Name: İzole, Havalandırmalı ve Enstrumanlı Fare Akciğer Karakterizasyonu Pulsatif Akış ile perfüze (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-04-29T17:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 2 s
Description: Öğrenin fare akciğerlerinin izolasyonu, havalandırılması ve perfüzyonu yöntemini pulsatil pulmoner basınç-akış ilişkilerini incelemek için. Bu teknik sağ ventrikül son yükünü nicelendirmeye yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu araştırma, Ulusal Sağlık hibe R01HL086939 (KKK) Enstitüleri tarafından da desteklenmiştir.

Tuchscherer ark bu protokol, daha önce pulsatil pulmoner vasküler basınç-akım ilişkileri, pulmoner emboli ve kronik hipoksi etkisi (Tuchscherer, Webster ve Chesler, 2006 ölçmek için kullanılır olmuştur izole bir, havalandırılmış perfüze fare akciğer hazırlık göstermektedir , 2007). Kısacası, fare akciğerler ameliyatla ısıtılan bir odasında yer, çevre dokulara izole (IL-1, Harvard Apparatus, Holliston, MA) ve havalandırmalı (Ventilasyon Kontrol Modülü (VCM)-R zamanlayıcı sayıcı modülü (TCM); Harvard Aparat). Akciğer vasküler kararlı akım dalga biçimleri ya da yüksek frekanslı salınım pompası (Bose-Elektro Kuvvetleri, Eden oluşturmak için bir şırınga pompası (Cole-Parmer, Vernon Hills, IL) ile% 3,5 Ficoll ısıtmalı RPMI 1640 hücre kültür ortamı ile perfüze Prairie, MN) pulsatil pulmoner vasküler akışı dalga şekilleri yaratmak için şırınga pompası ile paralel. Basınç dönüştürücüleri (P75, Harvard Apparatus) anlık pulmoner arter basıncı (PAP) ve sol atrial basınç (LAP) ölçer. Ani debisi (Q), bir in-line debimetre (Transonik Systems, Inc, Ithaca, NY) ile ölçülür. Pulsatil basınç-akım ilişkileri, bu ölçümleri, pulmoner vasküler fizyoloji ve patoloji ve sağ ventrikül afterload içgörü sağlamalıdır türetilmiştir. 1. Ekipman: <ol><li> İzole akciğer fare vantilatör set-up dahil olmak üzere </li><li> Veri toplama sistemi ve LabView programı ile bilgisayar </li><li> Perfüzat akışı için iki basınç dönüştürücüleri ve debimetre </li><li> Basınç detektörler ve hava yolu akışı için debimetre (pnemotachometer) </li><li> Win Test programı ile Yüksek frekanslı salınım pompa ve bilgisayar </li><li> Boom / Zoom Mikroskop, lamba </li><li> IL-1 sistemi için yüksek çıkış pompası ısıtma banyosu </li></ol> 2. IL-1 sistem hazırlanması <ol><li> Damıtılmış su - 37 ° C IL-1 sisteminin içine dolaşan ısıtma banyosunda ısıtılır. </li><li> Bütün pompalar, dönüştürücüler ve IL-1 kanül temiz tüp ile bağlıdır ve tüm boru, 37 kadar ısıtılır distile su ° C ile temizlendi Hava kabarcıkları akciğer ve neden ödem seyahat, kaldırılması gerekir. Salınımlı akış pompası akış sensörü ve akış sensörü pulmoner arter kanülü Boru% 1 PBS ile temizlendi. </li><li> P75 basınç dönüştürücüler, kanül vana kapatma, atmosfere vanaların açılması ve ardından PLUGSYS amplifikatör otomatik sıfır düğmeye basılarak zeroed. Daha sonra, atmosfere vana kapalı ve kanül vana açıldı. </li><li> IL-1 sistemi havalandırma yolu gözenekli seramik parçası, nem sağlamak için ıslatılmış. </li></ol> 3. Çözümler <ol><li> % 3,5 hacim Ficoll-RPMI çözüm ve steril filtre ortamı hazırlayın. Medya Filtreleme istemeden akciğer embolize büyük parçacıklar vardır sağlar. Steril ortamların kullanılması da akciğer gelişen ani ödem olasılığını azaltır. Biri 10 ml şırınga RPMI her deneysel deneme için RPMI cerrahi ve bir 60 ml şırınga ile doldurun. Perfüzat 37 ° C su banyosunda ısıtın. </li><li> 1 ml (yaklaşık) fare heparin 500IU/100g vücut ağırlığı hazırlayın. Heparin tuz 158IU/mg. ~ 25 g fare için, küçük bir mikrosantrifüj tüp içinde 1 ml PBS solüsyonu ile 1.25 mg heparin tuzu karıştırın. </li></ol> 4. Havalandırma Fare <ol><li> Fare içine kilogram başına çözüm pentobarbital 150 mg, bir pençe sert bir tutam yaparak derin anestezi sağlamak intraperitoneal sonra. Herhangi bir reaksiyon yoksa, istikrar için corkboard ön patilerini bağlantılarını ameliyatı için fare hazırlamak. Not: deney anestezi derinliği boyunca hayvan dikkatlice gözlemleyerek tarafından izlenir. Pençeleri ve sık kesiler pimleri Ağrılı uyaranlara yanıt hayvan anestezi cerrahi bir düzlemde kaldığını teyit hangi eksikliği olarak hareket ederler. </li><li> Kürk aşağı ıslak ve boynu cildi kapmak için düz forseps kullanımı% 95 alkol ile göğüs püskürtün. Düz makas kullanarak deride açılan bir 1 cm kesin. </li><li> Boyun içinde ortaya çıktığında, özefagus ve trakea arıyorsanız, tüm beyaz glandüler doku ve yüzeysel kas çıkarın. Her