Name: İnsülin Enjeksiyon ve Yetişkin İnsülin Hassasiyet Tedbir hemolimf Ekstraksiyon Drosophila melanogaster /em (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-06-30T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 52 s
Description: Keşfedin Drosophila melanogaster'da insülin enjeksiyonu ve hemolimf glukoz ölçümü yöntemini. Bu teknik metabolik bozukluk araştırmalarında sistemik insülin etkisini değerlendirmek için kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, NIA YW.CF (AG21068, AG31086) hibe ile desteklendi.

1. İnsülin Çözüm Hazırlığı <ol><li> 0.01 mg / ml konsantrasyonu elde etmek için PBS içinde insülin eriterek taze sığır insülin çözüm hazırlayın. Insülin / PBS ve kontrol PBS iki çözüm de enjeksiyon prosedürü boyunca buz üzerinde tutulmalıdır. Bu çözümler,% 0.5 (v / v) FD &amp; C mavi no ile hazırlanmalıdır. 1 gıda renklendirme. </li></ol> 2. İğne hazırlanması ve Enjeksiyon Set-up <ol><li> Kapiller cam iğneler, çekin, 210; Hız, 100; Zaman, 200 (100ms) Isı, 345: çektirmenin ayarları enjeksiyon için yeterli kalitede iğne üreten aşağıdaki mikropipet puller.The kullanarak hazırlayın. Taze çekilmiş iğne ucu Kimwipe doku üzerinden basarak köreldiğini olmalıdır. Bu küntleşme süreci uzamış yüksek direnç ucu kaldırır ve daha büyük bir gözenek çapı ile stouter ucu üretir. </li><li> Köreldiğini iğne ucu-insülin / yalnız PBS solüsyonu veya PBS içeren bir mikrosantrifüj tüp yerleştirin. Her iğne geri-dolum eylem sonuç Kılcal. Stereomicroscope altında hiçbir enkaz veya hava kabarcıkları ucunda görüntülendiğinden emin olmak için bir iğne ucu uyun. Temiz doldurmak değil herhangi bir iğne atın. </li><li> Iğne ucu bir stereomikroskopta görünür böylece manuel mikroenjektör iğne tutucu ve pozisyon iğne tutucu bir micromanipulator ile doldurulur iğne takın. Mikroenjektör şırınga üzerindeki pimi takılı el mikroenjektör mikrometre düğmesini çevirerek iğne sıvı sütun üzerinde pozitif basınç uygulayın. </li><li> Iğne ucu Kimwipe dokunmadan ve sıvı akışını doğrulayan doğrulayın sıvının yer değiştirmesi için yeterli basınç tatbik edilmiştir. </li><li> İğnenin açık bant yapıştırmayın iğne mili, enjeksiyon için bir kalibrasyon grafiği hazırlanır ve 20X büyütme altında, bir stereomikroskopta iğne ucu ile odak noktası haline getirmek olmuştur. </li></ol> 3. Hazırlık Fly <ol><li> On günlük erkek sineklerin enjeksiyon deneyleri için kullanılmaktadır. Eclosion 24 saat içinde sinekleri toplayın. Erkek yeri ve erkek sineklerin dışarı standart veya tedavisinde diyet içeren flakon içine bir gaz ped nemlendirilmiş CO 2, sıralama sinekler anestezisi. 10 gün boyunca deneysel diyetler erkek sineklerin koruyun. </li><li> Deneysel diyetler eclosion ve ayırma takip eden onuncu gün, transfer, 5 ml% 2 agar fişi içeren şişeleri, gıda içeren flakon uçar ve 12-16 saat açlıktan </li><li> 1 saat süreyle insülin enjeksiyon öncesinde% 10 glukoz batırılmış filtreleri içeren flakon açlıktan sinek aktarın. </li><li> Kısaca glikoz beslenmeden sonra nemlendirilmiş CO 2 sinekler uyutmak ve o zaman soğuk, buz onları hareketsiz. </li></ol> 4. Enjeksiyon Yöntemi <ol><li> Yavaşça ince forseps bir çift ile bir soğuk immobilize sinek kavramak ve ucu sinek toraks sol tarafında ön bölgeye bitişik şekilde iğne ucu yakın tutun. Stereomicroscope altında iğne ucu ve sinek toraks hem de odak noktası haline getirin. </li><li> Iğne ucu tümsek sinek toraks (Şekil 1) sol prescutum bölgenin merkezi değecek şekilde hafifçe sinek iğne ucu doğru hareket ettirin. Sinek düzgün odaklı ve iğne ucu ile uyumlu bir kez, böylece iğne iğne prescutum merkezinde impales üzerine sinek ilerlemeye devam ediyor. </li><li> Sıvı 0.1 ul sinek içine enjekte edilmiş kadar mikroenjektör mikromanipülatör düğmesi ile şırınga pistonu ilerleyen gerektiği gibi pozitif basınç uygulayın. Sinek hemocoel içine sıvı akışı, ön Toraks sol tarafına mavi bir renk verir. Bazen bir geri çekin ve herhangi