Name: Atılan İnsan Fetal Kortikal Doku Sinir Kök Hücre Üretimi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-05-25T12:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 29 s
Description: Keşfedin, atılan insan fetal frontal kortikal dokusundan sinir kök hücreleri izolasyonu, genişletme ve karakterizasyon yöntemini. Bu teknik, nörolojik hastalık mekanizmalarını hücresel düzeyde incelemek ve yeni ilaçların farmakolojik etkinliğini değerlendirmek için güvenilir bir platform sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

HD054347 ve NS063997-01 VLS için: Bu çalışma Ulusal Sağlık Enstitüleri tarafından desteklenmektedir. Bu çalışma aynı zamanda New York Dışişleri Bakanlığı aracılığıyla Sağlık Sözleşme # C024324 VLS Empire State Kök Hücre Fonu tarafından desteklenmiştir. Burada ifade edilen görüşler yalnızca yazarın aittir ve ille de Empire State Kök Hücre Kurulu, New York Eyaleti Sağlık Departmanı, ya da New York Devlet yansıtmamaktadır. VLS Doris Duke Klinik Scientist Gelişim Ödülü Alıcı. Ayrıca Profesör Timothy Vartanian Anti-O1, Anti-O4 antikorlar onun hediye için teşekkür ederim.

1. Diseksiyon ve sinir kök hücre kültürü bakımı için çözümler ve malzemelerin hazırlanması <ol><li> 100ml diseksiyonu orta (nakavt DMEM/F12, Invitogen) vaktinden önce hazırlayın ve buzdolabına kaldırın. </li><li> Prepare100 ml kültür ortamı (Stem Pro MGK SFM, Invitrogen) ve 37 tutmak ° C su banyosu. </li><li> Uzun süreli hücre dondurulması için hücre dondurma orta (nakavt DMEM/F12 10% FBS +% 5 DMSO) hazırlayın. </li><li> İsterseniz, doku fiksasyonu için% 4 paraformaldehid (PFA) hazırlamak. </li><li> Kulplu Steril, otoklavlanmış forseps ve bisturi ağızları diseksiyon için kullanılır. </li><li> Bir pipet tabancası, 10 ml transferi pipetler, ve 40 mcM hücre disosiasyon süzgeç (BD Falcon 352.340) bir kenara koyun. </li><li> 10 cm diseksiyon için çeşitli kültür kaplarına (BD), disosiasyon için 50 ml santrifüj tüplerine (BD), donma hücrelerin doku saklama ve donmuş şişeleri (BD) için 1,5 ml santrifüj tüplerine kenara koyun. </li></ol> 2. Insan fetal beyin insan sinir kök hücreleri Yalıtımlı <ol><li> Fetus sona ermesinden hemen sonra canlı doku Hasat prosedürün başarısı için hayati önem taşımaktadır. Seçmeli prosedürleri için, numune almaya zamanlama fetal ölümünden sonra zamanı en aza indirmek amacıyla önceden düzenlenmiş olabilir. 2 saat prosedürü içinde anlayışının ürünleri hasat edilir, ancak ideal bir dakika içinde seçmeli prosedürleri elde edilebilir. Fetal dokularda genellikle parçalanmış. Ancak, genel olarak beynin önemli bir bölümünü görsel kimlik için sağlam kalır. Gebelik yaşı (GA) Sınırlamalar yasal hukuk tarafından belirlenir ancak GA 18-22 hafta arasında bu protokol kullanılarak yapılmıştır. </li><li> Fetal beyin buz nakavt DMEM/F12 çözüm içeren 10 ml Petri kabı yerleştirilir. Anatomik işaretleri korteksin farklı parçalarını tanımak. Frontal ve parieto-oksipital korteks Sınırları merkezi sulkus ve sylvian fissür ekstrapole kesiştiği odaklı. Ventrikül sağlam ve hasarsız tutmak için emin olun, merkezi sulkus ön frontal korteks ve cerrahi bıçaklar ile sylvian fissür sınırındaki doku parçalara ayır. </li><li> Frontal korteks ayrılan blok herhangi bir kalıntı kan ve meninks çıkarın. Örnek yeterli kalitede ise, çeşitli amaçlar için birkaç küçük örnekleri içine blok incelemek için idealdir: bölümler (PFA,% 4 paraformaldehid sabit) ve protein / mRNA testleri (hızlı -80 ° C donmuş). </li><li> Seçilen beyin blok 50 ml santrifüj tüpüne aktarın ve hakkında 3 kez doku hacmi az buz nakavt DMEM/F12 çözüm eklemek. 