iki tarafında ve posteriora doku özefagus ve trakea ayırın. </li><li> Takın ve trakea altındaki küçük bükük forseps, diğer tarafında dikiş bir parça kapmak. Trakea altında dikiş çekin ve gevşek bir cerrahlar düğüm. Sütür sıkın ya da düğüm etmeyin. </li><li> Trakea küçük bir makas ile küçük açılı bir "v" Kes, trakea yoluyla tüm yol kesmeyin. Isıtmalı IL-1 sistemi mantar pano ve fare hareket ettirin. Iki künt forseps kullanarak, trakeal kanül ve "v" altında trakea yakala. Sonra, trach trakeal kanül slayt"v" açıklıktan adet. Trakea etrafında dikiş ve trakea içinde kanül güvenli trakeal kanül sıkın. Düğüm. </li><li> Oda havası ile ventilasyon (% 50 ilham, derin ilham ile 90 solunum / dk,) başlayın. </li></ol> 5. Havalandırmalı Fare perfüze 5.1. Heparin enjekte etmek için sağ ventrikül Erişim <ol><li> Sprey fare göğüs tekrar alkol ile kürk yeniden ıslak. Düz forseps ve düz makas kullanılarak kaburga üstünde göğüs tüm cilt çıkarın. Sternum boyunca yukarı kesin. Her iki tarafta cilt kaldırın ve daha sonra alt kaburga satırı aşağıdaki cilt kesmek. </li><li> Cımbız ile sternum alt kısmında kılıç şeklinde sürecini kavramak ve düz makas kullanarak diyafram bir delik. Cımbız ile diyafram alın ve kaburga kesip. </li><li> Kılıç şeklinde bir süreç cımbız ile tekrar tutun (sol) ve kesilmiş sternum ve kaburga üzerinden topu ucu açılı makas kullanmak, akciğerler kesmeme dikkatli olma, kalp ya da kan damarları (topu ucu kullanın makas) size rehberlik etmek. Kan var olacak ama sürece sternum karşı makasla kesme kenarı olarak, kalp ve akciğerler kesilmiş olmayacaktır. </li><li> Sol tarafta kaburgalar tutun ve kalp açığa çıkarmak için gerekli olduğu kadar kaburga kesip. 0.1 ml heparin solüsyonu ile sağ ventrikül yavaş yavaş enjekte edin. Bu adım, endotelyal hücreler zarar ve perfüzyon bozacağına akciğerde kan pıhtılaşması, önlemek için önemlidir. Kalp hala atıyor iken heparin enjekte edilmelidir. </li></ol> 5.2. Ana pulmoner arter Cannulate <ol><li> Kaburgalar hafifçe göğüs duvarından akciğerlere itmek için arka (yuvarlak) forseps sonu kullanarak (sağ ve sol tarafı) geri kalanı kesip. Akciğerler kapma kendilerini hassas doku zarar verecektir. Makas ipuçları ve akciğer dokusu arasındaki kazara temas da zarar verir. </li><li> Akciğer üzerine yerleştirin mikroskop taşıyın. Kalbin üstüne glandüler ve yağ dokusu kesilip. Arterler ve damarlar uzağa çekin ve sonra doku gerginlik devam ederken bahar makasla kesmek için cımbız kullanın. </li><li> Cımbız künt bir başka set, sol atrium / aort ve pulmoner arter (PA) altında cımbız ucu almak için ventrikül altında kalp üstten, sağdan sola kepçe kullanma. Bunu yapmak dikkatle cımbız direnç olmamalıdır. Künt cımbız kullanarak yanlışlıkla pulmoner arter veya aort delinmesiyle olasılığını azaltır. </li><li> Cımbız ucu aorta ve PA altına alındıktan sonra, bir parça dikiş kapmak ve çekin. Cerrahlar gevşek bir düğüm. Sütür sıkın ya da düğüm etmeyin. </li><li> İsteğe bağlı: vücudun alt yarısında kaldırmak için açılı makas kullanın. Kaburga ve omurga üzerinden azaltın; kesme aorta ve vena kava önemli bir miktarda kan akışına neden olacak akış sadık bir Q-tip kullanabilirsiniz. Bertarafı için bir torbaya yerleştirin. </li><li> 4 ml 10 ml şırınga RPMI ile Başbakan PA kanül. Çift tüm boru hava kabarcıkları olup olmadığını kontrol edin. Distile su veya kabarcıkları ile akciğer perfüzyon ödem neden olur. </li><li> PA eklemek kanül sağ ventrikül serbest duvarında küçük bir çentik kesin ve aşağı amaçlayan ve sağa. PA şeffaf duvarın üzerinden kanül ucu görünür olmalıdır. RPMI konumu onaylamak için küçük bir miktar demlenmeye. Kanül, aort ve PA çevresinde dikiş sıkın ve düğüm. Bu noktada sol atrium kanüle kadar gerçek perfüzyon başlamak gerektiğini, aort da bağlı olduğunu unutmayın. </li></ol> 5.3. Sol atrium Cannulate <ol><li> Sol ventrikül alt kısmında bir çentik kesin ve atıl sol atriyum (LA) kanül, yukarı hedefliyor. Hafif bir basınç bu yönde mitral kapak açmak için gerekli olabilir. Doğru yerde, kanül ucu üzerine kayma ve dikiş olmadan güvenli olacaktır. </li></ol> 5.4. Perfüzyon başlayın <ol><li> RMPI çıkış boru (açık PBS aksine pembe-ish renk) açıktır kadar El dakikada 0,3 ml, 10 ml şırınga RPMI demlenmeye. Çıkış boru, yeniden-pozisyon LA kanül akış varsa. Eğer yeniden konumlandırma çıkışı ile elde edilebilir, pulmoner arter bir sızıntı olup olmadığını kontrol edin. Pulmoner arter bir sızıntı ya da gözyaşı tamir edilemez, bu deney iptal nedenidir. </li><li> IL-1 