bir iğne ucu tıkanması yerinden ve sıvı akışı için izin vermek için birkaç kez ilerlemek gerekir. </li><li> Enjekte sinekler hemolimf çıkarma önce belirlenmiş zaman noktaları için% 2 agar şişeleri kurtarmak için izin verin. </li></ol> 5. Hemolimf Koleksiyon <ol><li> Kısaca istenilen enjeksiyon sonrası zaman noktalarında ve pozisyon nemlendirilmiş CO 2 sinekler uyutmak dorsal tarafı aşağı bir CO 2 pad yüzeyine yapıştırılmış çift taraflı bant her sinek. Hizalı kafa kapsül ile satır bile sinek düzenleyin. Bir yapıştırıcı bant kanatları basın ve immobilizasyon sağlamak için kesilmiş ahşap bir aplikatör çubuk kullanabilirsiniz. </li><li> Sinek, bant sabit, ince forseps ile her sineğin burnumun kavramak ve baş kapsül ön stereo mikroskop ile görülebilecek şekilde, hafifçe sinek, karın ve arka sonra bölgeye yönelik çekin. </li><li> Diğer el ile ve burnumun pozisyonda tutarak, delinme ptilinal sütür sadece üzerinde kafa kapsül merkezi keskin bir tungsten iğne kullanılarak (Şekil 2). Baş kapsülü diğer tarafı ile iğne ucu yumruk ve daha sonra c kaybetmek kolaydır Bir çok uzak iğne eklemek için dikkatli olmak gerekirhemolimf akış ontrol. Delinme hemolimf toplama önce bir enjeksiyon grubunda uçar. </li><li> Baş kapsülü delinmiş edildikten sonra, hafifçe sinek karına baskı uygulamak için kesilmiş ahşap bir aplikatör çubuk kullanabilirsiniz. Bu kadar üzerinde baskı uygulamak gibi ventral tarafta aittir sinek rulo için yararlı olabilir. Bu prosedür, baş kapsül ponksiyon sitesinden hemolimf Bir damla üretecek. </li><li> Baş kapsül ponksiyon sitesinde çıkan hemolimf damlacık 1μl microcapillary bir tüp bir ucundan dokunun. Hemolimf kapiller eylem ile tüp girecektir. Mezun bir miktar çizelgesi karşı microcapillary tüp içinde sıvı sütununu kontrol ederek toplanan hemolimf miktarını belirleyin ve kaydedin. </li></ol> 6. Hemolimf Glikoz Belirlenmesi <ol><li> Mikroplaka kuyuları Infinity Glikoz Reaktif 100 ul içeren hemolimf örnekleri çıkarın. Hemolimf örnekleri yüklenirken buz üzerinde plaka tutun. </li><li> 50mm, 25mm, 12.5mm, 6.25mM ve 3.125mM 1 ul şekeri stok çözümlerin her biri ayrı ayrı yükleyerek bir standart eğri oluşturulması. </li><li> 37 numune ° C'de 10 dakika. </li><li> 340 nm'de absorbans algılar. </li><li> Hesap hemolimf hacmi için toplanan ve bilinen glikoz konsantrasyonları ile standart eğri dayalı örnek glukoz konsantrasyonu belirlemek. </li></ol> 7. Temsilcisi Sonuçlar Tipik bir insülin tolerans yanıt glikoz düzeylerinin bir damla enjeksiyon sonrası 15 dakika tespit ve insülin enjekte sinekler tespit edilmiştir. Buna karşılık, bu tür tepki PBS enjekte sinekler (Şekil 3) görülmez. Periferik glukoz bertaraf Bu yanıt insülin enjekte devam enjeksiyon sonrası 30 dakika kadar uçar. Biz, her enjeksiyon grubunda rutin olarak 4-5 sinek başına 0.2-0.5 ul hemolimf ayıklayın. Üç enjeksiyon grubu, her bir deney yer almaktadır. <img src="/files/ftp_upload/2722/2722fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1 Drosophila toraks iğne ekleme sitesi (Demerec, 1950 Değiştirilmiş) 7 gösteren sol tarafında. Prescutum, göğüs kafesinin sol tarafında ön, dorsal bölge merkezi aracılığıyla iğne yerleştirin. <img src="/files/ftp_upload/2722/2722fig2.jpg" alt="Şekil 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 2"> Şekil 2 hemolimf çıkarımı (Demerec, 1950 Değiştirilmiş) 7 ponksiyon yerini gösteren Drosophila kafa Önden görünüm. Delinme ptilinal sütür sadece üzerinde kafa kapsül merkezinde ince bilenmiş tungsten probu ile baş kapsül. <img src="/files/ftp_upload/2722/2722fig3.jpg" alt="Şekil 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 3"> Şekil 3 kontrolü yetişkin tespit tipik bir insülin tolerans yanıt uçar. Kontrol w 1118 sinekler, sığır insülini (PBS içinde 1 ng) veya PBS sadece enjekte edildi . 0, 15 veya 30 dakika ve glikoz düzeyleri dolaşan kurtarmak için çoğaltmak gruplar halinde Sinekler sonra izin verildi ölçüldü.