10 ml transfer pipetle yavaşça mekanik pipetleme doku ayrıştırmaları tüm dokulara kadar (genellikle 20-30 kez) parçalanmış olur ve daha sonra tek ya da yakın tek bir hücre elde etmek için 40 mcM hücre süzgeç (BD Falcon 352.340) ile hücrelerin filtre süspansiyon. </li><li> Hücre süspansiyonu 2000 rpm ve oda sıcaklığında 5 dakika süreyle santrifüj, 10 ml taze sıcak bir kültür ortamı (Stem Pro MGK SFM) hücre pelletini tekrar süspansiyon ve hemasitometre ile hücre sayısını. </li><li> 5 ml sıcak bir kültür ortamı, her biri 25 cm 2 kültür şişeler içine ekleyin ve her balona 2x10 6 hücre transferi. Kültürler 37 korunur ° C /% 5 CO 2 inkübatör analizden önce 1 hafta boyunca. Daha fazla kültür ve deneyler için haftada bir kez yarım orta değiştirin. </li></ol> 3. Nöral kök hücreler daha fazla karakterizasyonu veya deneylerine için Manipulaton <ol><li> Neurospheres genellikle MGK çapı 200 ve 400 mikron arasında değişen, önerilen kültür koşulları altında 1 ila 2 hafta form. Neurospheres bu aşamada tek hücre elde etmek için 15 dakika süreyle 37 kalsiyum ve magnezyum ücretsiz Hanks orta (Tom Hanks) 0.2 g / L EDTA ° C ile ayrıştırıldı olabilir. Hücreler süspansiyonu, taze Hanks durulanır 2000 rpm döndü ve altkültürün sıcak kültür ortamı replated. </li><li> Farklılaşma başlatmak için, ayrışmış hücreleri lamel başına 1x10 5 hücreleri (24mmX24mm) yoğunluğu poly-D-lysine/laminin 1 kaplı lamelleri kaplanmıştır. Oligodendrosit farklılaşması için nakavt DMEM/F12 (Invitrogen, Ana, MD) +2% B27 (50X, Invitrogen, Ana, MD) 10 ng / ml bFGF 100 ng / ml SSH + 10 ng PDGF-AA hücreleri koruyarak elde edilir 2 gün sonra 5 gün süreyle büyüme faktörleri olmadan aynı ortama geçiş. 7 gün boyunca nöronal farklılaşma nakavt muhafaza hücreleri tarafından DMEM/F12 +2% B27 (50X) elde edilir. Astrosit farklılaşma, bir hafta boyunca nakavt DMEM/F12% 1 FBS kültür hücreleri tarafından yapılır. </li><li> Genleri ile nöral kök hücreler Transfeksiyon preformed neurospheres ayrı hücreleri ile yapılabilir. Burada, nöral kök hücreler elektroporasyon EGFP-C1 ile transfekte gösterdi. EGFP-C1 inşa elektroporasyon (Fare Nöral Kök Hücreler AMAXA Nucleofector Kitleri kullanılarak yapıldı VPGŞirketin talimat aşağıdaki AMAXA Nucleofector Device (Lonza AAD-1001), 1004). Kısacası, 1 X 10 6 hücreleri ile 5 mg DNA 100 ul transfeksiyon orta ile karışık, ve darbe elektroporasyon sonra, hücreleri, sinir kök hücreleri daha fazla kültür ortamı sürdürmek yeniden süspanse edildi. Transfekte hücrelerin farklılaşması adım 3.2 'de açıklanan aynı prosedürler izlenerek, neurospheres elektroporasyon sonra 3-4 gün ayrışma ile işlendi. </li></ol> 4. Donma sinir kök hücreleri ve altkültürlerin <ol><li> Grubuyla aynı hücre süspansiyonları 1x10 7 hücre / flakon / ml 'lik bir konsantrasyon ile santrifüj ve donma ortamda yeniden süspanse. -20 ° C, -80 hücrelerin yavaş yavaş dondurma ° C için sıvı nitrojen aktarmak sonra da uzun süre depolama. </li><li> Hücreler hızlı 37 ile çözülmüş ° C su banyosu ve yeniden süspanse +10% serum DMEM/F12 bir yıkama için ısındı, donma orta kaldırmak için santrifüj ve ısıtılmış bir kültür ortamı yeniden bekletildi. </li></ol> 5. Temsilcisi Sonuçlar: Sinir kök hücreleri normal bir fetus gebelik yaşı 18 hafta açıklanan yöntem ve neurospheres, yuvarlak, düzgün sınırları ve oldukça homojen bir boyutu (Fig.2A) ile bir hafta sonra görülebilir kültüre edildi. Bu neurospheres EGFP-C1 veya diğer yapıları ile transfekte ve floresan mikroskobu (Fig.2B) altında takip edilebilir. Daha sonra kurulan neurospheres EDTA ile kaplı lamelleri üzerinde dağınık hücreler olarak ayrışmış ve kaplama. % 4 parafamaldehyde ile ilgili protokol çerçevesinde farklılaşmış hücreler sabit ve farklı hücre tipi özel işaretleri ile boyandı. Multipotentiality (Fig2E, F, rodamin) astrositler (Fig2C, D, rodamin) nöronların gösterge işaretleri ve oligodendrosit (Fig2G, H, rodamin) ifadesi ile görülmektedir. EGFP, elektroporasyon geçirmiş hücrelerin farklı hücre türlerine de farklılaşmış ve farklı hücre özel işaretleri ile boyandı. Multipotentiality (Fig3C, rodamin ve Fig3D, fluoroscein) astrositler (Fig3A, B, fluoroscein) nöronların gösterge işaretleri ve oligodendrosit (Fig3E, F, rodamin) ifadesi ile görülmektedir. <img src="/files/ftp_upload/2681/2681fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1 atılır insan fetal beyin sinir kök hücreleri izole etmek için deneysel işlemin şematik <img src="/files/ftp_upload/2681/2681fig2.jpg" alt="Şekil 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 2"> Şekil 2, in vitro propogated ayrım yapılmamış ve farklı insan sinir hücrelerinin . (A) Neurospheres pürüzsüz, yuvarlak sınırları ve kültür üzerinden 1 hafta sonra hızlı bir büyüme gösteren faz kontrast mikroskobu altında gösterilmiştir. (B) çeşitli plazmid ve yapıları Giriş transfeksiyon ile elde edilebilir. EGFP-C1 transfeksiyon izleyen üç gün, birden fazla hücre fluoroscein immün floresan mikroskobu altında görülebilen yeşil flüoresan protein ekspresyonu göstermektedir. EGFP-C1 transfekte neurospheres nöronları (C, D), astrositler (E, F) ve oligodendrosit (G, H) içine farklı koşullar altında, ayrışmış ve farklılaştırılmış ve rodamin floresan altında görülmektedir. Aynı zamanda, transfekte EGFP pozitif hücrelerin fluoroscein floresan altında gösterilmiştir. Transfekte hücreleri (beyaz ok uçları) untransfected hücreleri (beyaz oklar) ayırt edilemez. Hücre çekirdekleri Hoechst33342 ile boyandı. Ölçeği çubuklar 200 mikron A, B için 100 mikron ve 25 mikron CH için. <img src="/files/ftp_upload/2681/2681fig3.jpg" alt="Şekil 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 3"> Şekil 3 transfeksiyon olmadan Neurospheres ayrışmış ve farklı nöronların (A, B, fluoroscein), astrositler (C rodamin, D, fluoroscein) ve oligodendrosit (E, F, rodamin) içine farklı koşullar altında. Hücre çekirdekleri Hoechst33342 ile boyandı. Ölçeği bar AF için 25 mikron.