sistemi aracılığıyla PA kanül için 60 ml şırınga takın ve sızıntı kontrolü ve akciğerlere RPMI akciğerlere kan değiştirilmesi olduğunu gösteren, beyaza emin olun, perfüzat 1ml/min infüzyon başlatmak. Iki dakika yavaş akışı ile serpmek. </li></ol> 6. Ölçüm Pulsatif ve Sabit Pulmoner Basınç-Akış İlişkileri <ol><li> Pulsatil akım çalışmaları için ilk salınım pompa piston değiştirmeler ayarlamakönceki deneylerine göre WinTest programında her frekans için istenen düzeyde. Akciğer yapısı ve mekaniği nedeniyle değişkenliği, deplasmanları her fare için ayarlanması gerekir. Sürekli akış istenilen seviyeye ayarlayın. Salınım pompa, vana açın ve sağ salınımlı akış profili (Wintest programı) çalıştırmadan önce kayıt, veri aktarımını başlatmak. Veri dosyasını açın ve Excel deneysel debi (Q) arsa. Q max ve Q min istediğiniz gibi böylece her frekansta salınım pompası piston değiştirmeler ayarlayın (Wintest programı). </li><li> Sürekli akış denemeleri için, salınım pompa vanasını kapatın. Bu valf açık bırakılırsa, salınım pompası başka bir akış hızı değişiklikleri nemlendirme, bir kondansatör gibi davranır. Her akış hızında veya PA basıncı kadar en az 10 saniye süreyle veri toplama% 5'ten fazla değişmez. </li><li> Pulsatil veya sabit akış ölçümleri için, veri toplama önce sabit bir basınç eski havalandırma. Veri toplama hemen sonra havalandırma devam edin. </li><li> Havayolu tüp RPMI ödem kanıt ve deneyi iptal nedenidir. Ayrıca, dönüştürücüler zarar verir, çünkü RPMI havayolu basıncı veya akış sensörleri ulaşmak izin vermeyin. </li></ol> 7. Temsilcisi Sonuçlar: Temsilcisi Sabit Sonuçlar: Izole akciğer set-up deneyci bağımsız olarak kontrol altında tutmak sadece pulmoner akım S yeteneği değil, aynı zamanda havayolu basıncı P hava ve sol atriyal basınç LAP vardır. Q, P hava ve LAP pulmoner damarlar ve pulmoner arter basıncı PAP etkisi nedeniyle avantajlıdır. Diğer bir avantajı, elde edilen sonuçlar, sempatik sinir sisteminin tonu 1, ses durumu, ve anestezi 2 bağımsız olmasıdır. Sabit P hava Q merdiven adım değişiklikler tarafından uyarılan ve sabit veya LAP değişen PAP değişiklikler Şekil 1'de gösterilmiştir. LAP kanül izole akciğer hazırlanmasında, tipik bir atık kabı içine perfüzat yönlendirir boru bağlı olduğunu unutmayın. Bu tüp yerinde LAP Poiseuille akışı nedeniyle Q doğrusal bağlıdır. Ancak, çıkış ve atık kabını yüksekliği sabit bir, sıfır olmayan bir LAP sağlamak için elle ayarlanabilir veya tüp Q bağımsız sıfır LAP izin silinebilir Temsilci Pulsatif Sonuçlar: Keyfi pulsatil akışı dalga şekilleri bu sistem ile oluşturulabilir iken, biz genellikle formu akışını oluşturmak Q = 3 + 2 sin (2 f πt) f = 1, 2, 5, 10, 15 ve 20 Hz frekanslarda ml / dak pulmoner damar (Şekil 2: üst panelde) lineerleştirilmiş empedans değerlendirmek için. PAP, LAP ve Q ölçümleri sonucunda, pulmoner vasküler empedansı büyüklüğü (Z) ve faz (θ), ilk bir dizi dayatılan her sinüzoidal akım hızı frekans ΔP = PAP-LAP ve Q bir tam sinüzoidal döngüsü çürüyen tarafından hesaplanır. Fourier dönüşümü kullanarak sinüsoidal harmonikler. Basınç oranı dönüşümü verimi büyüklüğü Z ve faz θ pulmoner vascualar empedansı, PVZ = FFT (ΔP) / FFT (Q), akış dönüşümü. Giriş empedansı Z 0, karakteristik empedansı Z C, ve dalga yansıma R W indeksi, empedans büyüklüğü hesaplanır. Özellikle, Z 0 0. harmonik (f = 0 Hz frekansları üzerinden C, Z, Z ilk minimum (5 Hz) ve 20 Hz arasında ortalama olarak hesaplanan ortalama ve R W hesaplanır) Z hesaplanır . (Z 0-Z C) / (Z 0 + Z C) 3. <img src="/files/ftp_upload/2690/2690fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1. Sabit akışı dalga şekilleri (üst satır) ve baskıların sonucunda (ikinci satır: PAP, P hava, LAP), LAP ve P hava farklı kombinasyonları ile zamanın bir fonksiyonu olarak . Alt sıra (A) ve (B), Q LAP artar ve azalır çıkış boru sırada yer aldı çünkü S. vs PAP gösterir. Bu tüp o LAP sürekli ve S. bağımsız (C) (D) ve (E) LAP daha yüksek ama S. P hava bağımsız şekilde çıkış boru yüksekliği manuel olarak ayarlanabilir ya kaldırıldı inspiratuar sonu (A, C, D) veya ekspirasyon sonu (B, E) basıncı. <img src="/files/ftp_upload/2690/2690fig2.jpg" alt="Şekil 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 2"> Şekil 2 Pulsatil akış dalga şekli Q (üst panel) ve bunun sonucunda baskılara (alt panel: PAP, LAP ve P hava) zamanın bir fonksiyonu olarak. PVZ bu pulsatil pulmoner basınç-akım ilişkileri, toplam sağ ventrikül afterload yansıtan, hesaplanan olabilir.