<ol><li>Rulifson, E. J., Kim, S. K., Nusse, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ablation+of+insulin-producing+neurons+in+flies%3A+growth+and+diabetic+phenotypes%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Ablation of insulin-producing neurons in flies: growth and diabetic phenotypes.</a> Science. 296, 1118-1118 (2002).</li>
<li>Kim, S. K., Rulifson, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conserved+mechanisms+of+glucose+sensing+and+regulation+by+Drosophila+corpora+cardiaca+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Conserved mechanisms of glucose sensing and regulation by Drosophila corpora cardiaca cells.</a> Nature. 431, 316-316 (2004).</li>
<li>Broughton, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longer+lifespan%2C+altered+metabolism%2C+and+stress+resistance+in+Drosophila+from+ablation+of+cells+making+insulin-like+ligands%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Longer lifespan, altered metabolism, and stress resistance in Drosophila from ablation of cells making insulin-like ligands.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 102, 3105-3105 (2005).</li>
<li>Haselton, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Partial+ablation+of+adult+Drosophila+insulin-producing+neurons+modulates+glucose+homeostasis+and+extends+life+span+without+insulin+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Cycle%22%5BJournal%5D)">Partial ablation of adult Drosophila insulin-producing neurons modulates glucose homeostasis and extends life span without insulin resistance.</a> Cell Cycle. 9, 3063-3063 (2010).</li>
<li>Haselton, A. T., Fridell, Y. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+Drosophila+melanogaster+as+a+model+for+the+study+of+glucose+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+%28Albany+NY%29%22%5BJournal%5D)">Adult Drosophila melanogaster as a model for the study of glucose homeostasis.</a> Aging (Albany NY). 2, 523-523 (2010).</li>
<li>Belgacem, Y. H., Martin, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disruption+of+insulin+pathways+alters+trehalose+level+and+abolishes+sexual+dimorphism+in+locomotor+activity+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Disruption of insulin pathways alters trehalose level and abolishes sexual dimorphism in locomotor activity in Drosophila.</a> J Neurobiol. 66, 19-19 (2006).</li>
<li>Demerec, M. Biology of Drosophila. , John Wiley & Sons. New York. (1950).</li>
</ol>

Bu raporda açıklanan teknik Drosophila hemolimf kompozisyon saptanabilir değişiklikler sonucu fizyolojik süreçleri araştıran bir çalışmada, potansiyel olarak yararlı olur. Bu şekilde enjeksiyon ve hemolimf toplama birleştirerek, belirli bir deneysel tedavi veya manipülasyon anında önemli fizyolojik etkilerini tespit etmek mümkündür. Dekapitasyon 2 içeren önceki teknikleri üzerine hemolimf koleksiyonunda bu &quot;katliam&quot; tekniğinin en önemli avantajı, bağırsak contents.If bakım, bazen ortaya çık...