<ol><li>Gage, F. H., Ray, J., Fisher, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation%2C+characterization%2C+and+use+of+stem+cells+from+the+CNS%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Isolation, characterization, and use of stem cells from the CNS.</a> Annu. Rev. Neurosci. 18, 159-192 (1995).</li>
<li>Vescovi, A. L., Snyder, E. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+and+properties+of+neural+stem+cell+clones%3A+plasticity+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Pathol%22%5BJournal%5D)">Establishment and properties of neural stem cell clones: plasticity in vitro and in vivo.</a> Brain Pathol. 9, 569-598 (1999).</li>
<li>Schwartz, P., Bryant, P., Fuja, T., Su, H., O'Dowd, D., Klassen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+characterization+of+neural+progenitor+cells+from+post-mortem+human+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Res%22%5BJournal%5D)">Isolation and characterization of neural progenitor cells from post-mortem human cortex.</a> J Neurosci Res. 74, 838-851 (2003).</li>
<li>Martinez-Serrano, A., Rubio, F. J., Navarro, B., Bueno, C., Villa, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+neural+stem+and+progenitor+cells%3A+in+vitro+and+in+vivo+properties%2C+and+potential+for+gene+therapy+and+cell+replacement+in+the+CNS%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Human neural stem and progenitor cells: in vitro and in vivo properties, and potential for gene therapy and cell replacement in the CNS.</a> Curr Gene Ther. 1, 279-299 (2001).</li>
<li>Rajan, P., Snyder, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+stem+cells+and+their+manipulation%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Neural stem cells and their manipulation.</a> Methods Enzymol. 419, 23-52 (2006).</li>
<li>Ruiz-Lozano, P., Rajan, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cells+as+in+vitro+models+of+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Stem+Cell+Res+Ther%22%5BJournal%5D)">Stem cells as in vitro models of disease.</a> Curr Stem Cell Res Ther. 2, 280-292 (2007).</li>
<li>Sheen, V., Ferland, R., Harney, M., Hill, R., Neal, J., Banham, A., Brown, P., Chenn, A., Corbo, J., Hecht, J., Folkerth, R., Walsh, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+proliferation+and+migration+in+human+Miller-Dieker+neural+precursors%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Neurol%22%5BJournal%5D)">Impaired proliferation and migration in human Miller-Dieker neural precursors.</a> Ann Neurol. 60, 137-144 (2006).</li>
<li>Bahn, S., Mimmack, M., Ryan, M., Caldwell, M., Jauniaux, E., Starkey, M., Svendsen, C., Emson, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+target+genes+of+the+neuron-restrictive+silencer+factor+in+neurospheres+derived+from+fetuses+with+Down%27s+syndrome%3A+a+gene+expression+study%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Neuronal target genes of the neuron-restrictive silencer factor in neurospheres derived from fetuses with Down's syndrome: a gene expression study.</a> Lancet. 359, 310-315 (2002).</li>
<li>Ferland, R. J., Batiz, L. F., Neal, J., Lian, G., Bundock, E., Lu, J., Hsiao, Y. C., Diamond, R., Mei, D., Banham, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disruption+of+neural+progenitors+along+the+ventricular+and+subventricular+zones+in+periventricular+heterotopia%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Mol+Genet%22%5BJournal%5D)">Disruption of neural progenitors along the ventricular and subventricular zones in periventricular heterotopia.</a> Hum Mol Genet. 18, 497-516 (2009).</li>
<li>Esposito, G., Imitola, J., Lu, J., De Filippis, D., Scuderi, C., Ganesh, V. S., Folkerth, R., Hecht, J., Shin, S., Iuvone, T., Chesnut, J., Steardo, L., Sheen, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genomic+and+functional+profiling+of+human+Down+syndrome+neural+progenitors+implicates+S100B+and+aquaporin+4+in+cell+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Mol+Genet%22%5BJournal%5D)">Genomic and functional profiling of human Down syndrome neural progenitors implicates S100B and aquaporin 4 in cell injury.</a> Hum Mol Genet. 17, 440-457 (2008).</li>
<li>Esposito, G., Scuderi, C., Lu, J., Savani, C., De Filippis, D., Iuvone, T., Steardo, L. J. r, Sheen, V., Steardo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((S100B+induces+tau+protein+hyperphosphorylation+via+Dickopff-1+up-regulation+and+disrupts+the+Wnt+pathway+in+human+neural+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">S100B induces tau protein hyperphosphorylation via Dickopff-1 up-regulation and disrupts the Wnt pathway in human neural stem cells.</a> J Cell Mol Med. 12, 914-927 (2008).</li>
<li>Flax, J. D., Aurora, S., Yang, C., Simonin, C., Wills, A. M., Billinghurst, L. L., Jendoubi, M., Sidman, R. L., Wolfe, J. H., Kim, S. U., Snyder, E. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engraftable+human+neural+stem+cells+respond+to+developmental+cues%2C+replace+neurons%2C+and+express+foreign+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Engraftable human neural stem cells respond to developmental cues, replace neurons, and express foreign genes.</a> Nat Biotechnol. 16, 1033-1039 (1998).</li>
<li>Fults, D., Pedone, C. A., Morse, H. G., Rose, J. W., McKay, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+and+characterization+of+a+human+primitive+neuroectodermal+tumor+cell+line+from+the+cerebral+hemisphere%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuropathol+Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Establishment and characterization of a human primitive neuroectodermal tumor cell line from the cerebral hemisphere.</a> J Neuropathol Exp Neurol. 51, 272-280 (1992).</li>
<li>Conti, L., Cattaneo, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+stem+cell+systems%3A+physiological+players+or+in+vitro+entities%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Neural stem cell systems: physiological players or in vitro entities?</a> Nat Rev Neurosci. 11, 176-187 (2010).</li>
<li>Svendsen, C. N., ter Borg, M. G., Armstrong, R. J., Rosser, A. E., Chandran, S., Ostenfeld, T., Caldwell, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+method+for+the+rapid+and+long+term+growth+of+human+neural+precursor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">A new method for the rapid and long term growth of human neural precursor cells.</a> J Neurosci Methods. 85, 141-152 (1998).</li>
</ol>