<ol><li>Pace, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sympathetic+control+of+pulmonary+vascular+impedance+in+anesthetized+dogs%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Sympathetic control of pulmonary vascular impedance in anesthetized dogs.</a> Circ Res. 29, 555-568 (1971).</li>
<li>Ewalenko, P., Stefanidis, C., Holoye, A., Brimioulle, S., Naeije, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+vascular+impedance+vs.+resistance+in+hypoxic+and+hyperoxic+dogs%3A+effects+of+propofol+and+isoflurane%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Pulmonary vascular impedance vs. resistance in hypoxic and hyperoxic dogs: effects of propofol and isoflurane.</a> J Appl Physiol. 74, 2188-2193 (1993).</li>
<li>Nichols, W. W., O'Rourke, M. F., Hartley, C., McDonald, D. A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aNichols%2C+WW+%22McDonald%27s+blood+flow+in+arteries+%3A+theoretical%2C+experimental%2C+and+clinical+principles%22">McDonald's blood flow in arteries : theoretical, experimental, and clinical principles</a>. , 5th edn, Arnold. (2005).</li>
<li>Tuchscherer, H. A., Webster, E. B., Chesler, N. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+Vascular+Resistance+and+Impedance+in+Isolated+Mouse+Lungs%3A+Effects+of+Pulmonary+Emboli%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Biomedical+Engineering%22%5BJournal%5D)">Pulmonary Vascular Resistance and Impedance in Isolated Mouse Lungs: Effects of Pulmonary Emboli.</a> Annals of Biomedical Engineering. 34, 660-668 (2006).</li>
<li>Tuchscherer, H. A., Vanderpool, R. R., Chesler, N. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+vascular+remodeling+in+isolated+mouse+lungs%3A+Effects+on+pulsatile+pressure-flow+relationships%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomechanics%22%5BJournal%5D)">Pulmonary vascular remodeling in isolated mouse lungs: Effects on pulsatile pressure-flow relationships.</a> Journal of Biomechanics. 40, 993-1001 (2007).</li>
<li>Vanderpool, R., Naeije, R., Chesler, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impedance+in+Isolated+Mouse+Lungs+for+the+Determination+of+Site+of+Action+of+Vasoactive+Agents+and+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Biomed+Eng%22%5BJournal%5D)">Impedance in Isolated Mouse Lungs for the Determination of Site of Action of Vasoactive Agents and Disease.</a> Ann Biomed Eng. , (2010).</li>
<li>Vanderpool, R., Kim, A., Molthen, R., Chesler, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+acute+rho+kinase+inhibition+on+chronic+hypoxia-induced+changes+in+proximal+and+distal+pulmonary+arterial+structure+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Physiology%22%5BJournal%5D)">Effects of acute rho kinase inhibition on chronic hypoxia-induced changes in proximal and distal pulmonary arterial structure and function.</a> Journal of Applied Physiology. , (2010).</li>
<li>El-Bizri, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Smooth+muscle+protein+22alpha-mediated+patchy+deletion+of+Bmpr1a+impairs+cardiac+contractility+but+protects+against+pulmonary+vascular+remodeling%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Smooth muscle protein 22alpha-mediated patchy deletion of Bmpr1a impairs cardiac contractility but protects against pulmonary vascular remodeling.</a> Circ Res. 102, 380-388 (2008).</li>
<li>Champion, H., Michelakis, E., Hassoun, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comprehensive+invasive+and+noninvasive+approach+to+the+right+ventricle-pulmonary+circulation+unit%3A+state+of+the+art+and+clinical+and+research+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Comprehensive invasive and noninvasive approach to the right ventricle-pulmonary circulation unit: state of the art and clinical and research implications.</a> Circulation. 120, 992-1007 (2009).</li>
<li>Gan, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasively+assessed+pulmonary+artery+stiffness+predicts+mortality+in+pulmonary+arterial+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Chest%22%5BJournal%5D)">Noninvasively assessed pulmonary artery stiffness predicts mortality in pulmonary arterial hypertension.</a> Chest. 132, 1906-1912 (2007).</li>
<li>Mahapatra, S., Nishimura, R., Sorajja, P., Cha, S., McGoon, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationship+of+pulmonary+arterial+capacitance+and+mortality+in+idiopathic+pulmonary+arterial+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Coll+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Relationship of pulmonary arterial capacitance and mortality in idiopathic pulmonary arterial hypertension.</a> J Am Coll Cardiol. 47, 799-803 (2006).</li>
<li>Bogaard, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+pulmonary+artery+pressure+elevation+is+insufficient+to+explain+right+heart+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Chronic pulmonary artery pressure elevation is insufficient to explain right heart failure.</a> Circulation. 120, 1951-1960 (2009).</li>
</ol>