<table border="1"><tbody><tr><th> Reaktif / ekipman Adı </th><th> Şirket </th><th> Katalog numarası </th></tr><tr><td> Sığır insülin </td><td> Sigma </td><td> I5500 </td></tr><tr><td> Infinity Glikoz Reaktif </td><td> Thermo Electron Corporation </td><td> TR1541 </td></tr><tr><td> Manuel mikroenjektör </td><td> Sutter Enstrüman </td><td></td></tr><tr><td> P-87 Flamming / Brown mikropipet çektirmesi </td><td> Sutter Enstrüman </td><td></td></tr><tr><td> Tek varil borosilikat kılcal cam </td><td> AM Sistemleri </td><td> 626000 </td></tr><tr><td> FD &amp; C Blue No: 1 </td><td> McCormick &amp; Company </td><td></td></tr><tr><td> 1 ul microcapillary tüpler </td><td> Drummond </td><td></td></tr><tr><td> Üç eksenli manuel mikromanipülatör ve baz </td><td> Dünya Hassas Aletler </td><td></td></tr></tbody></table>

İnsülin enjeksiyon ve yetişkin İnsülin hassasiyet tedbir hemolimf ekstraksiyon drosophila melanogaster</em

Insulin Injection and Hemolymph Extraction to Measure Insulin Sensitivity in Adult Drosophila melanogaster

Korunmuş besin algılama mekanizmaları, memeli ve peptidler gelişimsel larva aşamaları 1,2 sırasında glikoz dengesini korumak için sırasıyla memeli insülin ve glukagon, fonksiyon benzeyen meyve sineği arasındaki mevcut . Büyük ölçüde post-mitotik yetişkin sinekleri üzerinde yapılan çalışmalar, insülin-benzeri hücreler (IPC) 3 üreten peptid (ILP) genetik ablasyonu sonucu glikoz dengesini pertürbasyon ortaya koymuştur. Böylece, yetişkin meyve sinekleri, tip II diyabet gibi metabolik bozukluklar için uygun bir genetik model sistem olarak büyük umut tutun. Meyve sineği sistemi daha da geliştirmek için, memelilerde glukoz toleransı ve insülin duyarlılığını ölçmek için kullanılan karşılaştırılabilir fizyolojik testlerin oluşturulması gerekir. Bu amaçla, son zamanlarda erişkin sinek oral glukoz tolerans tepki ölçmek için bir roman prosedürü tarif var ve glikoz dengesini 4,5 korunmasında yetişkin IPCs önemini göstermiştir. Burada insülin enjeksiyonu 6 için daha önce açıklanan prosedür değiştirilmiş ve erişkin sinek periferik insülin duyarlılığını ölçmek için yeni bir hemolimf ekstraksiyon yöntemi ile kombine var. Benzersiz, protokol erişkin sinek insülin enjeksiyonu, insülin sinyal mutantlar ve erişkin sinek glukoz toleransı ve insülin duyarlılığını etkileyen olası müdahaleler karakterize etmek mümkün kılan bir metodoloji üzerine periferik glukoz yükü elden çıkarma yeteneği doğrudan fizyolojik ölçümler sağlar.

Korunmuş insülin sinyalizasyonu meyve sineği bulundu yolaklar<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Bu organizmanın, tip II diyabet gibi metabolik bozukluklar modelleme için potansiyel bir araç yapmak. Bu amaçla, erişkin sinek periferik glukoz bertaraf edilmesinde etkili sistemik insülin etkisini ölçmek için fizyolojik testleri kurmak için kritik öneme sahiptir.

İnsülin Enjeksiyon ve Yetişkin İnsülin Hassasiyet Tedbir hemolimf Ekstraksiyon Drosophila melanogaster</em

Memeliler ve meyve sinekleri arasında korunmuş besin algılama mekanizmaları mevcuttur; burada sırasıyla memeli insülinine ve glukagonuna benzeyen peptitler işlev görür...