Kültür taze doku ve üreten insan hücre hatları yönelik çeşitli yaklaşımlar vardır. Tarihsel olarak, taze doku hasat ve merkezi sinir sisteminde çeşitli hücre tipleri oluşturmak için hemen kültür. Bu yaklaşım, ancak net bir şekilde elde durumda insan örnekleri için, genellikle oldukça küçük olabilir örneklerinin sayısı ile sınırlıdır. Minimal manipülasyon derecesi göz önüne alındığında, taze kültür sinir hücreleri uzun kültür potansiyel eserler sınırlayarak en güvenilir deneysel sistemi sağlar. Sınırlı kaynağı çeşitli on...

<table border="1"><tbody><tr><th> Reaktifin Adı </th><th> Şirket </th><th> Katalog numarası </th><th> Yorumlar (isteğe bağlı) </th></tr><tr><td> Nakavt DMEM/F12 </td><td> Invitrogen </td><td> 12660-012 </td><td> Disosiyasyon orta </td></tr><tr><td> Kök Pro MGK SFM </td><td> Invitrogen </td><td> A10509-01 </td><td> Kültür ortamı </td></tr><tr><td> Fetal sığır serumu </td><td> Invitrogen </td><td> 10091-148 </td><td> Dondurulmuş orta </td></tr><tr><td> Hanks çözümü (-Ca 2 +,-Mg 2 +) </td><td> Invitrogen </td><td> 14175-095 </td><td> Disosiyasyon orta </td></tr><tr><td> DMSO </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> D2650 </td><td> Dondurulmuş orta </td></tr><tr><td> EDTA </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 431788 </td><td> Disosiyasyon orta </td></tr><tr><td> Paraformaldehit </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 158127 </td><td> Fiksasyon çözüm </td></tr><tr><td> bFGF </td><td> Ar-Ge </td><td> 234-FSE </td><td> Farklılaşma orta </td></tr><tr><td> SSH </td><td> Ar-Ge </td><td> 1845-SH </td><td> Farklılaşma orta </td></tr><tr><td> PDGF-AA </td><td> Ar-Ge </td><td> 221-AA </td><td> Farklılaşma orta </td></tr><tr><td> B27 </td><td> Invitrogen </td><td> 17504-044 </td><td> Farklılaşma orta </td></tr><tr><td> Fare anti-map2 </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> M2320 </td><td> 1:200 </td></tr><tr><td> Tavşan anti-DCX </td><td> Hücre sinyal </td><td> 4604s </td><td> 1:200 </td></tr><tr><td> Tavşan anti-GFAP </td><td> DAKO </td><td> Z0334 </td><td> 1:200 </td></tr><tr><td> Tavşan anti-S100B </td><td> DAKO </td><td> Z0311 </td><td> 1:200 </td></tr><tr><td> Tavşan anti-O1 </td><td> Profesör Timothy Vartanian hediyeler * </td><td></td><td> 01:50 </td></tr><tr><td> Tavşan anti-O4 </td><td> Profesör Timothy Vartanian hediyeler * </td><td></td><td> 01:50 </td></tr><tr><td> 40μm hücre süzgecinden </td><td> BD Falcon </td><td> 352340 </td><td></td></tr></tbody></table> * Timothy Vartanian, MD, PhD, Nöroloji ve Nörobilim, Weill Cornell Medical College, New York, ABD Bölümü