Ameliyat kritik adımlar Göğüs kafesi, akciğerler uzak keserken dikkatli olduğu kritik öneme sahiptir. Akciğerleri tam maruz kalan ve sınır tanımayan çevre dokulara enflasyon sırasında ancak izolasyon işlemi sırasında hasar görmediğinden olmalıdır. Forseps arka uç gibi düz bir nesne kullanımı kesmek için makas için açık bir yol var, böylece göğüs duvarı akciğerlere uzak tutmak için kullanılabilir. Diğer önemli adım, pulmoner arter ve aort etrafındaki sütür yerleştirilmesi. Köreldiğini düz bir cı...

<table><tbody><tr><td>1 ml şırınga</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-829-10F</td><td></td></tr><tr><td>10 ml şırınga</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-823-2A</td><td></td></tr><tr><td>60 ml şırınga</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-689-8</td><td></td></tr><tr><td>GLN'li RPMI 6/PK</td><td>Fisher Scientific</td><td>MT10040CV</td><td></td></tr><tr><td>Şişe Üstü Filtreler</td><td>Fisher Scientific</td><td>09-761-57</td><td></td></tr><tr><td>Ficoll PM 70</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F2878-100g</td><td></td></tr><tr><td>Heparin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Y27632</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Y0503</td><td></td></tr><tr><td>Açılı Ball Iris makasları</td><td>Fine Science Tools</td><td>14109-09</td><td></td></tr><tr><td>Vannas Yaylı Makaslar - 4mm Bıçaklar</td><td>Fine Science Tools</td><td>15018-10</td><td></td></tr><tr><td>Hassas Iris Makasları - düz</td><td>Fine Science Tools</td><td>14106-09</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5/45 Pensler</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-35</td><td></td></tr><tr><td>Dumont Tıbbi Biyoloji Pensleri</td><td>Fine Science Tools</td><td>11254-20</td><td></td></tr><tr><td>Lauda E100 ECO-line 003 </td><td>VWR international</td><td>Lauda-Brinkmann E-103, 62400-922 ile karşılaştırılabilir</td><td></td></tr><tr><td>IL-1 izole perfüze fare akciğeri sistemi </td><td>Harvard Apparatus</td><td>739904</td><td></td></tr><tr><td>PLUGSYS Modülü için P75 Kan Basıncı Transduseri</td><td>Harvard Apparatus</td><td>730020</td><td></td></tr><tr><td>TS410 Akış Modülleri</td><td>Transonic</td><td>TS410</td><td></td></tr><tr><td>ME 4 PXN Hassas PXN Hat İçi Akış Sensörleri</td><td>Transonic</td><td>ME 4 PXN</td><td></td></tr><tr><td>Cole-Parmer Çoklu Şırınga Pompaları</td><td>Cole-Parmer</td><td>EW-74900-20</td><td></td></tr><tr><td>Nembutal 50MG/ML 20ML Flakon</td><td>Amatheon</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