Bu prosedürün genel amacı, yetişkin drosophila melanogaster'da enjekte edilen insülinin hemolenf glikoz seviyeleri üzerindeki etkilerini ölçmektir. Bu işlem, öncelikle aç bırakılmış sineklerin konsantre bir glikoz çözeltisini almalarının sağlanmasıyla gerçekleştirilir. Prosedürün ikinci adımı ise, glikozla beslenen sineklere insülin enjekte etmektir.Prosedürün üçüncü adımı, kontamine olmamış bir hemolenf örneği toplamaktır. Prosedürün son adımı ise hemolenf glukoz konsantrasyonunu belirlemektir. Nihayetinde, spektrometri aracılığıyla ekzojen insülinin Esof la Melan gaster'de glukoz klirensini kolaylaştırdığını gösteren sonuçlar elde edilebilir.Bu tekniğin yetişkinlerin kafasını kopararak kanatma gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, bu prosedürün bağırsak içeriğinin hemolenf örneğini kontamine etmesini en aza indirmesidir. Oklüzyondan sonraki 24 saat içinde, sinekleri nemlendirilmiş karbondioksit kullanarak anestezi altına alarak toplayın. Dişi sinekleri ayırın ve standart diyet içeren viallere yerleştirin.Sineklerin 10 gün boyunca yaşlanmasına izin verin. 10 gün sonra, sinekleri 2%aros içeren beş mililitrelik bir tıkaç bulunan flakonlara aktarın ve onları 12 ila 16 saat boyunca aç bırakın. İnsülin enjeksiyonundan bir saat önce, aç bırakılmış sinekleri %10glucose emdirilmiş filtre kağıdı içeren flakonlara aktarın; enjeksiyon için insülin solüsyonu hazırlamak amacıyla, bovine insülini fosfat tamponlu salin içerisinde 0,01 mg/mL nihai konsantrasyona ulaşacak şekilde çözün.Ayrıca yalnızca PBS içeren bir kontrol çözeltisi hazırlayın. Hem insülin hem de kontrol çözeltilerine, son konsantrasyonu 0.5% olacak şekilde mavi gıda boyası ekleyin ve tüm prosedür boyunca her iki çözeltiyi de buz üzerinde tutun. Yeni çekilmiş cam iğnelerin uçlarını, bir Kim wipe üzerinden bastırarak kütleştirin.Daha geniş bir gözenek çapına sahip sağlam bir uç oluşturmak için, köreltilmiş iğneyi uç kısmı yukarı gelecek şekilde insülin veya kontrol çözeltisi içeren bir mikrosantrifüj tüpüne yerleştirin ve kapiler etkinin iğneyi geriye doğru doldurmasına izin verin. Her bir iğneyi stereo mikroskop altında hava kabarcıkları açısından kontrol edin ve temiz bir şekilde dolmamış olanları atın. Dolmuş iğneleri manuel mikro enjektör iğne tutucusuna yerleştirin ve tutucuyu, iğne ucu stereo mikroskop altında görünür olacak şekilde bir mikro manipülatör ile konumlandırın.Mikro enjektör şırıngasındaki pistonla bağlantılı mikrometre düğmesini çevirerek iğnedeki sıvı sütununa pozitif basınç uygulayın. Sıvı akışı için yeterli basınç olduğunu doğrulamak amacıyla iğne ucuna bir kimyasal temizleme mendili (chem wipe) değdirin. İğne enjeksiyona hazırlandığında, şeffaf bantla iğne şaftına bir kalibrasyon çizelgesi sabitleyin ve iğne ucunu 20 x büyütmedeki bir stereo mikroskop altında odaklayın.Glikozla beslenen sinekleri nemlendirilmiş karbondioksit ile kısa