atılan İnsan fetal kortikal doku sinir kök hücre Üretimi

Generation of Neural Stem Cells from Discarded Human Fetal Cortical Tissue

Nöral kök hücreler (NSC&#39;lerde) kortikal plak gelişimi sırasında ventriküler zon neuroepithelium boyunca bulunur. Bu ilk atalarıdır sonuçta ara atalarıdır yol açan ve daha sonra, serebral korteks oluşturan çeşitli nöronal ve glial hücre alt tipleri. Atılır, normal fetal doku, insan NSC&#39;lerde (böylece neurospheres denir) oluşturmak ve genişletmek için kapasite doğrudan normal insan MGK geliştirme 1-5 fonksiyonel yönlerini incelemek için bir araç sağlar. Bu yaklaşım aynı zamanda, böylece progenitör proliferasyon, göç ve farklılaşma 6-9 değiştiren hastalık süreçleri tanımlamak için fırsat karşılayabilme bilinen nörolojik bozukluklar NSC&#39;lerde nesil doğru olabilir . Biz hızlandırılmış Alzheimer hastalığı fenotip 10,11 katkıda bulunabilecek insan Down sendromu NSC&#39;lerde patolojik mekanizmaların belirlenmesi üzerine odaklanmıştır. Ne, in vivo, ne in vitro fare modellerinde 21 insan kromozomu üzerinde bulunan genlerin aynı repertuar çoğaltabilirsiniz . Burada iptal insan fetal korteks Down sendromu NSC&#39;lerde kültür izole etmek ve onları büyümeye basit ve güvenilir bir yöntemi kullanabilirsiniz. Metodolojisi sınırlı anatomik işaretleri, hücre sıralama, kaplama ve insan NSC&#39;lerde Pasajlanması doku diseksiyonu hasat belirli yönlerine sağlar. Biz de daha seçici hücre alt tiplere insan NSC&#39;lerde farklılaşma inducing için bazı temel protokolleri sağlar.

Atılır insan fetal kortikal doku sinir kök hücrelerin izolasyonu ve kültürü üzerinde basit ve güvenilir bir yöntem açıklanmıştır. Bilinen insan nörolojik bozukluklar türetilen Kültürler farmakolojik etkinliğini değerlendirmek için bir platform sağlamak gibi, hücresel ve moleküler patolojik süreçleri karakterizasyonu için kullanılabilir.