İzole, havalandırmalı ve enstrumanlı fare akciğer karakterizasyonu pulsatif akış ile perfüze

Characterization of the Isolated, Ventilated, and Instrumented Mouse Lung Perfused with Pulsatile Flow

Izole, havalandırmalı ve enstrümante fare akciğer hazırlık, kararlı ve pulsatil pulmoner vasküler basınç-akım ilişkileri, pulmoner arter debisi, akış hızı dalga formu, hava yolu basıncı ve sol atriyal basınç üzerinde bağımsız denetim ölçülmesine imkan verir. Pulmoner vasküler direnç, çok noktalı, sabit bir basınç-akım eğrileri alınarak hesaplanan pulmoner vasküler empedansı frekans aralığında elde edilen pulsatil basınç-akım eğrileri hesaplanır. Önemsiz vasküler uyum etkileri, özellikle akciğer dolaşımı içerir çünkü artık klinik olarak tanınan, empedans, direnci daha sağ ventrikül afterload üstün bir ölçü. Empedans Üç önemli ölçümleri - sıfır hertz empedansı Z 0, karakteristik empedansı Z C ve dalga yansıma R B indeksi akışı için kullanılabilir distal arteryel kesit alanı, proksimal arteryel sertlik ve havza-yukarı havza empedans içgörü uyumsuzluğu, sırasıyla. Izole elde edilen tüm sonuçlar, havalandırılmış ve perfüze akciğerler, sempatik sinir sistemi ton, birim durumu ve anestezi etkileri bağımsız. Biz bu tekniği empedans direnç ve pulmoner emboli ve kronik hipoksi etkisi ölçmek için kullanılan ve vazoaktif ajanlar ve hastalık Z C basınç bağımlılık kullanarak eylem siteleri (örneğin, distal proksimal vs.) Arasında ayrım yapmak. Ayrıca, bu teknikler, genetiği değiştirilmiş farelerde suşlarının akciğerler ile kullanıldığında, pulmoner vasküler yapısı ve işlevi üzerindeki etkilerinin moleküler düzeyde kusurları tespit edilebilir.