süreliğine anesteziye alın ve stereo mikroskop altında anesteziyi sürdürmek için buz üzerindeki bir pedin üzerine yerleştirin. İnce uçlu bir pensle bir sineği tutun ve iğnenin ucunu sineğin sol tarafının ön bölgesine yakın olacak şekilde konumlandırın. Hem iğnenin ucunu hem de sineğin toraksını odak noktasına getirin.Sinekle iğne ucunu, iğne ucunun sineğin sol presum bölgesindeki çıkıntının merkezine değeceği şekilde nazikçe yaklaştırın. Toraks kısmından sineği iğne üzerine doğru ilerletmeye devam ederek iğnenin presum merkezini delmesini sağlayın. Mikro enjektörün mikromanipülatör düğmesiyle şırınga pistonunu ilerleterek 0.1 değerine kadar pozitif basınç uygulayın.Sineklerin içine mikrolitre cinsinden insülin çözeltisi veya kontrol çözeltisi enjekte edilmiştir. Enjeksiyon, anterior toraksın sol tarafına mavi bir renk verecektir. Enjekte edilen sineklerin, hemolenf ekstraksiyonundan önce sıfır, 15 ve 30 dakikalık tekrarlı gruplar halinde %2'lik Aros dosyalarında toparlanmalarına izin verin ve zamanlama için karbondioksit pedine bir parça çift taraflı bant sabitleyin.Sıfır grubundaki sinekleri anestezi altına alın ve baş kapsülleri aynı hizada olacak şekilde, sırt üstü olarak bandın üzerine eşit sıralar halinde yerleştirin. Sinekler banda sabitlendikten sonra, bir sineğin probosisini ince bir pensle tutun ve baş kapsülünün ön kısmı görünür hale gelene kadar nazikçe ventral ve ardından posterior bölgeye doğru çekin. Probosisi bu konumda tutarken, baş kapsülünü lenal sütürün üzerinden keskin bir tungsten iğne ile delin; bu sırada başı tamamen delmemeye dikkat edin.Tüm sinekler delindikten sonra, sineğin abdomenine hafifçe baskı uygulamak için ucu düzeltilmiş ahşap bir aplikatör çubuk kullanın. Bu işlem, baş kapsülü delme bölgesinde küçük bir hemolenf damlacığı oluşmasını sağlayacaktır. Bir mikrolitrelik mikro kapiler tüpün ucunu hemolenf damlacığına değdirin.Spektrofotometre kullanarak mikrokılcal tüp içindeki sıvı sütununu dereceli bir hacim çizelgesiyle karşılaştırarak toplanan hemolenf miktarını belirleyin ve kaydedin, 340 nanometredeki absorbansı tespit edin ve glikoz konsantrasyonunu belirleyin; sığır insülin çözeltisi enjekte edilen sinekler, kontrol çözeltisi enjekte edilen sineklere kıyasla enjeksiyon sonrası 15. ve 30. dakikalarda azalmış hemolenf glikoz seviyeleri göstermiştir. Bu videoyu izledikten sonra, yetişkin drosophila'ya küçük hacimlerde çözelti nasıl enjekte edileceği, yetişkin drosophila'dan hemolenf nasıl ekstre edileceği ve bu prosedürün ardından yetişkin drosophila'dan hemolenf glikoz konsantrasyonu nasıl belirleneceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.Yetişkin drosophila'da insülinin besin metabolizmasının ilgili yönlerini nasıl etkilediği gibi soruları yanıtlamak için protein konsantrasyonu tayini ve hemolenf trigliserid konsantrasyonu tayini gibi diğer deneyler gerçekleştirilebilir.

