incelenmesi için önemli bir model sağlamaktadır...

Bu prosedürün genel amacı, sıfır ila üç günlük erkek drosophila melanogaster sineklerinden testisleri izole etmektir. Bu işlem, erkek sineklerin anesteziye alınması ve testislerinin bir damla buz soğuk PBS içinde mikroskop altında iki disseksiyon iğnesi kullanılarak çıkarılmasıyla gerçekleştirilir; sineğin karnını göğüs kısmından ayırın.Son olarak, testisleri dokunun geri kalanından ayırın ve immunofloresan, boyama veya toplam RNA ve protein izolasyonu gibi çeşitli analitik tekniklerde kullanmak üzere toplayın. Disekt edilen testislerin bağırsaklardan ayırt edilmesinin zor olması nedeniyle, bu yöntemin görsel olarak gösterilmesi kritik önem taşır. Prosedür, laboratuvarımdan teknisyen shemei ma tarafından gösterilecektir.Öncelikle bir buz kovası, disseksiyon iğneleri ve yaklaşık 100 milliliters fosfat tamponlu salin hazırlayın. PBS'yi soğuması için buz kovasına yerleştirin. Slayda uygun boyutta kesilmiş beyaz 20 pound kağıt kullanarak siyah arka planlı bir mikroskop lamı hazırlayın.Ardından bir tarafı siyaha boyayın. Kalıcı bir markör kullanarak, kağıdı lam üzerine yapıştırın ve lami CO2 pedine sabitleyin. Bir diseksiyon mikroskobu altında, sıfır ila üç günlük sineklerin bulunduğu bir şişeyi CO2 akımıyla anestezileyin ve sinekleri pedin üzerine boşaltın.Sabitlenmiş mikroskop lamının yanındaki erkek sinekleri, karakteristik koyu renkli çiftleşme kancalarından tanımlayın ve pipetle mikroskop lamının merkezine yaklaşık 50 µL buz gibi soğuk PBS damlatarak bir damla oluşturun. Bir diseksiyon iğnesini PBS damlasına batırıp sineğin ventral tarafına hafifçe dokunarak bir erkek sineği iğneye yapışmasını sağlayın ve kaldırın.Sinekle PBS damlasının içine yerleştirin ve bir iğneyi sineğin thorax ile abdomeninin arasına sıkıca bastırın. Diğer iğneyi altıncı ve yedinci abdominal segmentlerin arasına bastırın ve ardından abdomeni thorax'tan ayırarak çekin. Testisleri diğer organlardan, özellikle de benzer görünebilen ve testislerin gut ile ayırt edilmesine yardımcı olacak olan gut'tan ayıklayın.Testislerin her zaman çiftler halinde bulunduğunu, karakteristik spiral bir şekle sahip olduğunu ve bağırsak dokusundan daha beyaz olduğunu unutmayın. Testisleri, buz gibi soğuk PBS içeren bir mikro santrifüj tüpüne toplayın ve birkaç saat boyunca saklanabilecekleri şekilde buz üzerinde muhafaza edin. Bu prosedür takip edildiğinde, alışıldıktan sonra tek bir sinek bir dakikadan kısa sürede disseke edilebilir.Belirli bir mutant sinekte RNA repertuvarı nasıl değişir gibi ek soruları yanıtlamak amacıyla, küçük susturucu RNA'ların veya mikroRNA'ların derin sekanslanması gibi diğer yöntemler uygulanabilir.

isolation-of-drosophila-melanogaster-testes

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu video, aksesuar bezlerin erkek sineklerden diseksiyonunu açıklar ve izole bezin tek hücreli bir süspansiyona ayrılacağı bir örneği gösterir.

Drosophila Erkek Aksesuar Bez Diseksiyonu: İkincil Hücreleri İzole Etmek İçin Bir Yöntem

Bu video, Drosophila yumurtalığının genel anatomisini açıklar ve canlı veya sabit görüntüleme için yumurtalıkları diseksiyon yöntemini içerir.

Drosophila melanogaster Over Diseksiyonu: Ex Vivo Doku Hazırlığı İçin Bir Teknik

Bu video, ekdisteroidlerin ve diğer hormonların biyosentezi ve salgılanması için önemli olan karmaşık bir endokrin yapı olan Drosophila halka bezini tanımlar. Özellikli protokol diseksiyonunu, fiksasyonunu ve immün boyamayı gösterir.