Aşağıdaki protokol tecrit, havalandırma ve sağ ventrikül afterload kan akımı, hava akımı, hava yolu değişiklikleri ve vasküler değişiklikler etkilerini ölçmek için sabit veya pulsatil pulmoner vasküler basınç-akım ilişkileri ölçmek için fare akciğerler instrumenting sürecini özetliyor.

İzole, Havalandırmalı ve Enstrumanlı Fare Akciğer Karakterizasyonu Pulsatif Akış ile perfüze

İzole edilmiş, ventile edilmiş ve enstrümante edilmiş fare akciğer preparatı, sabit ve pulsatil pulmoner vasküler basınç-akış ilişkilerinin ölçülmesine olanak tanır ...

Pulsatil pulmoner basınç akış ilişkilerini incelemek amacıyla. Bu protokol, fare akciğerlerinin nasıl izole edileceğini, ventile edileceğini ve perfüze edileceğini açıklamaktadır. Ventilasyon için trakea cerrahi olarak açığa çıkarılır.Ardından, pulmoner arter ve sol atrium kanülize edilebilmesi için kalp ve akciğerler izole edilir. Daha sonra pulmoner sisteme perfüzyon uygulanır. Deneyler; pulmoner arter akışının miktarı, dalga formu ve/veya frekansı değiştirilerek gerçekleştirilir.Elde edilen pulmoner arter ve sol atriyum basınç dalga formları kaydedilir ve pulsatil pulmoner basınç-akış ilişkilerini gösterir. Bu tekniğin in vivo preparatlar gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, basınç-akış ilişkilerindeki değişikliklerin; hacim durumu, sempatik sinir sistemi tonusu, aktivite ve anestezi etkileri olmadan elde edilebilmesidir.Ayrıca, izole akciğer preparatlarının çoğu yalnızca kararlı basınç akış ilişkilerini ölçerken, bizim tekniğimiz pulsatif basınç akış ilişkilerinin belirlenmesine olanak tanır. Bu yöntem, pulmoner vasküler hastalığın pulsatif pulmoner hemodinamiği nasıl etkilediği veya büyük pulmoner arter sertleşmesinin sağ ventrikül sonrası yükünü nasıl etkilediği gibi p

characterization-isolated-ventilated-instrumented-mouse-lung-perfused

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu videoda izole akciğer perfüzyonu için ex vivo bir teknik gösterilmektedir. Akciğer nakli prosedürlerinde yer alan çeşitli fizyolojik ve patolojik mekanizmaların çalışmalarına yardımcı olacak pulmoner araştırmalar için bir araçtır.

Ex vivo Akciğer Perfüzyonu: Bir Tavşan Modelinde Pulmoner Araştırma Tekniği

Hipoksik pulmoner vazokonstriksiyon (HPV), alveolar hipoksi akciğer perfüzyonunun ventilasyonla eşleştiği önemli bir fizyolojik olgudur. HPV'ye katkıda bulunan başlıca vasküler segment, intra-acinar arterdir. Burada, 20-100 μm çapındaki murine pulmoner damarların HPV analizi için protokolümüzü açıklıyoruz.

Murine Hassas Kesim Akciğer Dilimleri Kullanılarak Pulmoner Arterlerin Hipoksik Pulmoner Vazokonstriksiyonunun Videomorfometrik Analizi

İzole edilmiş perfüze akciğer kan hazırlama akciğer yüzeyindeki mikro damar ağları görselleştirmek için bu mümkün kılar. Burada, gerçek zamanlı flüoresan görüntüleme kullanılarak izole edilmiş akciğerlerde bir mikro damarların geçirgenliğini ölçmek için bir yaklaşımı tarif eder.