insulin-injection-hemolymph-extraction-to-measure-insulin-sensitivity

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Drosophila hemocytes gelişmekte olan embriyonun bütünlüğü içinde dağılırlar . Bu protokol, floresan etiketli hemocytes embriyoları kullanılarak bu göçler montaj ve görüntü nasıl gösteriyor.

Uygulamalarda Canlı Görüntüleme Drosophila melanogaster Embriyonik Hemocyte Göçler

Bu video, canlı yetişkin sineklerin enjeksiyonunun nasıl gerçekleştirileceğini açıklar ve fagositozu test etmek için etiketli parçacıkların ve tripan mavisinin sinek karınlarına enjekte edildiği örnek bir protokol içerir.

Yetişkin Drosophila Sineklerinin Enjeksiyonu: Bir Bileşik veya Etiket Dağıtım Yöntemi

Drosophila hemolenf, larva ve yetişkin aşamalarında vücutta dolaşan hem kan hem de interstisyel sıvı görevi görür. Bu video, dolaşımdaki hücreleri ölçmek için larva hemolenfini toplamak için bir protokolü açıklamaktadır.

Kütikül Bozulması: Drosophila Larvalarından Hemolenf Toplamak İçin Bir Yöntem

Bu makale, Drosophila melanogaster'de yakıt oksidasyonunun ölçümü için eser miktarda spesifik radyoaktif işaretli metabolik substratların sineklere beslendiği bir yöntemi açıklamaktadır. Yakıt oksidasyonundan üretilen solunan radyoaktif işaretli CO2 toplanır ve ölçülür.

Radyoaktif Yüzeyler Karbon Dioksit Üretimi ölçümü<em&gt; Drosophila melanogaster</em

CApillary FEeder (CAFE) testi, gıda alımının altında yatan mekanizmaları araştırmak için basit, bütçe dostu, son derece güvenilir bir yöntemdir. Çok yönlü genetik model organizma Drosophila melanogaster ile birlikte kullanıldığında, gıda alımının düzenleyici mekanizmaları hakkında yeni bilgiler edinmenin güçlü bir yolunu sunar.

Kılcal Besleyici Testi Gıda Alımını içinde Tedbirler<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Bu yöntem, patojen işgali üç boyutlu (3D) modelleri ile böcek hücreye görselleştirmek gösterilmiştir. Hemocytes Drosophila larvaları üzerinden viral veya bakteriyel patojenler, ex vivo veya vivo içindeile bulaşmış. Virüslü hemocytes daha sonra sabit ve görüntüleme için bir confocal mikroskop ve sonraki 3D hücresel yeniden yapılanma ile lekeli.

Hemocytes mikrobiyal enfeksiyon ve çözümleme çekme--dan Drosophila melanogaster larva

Bu kağıt için ex vivo kalsiyum düşsel Drosophila beyin protokolünü açıklar. Bu yöntemde, doğal veya sentetik bileşikler beyindeki belli nöronlar etkinleştirmek için yeteneklerini test için tampon uygulanabilir.

Ex Vivo Endokrin Drosophila içinde sinyal beyin yanıt-e doğru görüntülenmesi için kalsiyum görüntüleme

Bu iletişim kuralı bir hücre tanıma ve mikrobiyal enfeksiyonlar Gümrükleme ölçmek için yetişkin Drosophila melanogaster içinde vivo fagositoz tahlil açıklar.

Bir In Vivo fagositoz tahlil kullanarak Drosophila melanogaster, meyve sineği hücresel bağışıklık yanıtı değerlendirirken

Kan-beyin bariyerbütünlüğü sinir sistemi fonksiyonu için çok önemlidir. Drosophila melanogasterolarak, kan-beyin bariyeri geç embriyogenez sırasında glial hücreler tarafından oluşur. Bu protokol, D. melanogaster embriyolarında ve üçüncü instar larvalarında kan-beyin bariyeri oluşumu ve bakımı için taht yöntemlerini açıklamaktadır.

Drosophila melanogaster Kan-beyin Bariyer Bütünlüğü için Tahse

Bu protokol, genç ve yaşlı Drosophila melanogaster hemositlerin fagositoz bakterilere yeteneğini değerlendirmek ve ölçmek için kullanılan fagositozun in vivo testinitanımlar.

Erişkin Drosophila melanogaster Hemositlerin Yaşa Özgü Fagositik Yeteneğinin In Vivo Fagositoz Islımı Ile Değerlendirilmesi

Drosophila melanogaster yetişkin sinekleri, konakçı antimikrobiyal doğuştan gelen immün yanıtların ve mikrobiyal enfeksiyon stratejilerinin altında yatan moleküler mekanizmaları araştırmak için model organizmalar olarak yaygın olarak kullanılmaktadır. D. melanogaster larva aşamasını ek veya alternatif bir model sistem olarak tanıtmak için, bir larva enjeksiyon tekniği tanımlanmıştır.

Drosophila melanogaster Larva Enjeksiyon Protokolü

Keşfedin Drosophila melanogaster'da insülin enjeksiyonu ve hemolimf glukoz ölçümü yöntemini. Bu teknik metabolik bozukluk araştırmalarında sistemik insülin etkisini değerlendirmek için kullanılır.

İnsülin Enjeksiyon ve Yetişkin İnsülin Hassasiyet Tedbir hemolimf Ekstraksiyon Drosophila melanogaster

Daha fazla video keşfet