Larva Halka Bezi Diseksiyonu: Gelişimsel Endokrin Organların Drosophila'dan İzolasyonu

Orta-geç Drosophila köklerinin Aşama özgü izolasyon çeşitli amaçlar için yararlıdır. Bu tür foliküllerin gelişmesi in vitro tahliller ve canlı görüntüleme ile bağlanmak üzere genetik ve / veya farmakolojik manipülasyonlara olanak sağlar kültür gelişir. Buna ek olarak, bu tür folikül mRNA ve protein izole gibi moleküler genetik araştırmaları için kullanılabilir.

Of Utility Sahne özgü Orta-geç<em&gt; Drosophila</em&gt; Folikül İzolasyon

Izole edilmesi ve faz kontrast ve floresan mikroskobu ile görüntüleme için Drosophila testis örnekleri (canlı ve sabit) hazırlanması için yöntemler burada tarif edilmiştir.

Spermatogenez sitolojik analizi: Canlı ve Sabit Hazırlıklar<em&gt; Drosophila</em&gt; Testisler

Bu protokol, Drosophila melanogaster pupalarından elde edilen sağlam testislerin ve germ hattı kistlerinin diseksiyonunu ve kültivasyonunu tanımlar. Bu yöntem, spermatogenezin ex vivo mikroskobik olarak gözlemlenmesine izin verir. Ayrıca, inhibitörlerin pupa testislerde germ hücresi gelişiminin belirli aşamaları üzerindeki etkisinin farmakolojik bir analizini tarif ediyoruz.

Diseksiyon, Görüntüleme ve Farmakolojik Tedavi: Drosophila Pupa Testis ve Bekar Erkek germ-line Kistler ex vivo Kültür

Burada, RNA dizilimi ve RT-qPCR için Drosophila erkek aksesuar bezlerinden (ikincil hücreler) belirli bir hücre popülasyonunu ayrıştırmak ve sıralamak için bir protokol sıyoruz. Hücre izolasyonu, diseksiyon gerektiren çok aşamalı bir ayrışma sürecinden sonra GFP ifade eden ikincil hücrelerin FACS saflaştırılması ile gerçekleştirilir, proteozs sindirim ve mekanik dağılım.

Drosophila Erkek Aksesuar Bezlerinin Sekonder Hücrelerinden RNA'yı Izole etmek için FACS tabanlı Protokol

Kan-beyin bariyerbütünlüğü sinir sistemi fonksiyonu için çok önemlidir. Drosophila melanogasterolarak, kan-beyin bariyeri geç embriyogenez sırasında glial hücreler tarafından oluşur. Bu protokol, D. melanogaster embriyolarında ve üçüncü instar larvalarında kan-beyin bariyeri oluşumu ve bakımı için taht yöntemlerini açıklamaktadır.

Drosophila melanogaster Kan-beyin Bariyer Bütünlüğü için Tahse

Bu protokolün amacı, Drosophila meyozetik spermatositler kullanarak canlı ve sabit hücre mikroskobu ile bozulmamış dokudaki hücre bölünmesini analiz etmektir. Protokol, Drosophila larvaları ve erken pupalardan bütün, bozulmamış testislerin nasıl izole edilip, mikroskopi için nasıl işleyip monte edilebildiğini gösteriyor.

Drosophila Larval ve Pupal Testislerinin Canlı, Sağlam Dokuda Hücre Bölünmesi Analizi İçin Hazırlanması

Burada, konfokal mikroskopi için uygun ve aynı zamanda tekrarlanabilir ve güvenilir etiketlemeye izin vermek için Drosophila testislerinin tüm montaj hazırlığı ve immünostainingi için geliştirilmiş bir protokol sunuyoruz. Bu protokolü, büyük S4-S5 spermatositleri üzerindeki kolokalizasyon deneylerinin 3D gösterimi ve niceliği ile göstermektedir.

Büyük Spermatositlerin 3D Konfokal Analizi için Tüm Kazdağları Drosophila Testlerinin İmmünostaining

Protokol, Drosophila melanogaster'deki X veya Y kromozomu ribozomal DNA lokusundan türetilen ribozomal RNA transkriptlerini ayırt etmek için tek nükleotid polimorfizmlerine duyarlı floresan in situ hibridizasyon (SNP-FISH) yöntemini tanımlar.

Tek Nükleotid Polimorfizmine Duyarlı FISH Drosophila melanogaster'de Locus'a Özgü Ribozomal RNA Transkripsiyonunun Tespiti

Öğrenin Drosophila melanogaster testis izolasyonunu soğuk PBS ve diseksiyon iğneleri kullanarak. Bu hızlı yöntem genetik ve moleküler biyoloji araştırmaları için RNA ve protein analizlerine olanak tanır.

İzolasyonu Drosophila melanogaster Testisler

Daha fazla video keşfet