İzole Kan-perfüze Sıçan Akciğer Hazırlık Tek Mikrodamar Geçirgenliği miktarının

Ex-Vivo Akciğer Perfüzyon (EVLP) insanlarda akciğer transplantasyonu daha kolay kullanılabilir donör havuzu organları değerlendirmek ve genişletmek için yeteneği sağlayarak haline izin verdi. Burada, bir sıçan EVLP programı ve gelecekteki genişleme için bir tekrarlanabilir model izin ayrıntılandırmaları gelişimini açıklar.

İzole Yöntemi<em&gt; Ex vivo</emBir Rat Modelinde&gt; Akciğer Perfüzyon: Sıçan EVLP Programı Geliştirme Öğrenilmiş Dersler

Burada, farelerde akciğer basınç-hacim eğrisini basit ve güvenilir bir şekilde ölçmek için bir protokol sunuyoruz ve bu, iki yaygın akciğer patolojisi olan pulmoner fibroz ve amfizemde fenotipik parankimal değişiklikleri tespit etmek için yeterince duyarlı olduğunu gösteriyor. Bu metrik, gelişen patoloji ile akciğerin yapısal değişikliklerini ölçmek için bir araç sağlar.

Fare Akciğerler Basınç-hacim Eğrisi Ölçümü

Bu kağıt, Kardiyopulmoner bypass farelerde gerçekleştirmek açıklar. Bu yeni modeli moleküler mekanizmaları organ hasarı dahil incelenmesi kolaylaştıracaktır.

Kardiyopulmoner baypas gerektirmeyen bir fare modeli: yeni bir yaklaşım

Bu yöntemin amacı, akciğer tümörü patolojisinin incelenmesi ve akciğere metastazların değerlendirilmesi için fare akciğerlerinin perfüzyonu, enflasyonu ve fiksasyonu için basit ve verimli bir yöntem sunmaktır.

Tümör Histolojisi için Fare Akciğerinin Perfüzyonu ve Enflasyonu

İzole tavşan akciğer hazırlığı pulmoner araştırmalarda altın standart bir araçtır. Bu yayın, tekniğin hava yolu reaktivitesi, akciğerin korunması ve akciğer nakli ve pulmoner ödemde preklinik araştırmalarda yer alan fizyolojik ve patolojik mekanizmaların incelenmesi için geliştirilmiş olarak tanımlanmaktadır.

Tavşan Modelinde İzole Akciğer Perfüzyon Sistemi

Ex vivo akciğerler, in vivo deneylerin kafa karıştırıcı değişkenlerini dışlarken fizyolojik veri toplamak için çeşitli deneyler için yararlıdır. Ticari kurulumlar genellikle pahalıdır ve toplayabilecekleri veri türleri bakımından sınırlıdır. Çeşitli çalışma tasarımları için uyarlanabilen, tamamen modüler bir kurulum oluşturmak için bir yöntem açıklıyoruz.

Sıçan Ex Vivo Akciğer Perfüzyon Modelinin Tasarımı ve Uygulanması

Burada, bir sıçan EVLP modeli oluşturmak için gerekli adımları açıklıyoruz ve perfüze akciğerlerle ilişkili inflamatuar profili gösteriyoruz. Amaç, sıçan EVLP modeli hakkındaki bilgi ve deneyimleri yaymak ve bu devrim niteliğindeki teknikle ilişkili biyolojik tepkilerin bütünsel olarak anlaşılmasını sağlamaktır.

Akciğer naklinde translasyonel içgörüler için ex vivo akciğer perfüzyon sıçan modelinin oluşturulması

Amaç, EVLP boyunca 4 saat boyunca tutarlı akciğer fonksiyonunu sürdürebilen sıçanlarda yeni bir ex vivo akciğer perfüzyonu (EVLP) modeli geliştirmek ve endüstriye EVLP'yi kemirgen modellerine uygulamak için sağlam bir yöntem sunacak uygulama özellikleri sağlamaktır.

Dolaşım Ölümü Sonrası Sıçan Akciğerleri için Yeni Bir Ex Vivo Akciğer Perfüzyon Sisteminin Kurulması

Öğrenin fare akciğerlerinin izolasyonu, havalandırılması ve perfüzyonu yöntemini pulsatil pulmoner basınç-akış ilişkilerini incelemek için. Bu teknik sağ ventrikül son yükünü nicelendirmeye yardımcı olur.

İzole, Havalandırmalı ve Enstrumanlı Fare Akciğer Karakterizasyonu Pulsatif Akış ile perfüze

Daha fazla video keşfet