Atılan İnsan Fetal Kortikal Doku Sinir Kök Hücre Üretimi

Nöral kök hücreler (NKH'ler), kortikal plağın gelişimi sırasında ventriküler zon nöroepitelyumu boyunca yerleşir. Bu erken öncül hücreler...

Bu prosedürün genel amacı, atık frontal korteks dokusundan insan nöral kök hücrelerini izole etmektir. Bu işlem, öncelikle insan fetal beyinleri diseke etmeden önce solüsyonların ve malzemelerin önceden hazırlanmasıyla gerçekleştirilir. Bunu, izole edilen nöral kök hücrelerin daha ileri genişletilmesi, karakterizasyonu ve deneylerini içeren kültürü takip eder.Uzun süreli saklama ve progenitorlerin nöronal ve glial hücre tiplerine farklılaşması için subkültürlerin oluşturulması mümkündür. Nihayetinde, normal MSS'den elde edilen hücrelerin farklılaşması karakterize edilebilir ve bilinen nörolojik bozukluklara sahip MSS'den türetilen hücrelerin farklılaşmasıyla karşılaştırılabilir. Bu tekniğin doğurduğu sonuçlar, herhangi bir insan MSS bozukluğunun tedavisi veya teşhisine kadar uzanmaktadır.Bu teknik, patolojik S'yi değerlendirmek ve belirli bir bozukluk için yeni ilaçların farmakolojik etkinliğini ölçmek amacıyla basit ve güvenilir bir platform sunar. Multipotent hücrelerin sahip olduğu istisnai değer nedeniyle, protokole başlamadan önce tüm malzemelerin hazır olması gerekir. Numunelerin bozulma riskini en aza indirmek için; soğutmalı diseksiyon, 37 °C'ye ısıtılmış kültür ortamı bany

generation-neural-stem-cells-from-discarded-human-fetal-cortical

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Biz insan nöronal atalarıdır ve sinir onarımı için gelişmekte olan MSS nöronal hücre tipleri büyük bir arz türetme sağlayan küçük moleküller ile tanımlanan koşullar altında tutulan pluripotent insan embriyonik kök hücreleri doğrudan neuroblasts indüksiyonu için bir protokol kurduk.

Küçük Molekül İndüksiyon Pluripotent İnsan Embriyonik Kök Hücreleri İnsan Nöronal atalarıdır ve Nöronlar Verimli türetilmesi

Bu video, enzimatik tedavi ve büyüme faktörü açısından zengin bir ortamda kültürleme kullanarak insan nöral kök hücrelerini nörosferlerden nöral ve astrosit progenitörlerine ayırma yöntemini gösterir, bu da sonunda özel progenitör hücrelere olgunlaşmaya yol açar.

İnsan Nöral Kök Hücrelerinin Nöral ve Astrosit Progenitörlerine Farklılaştırılması

Bu videoda, nöral kök hücrelerin yapışmasını ve büyümesini artırmak için poliornitin ve laminin ile kaplanmış cam lamellerin hazırlanmasına yönelik bir yöntem açıklanmaktadır. Teknik, nöronlarda bulunan yapıları taklit ederek nöronal hücre büyümesini ve farklılaşmasını destekleyen destekleyici bir matrisin oluşumunu kolaylaştıran sıralı inkübasyonları ve yıkamaları içerir.

İnsan Nöral Kök Hücrelerinden Kortikal Piramidal Nöronların Üretilmesi

Yetişkin beyin hasat nöral kök hücreler sinir sistemi gelişiminin temel araştırma rejeneratif tıpta potansiyel klinik uygulamaları keşfetmek için çeşitli uygulamalar kullanılmaktadır artmaktadır. Bu deneysel sonuçların ses için kritik bu hücreleri büyümek için kullanılan yalıtım ve kültür koşullarında titiz kontrolü yapar.

Yetişkin Kemirgen Beyin konvansiyonel ve konvansiyonel olmayan Bölgelerinden Nöral Kök Hücreler Büyüyen

Bu protokol, tek bir hücre süspansiyonu için ayrışma olmadan küresel nöral kök ve projenitör hücre agrega genişlemesini sağlayan bir yeni mekanik bir kesme yöntemi tarif etmektedir. Hücre / hücre teması sürdürmek üzerinde 40 geçişleri için hızlı ve istikrarlı bir büyüme sağlar.

İnsan Nöral Agregalarının bir cGMP uygulanabilir Açılım Yöntemi kök hücrelerin pluripotent kök hücreleri veya Fetal Beyin dokusundan türetilen

Bir yöntem de periferik kan hücrelerinden zenginleştirilen hematopoietik projenitör hücrelerinden insan nöral kök hücrelerini elde etmek için geliştirilmiştir.

Periferik kan Hematopoetik Progenitör Hücreleri İnsan Sinir Kök Hücre Doğrudan İndüksiyon

Yetişkin memeli omuriliği, kültürde izole edilebilen ve genişletilebilen nöral kök/progenitör hücreler (NSPC'ler) içerir. Bu protokol, erişkin omuriliğinin periventriküler bölgesinden sıçandan ve insan organ nakli donörlerinden üretilen NSPC'lerin toplanmasını, izolasyonunu, kültürünü ve geçişini açıklar.

Periventriküler Yetişkin Rat Bölgesinde ve İnsan Omurilik gelen Nöral Kök / Progenitör Hücreler izolasyonu

Uyarılmış pluripotent kök hücrelerin üretilmesi otolog nakli türetilmesi için ilginç umutları sağlar. Ancak, pluripotent devlet ve zahmetli yeniden farklılaşma yoluyla ilerleme hala klinik çeviri engellemektedir. Burada erişkin insan fibroblast türetme ve uyarılmış nöral progenitör hücrelerin içine doğrudan dönüşüm ve nöral soy içine sonradan farklılaşmayı açıklar.

Yetişkin İnsan Fibroblastları türetilmesi ve Genişletilebilir Sinir Progenitör Hücreler içine Doğrudan Dönüşüm

Burada, E13 fare embriyo ganglionic itibar bir roman mikrocerrahi teknik nöral kök hücrelerin izolasyonu için tanıtmak.

Yalıtım ve kültür embriyonik fare nöral kök hücrelerin

Protokol, çevresel kan mononükleer hücrelerin yeniden programlanması ile sinirsel kök hücrelerini Sendai virüs enfeksiyonu, dopaminerjik nöronlar içine inscs farklılaşma, tek taraflı-lesioned içine da öncüleri transplantasyon teşvik sunar Parkinson hastalığı fare modelleri ve PD tedavisi için iNSC-türetilen DA öncüleri güvenlik ve etkinliğini değerlendirilmesi.

Periferik mononükleer hücrelerden Indüklenen nöral kök hücrelerin üretimi ve transplantasyon çalışmaları için Dopaminergic neuron precursors doğru farklılaşma

Yeniden programlanmış periferik kan hücrelerinden nöronal fenotip içeren hücreler elde etmek için genetiği değiştirilmiş (GM içermeyen) bir yöntem sunuyoruz. Yeni insan GPI bağlantılı proteine bağlı bir sinyal yolunun aktivasyonu, insan pluripotent kök hücrelerini elde etmek için verimli bir GM içermeyen yöntem ortaya koymaktadır.

Kan Türevi Nöronal Hücrelerin GM'den Arındırılmış Üretimi

Keşfedin, atılan insan fetal frontal kortikal dokusundan sinir kök hücreleri izolasyonu, genişletme ve karakterizasyon yöntemini. Bu teknik, nörolojik hastalık mekanizmalarını hücresel düzeyde incelemek ve yeni ilaçların farmakolojik etkinliğini değerlendirmek için güvenilir bir platform sunar.

Atılan İnsan Fetal Kortikal Doku Sinir Kök Hücre Üretimi

Daha fazla video keşfet