Name: Kemirgenler Travma Sonrası epileptogenezisin Alt kesilme Model hazırlanması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-09-15T12:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 58 s
Description: Öğrenin, sıçanlarda travma sonrası epileptogenez için alt kesilme modeli hazırlama yöntemini. Özel cerrahi cihaz kullanılarak beyin lezyonları daha hassas ve tutarlı şekilde oluşturulur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma Ulusal Sağlık Enstitüsü / NINDS Omurilik ve Indiana Eyalet Sağlık Bölümü Beyin Hasarı Araştırma fonu hibe 4R00 NS 057.940, ve hibe SCBI 200-12 tarafından desteklenmiştir.

1. Alttan ameliyatı için basit bir cihaz yapma <ol><li> Yarattığımız alttan cihazı (Şekil 1) üç bölümden oluşur: (1), yol gösterici bir tüp eki ve bir iğne sağlar ve ameliyat sırasında kranyal pencere karşısına geçiyor, paslanmaz çelik veya plastikten yapılmış bir destek plakası; (2) pozisyonda bir iğne tutan ve iğne dönme izin veren yol gösterici bir tüp; ve (3) ucundan ~ 3 mm 90 derece bükülmüş ve rotasyon ve ekleme hareketli bir iğne. </li><li> 1-1.5 mm kalınlığında, 7 ~ 10 x 30 mm dikdörtgen, paslanmaz çelik veya şeffaf plastik (1) destekleyen plaka yapmak için bir parça kesin. 1.5 inç 22-gauge (BD şirketi, # 305.156) ve 1.5 inç 25-gauge (BD şirketi, # 305.127) şırınga iğnesinin hazırlayın. Yol gösterici bir tüp yapmak için, plastik sonu ve böylece toplam uzunluğu 31-32 mm (2) yaklaşık 22-gauge şırınga iğne iğne ucu alt kesti. Kum metal uç düz ve pürüzsüz bir hale getirmek için. Bu kılavuz tüp nihai uzunluğu 25 gauge enjektör iğnesi 5-6 mm daha kısa olmalıdır. </li><li> Iğne metal kenarına dik olduğundan emin olun, destek plakası üzerine kılavuz tüpü düzeltmek için siyanoakrilat yapıştırıcı kullanın. </li><li> 25-gauge enjektör iğnesi kılavuz tüp içine yerleştirin ve ucu (Şekil 1) 2.5-3 mm iğne 90 derece bükün. </li><li> Iğne sonuna kadar (Şekil 1, iğne durdurma) üzerine yapıştırma küçük bir plastik tüp iğne dikey hareket aralığı ayarlayın. İğnenin son hareket aralığı ne kadar derin iğne korteks eklenebilir belirler ve, P21 sıçanlar için 1.6-1.8 mm ve P21 fareler için 1,3-1,5 mm olmalıdır. Bu uzunluk, farklı hayvan türleri ve yaşları için ayarlanması gerekiyor. </li><li> Kıvrık ucu ile aynı yönde (Şekil 1 iğne göstergesi) üst ucuna iğne küçük bir bakır tel veya küçük bir parça bant takın. Tel veya bant alttan ameliyat sırasında iğne dönme açısı (Şekil 1) gösterir. </li></ol> 2. Hayvan hazırlık <ol><li> Tüm cerrahi aletler, cam boncuk sterilizatör, veya% 70 etanol ile dezenfekte ile sterilize otoklava gerekir. </li><li> Postnatal yaş 20 - 22 gün (P20-22) ya da aynı yaşta CD1 fareler, Sprague / Dawley rat kullanır. , Fareler ya da sıçanlar farklı türlerin belirli projeler için kullanılıyor olabilir. </li><li> Fareyi bir ip ketamin enjeksiyonu ile anestezi 80 mg / kg ve ksilizin 8 mg / kg. Hayvan kuyruk tutam yanıt vermiyor sonra cerrahi prosedür başlar. Ameliyat sırasında, gerekirse, bir rapel doz üçte birinin orijinal doz anestezik kokteyl orijinal anestezi devlet geri verilecektir. </li><li> Elektrikli saç kesme makineleri ile hayvan kafa derisi, saç kesin. Anestezi sırasında kuruluğa karşı koruma için bir hayvanın gözleri üzerine küçük bir miktar oftalmik merhem uygulayın. Kafa derisi,% 70 etanol,% 10 povidon-iyot çözeltisi ile dezenfekte edin. </li><li> Hayvan istikrarlı bir sabit pozisyonda kafa tutmak için stereotaksik bir aparat üzerine monte edin. Ameliyat boyunca, hipotermi önlemek için ısıtma pedi üzerinde hayvan tutun. </li><li> Lambda gelen gözler arasında uzanan bir neşter kullanılarak kafa derisi ön-arka orta hat kesi olun. Hemostat deri bir kenara çekin ve sol kafatası yeterince açığa çıkarmak için kullanın. </li><li> Sol kafatası üzerinde dikdörtgen bir kesim olun ve periost kazımak için neşter kullanabilirsiniz. Bu adım kanamayı azaltmak ve kafatası delme kolaylaştıracaktır. </li></ol> 3. Undercut'lar yapma <ol><li> Maruz kafatası alan üzerine küçük bir miktar steril tuzlu su ekleyin ve sonra kan, temiz ve kuru alan birkaç Q-ipuçlarını kullanın. </li><li> Cerrahi bir mikroskop altında, sol kafatasının merkezinde dikdörtgen bir oluk (sıçanlarda ~ 5 x 7 mm, 4 farelerde x 5 mm) (yaklaşık, sol sensorimotor korteks üstte) sondaj başlar. Kafatası üzerinde bir damla serum fizyolojik uygulanması, sondaj ve dağıtır ısı kolaylaştırır. Kemik derinliği sonra yaklaşık 2 / 3 delinir, aşırı tuzlu su çıkarmak ve Q-tip sondaj alanını temiz. Kemik merkezi parçası üzerine hareketli bir forseps nazik bir dokunuş kadar yavaş ve dikkatli derin delme. </li><li> Merkezi parça kemik, kemik kenarına forseps keskin bir ucu ekleme ve sol hemisfer yavaş yavaş ortaya çıkarmak için forseps kaldırma dikkatlice çıkarın. </li><li> Cerrahi mikroskop altında, alttan cihazı ve yönlendirmek parasagital bir yönde iğne ve iğne ucu ve hedef kortikal bölgedeki görselleştirme korumak için biraz kaudal böylece orta hatta, devirme cihaz için destek plakası dik. Kraniyal penceresinin ortasında, superior sagittal sütür yanal bir alana 1-2 mm iğne ucu Amaç, ve büyük damarların doğrudan nüfuz önlemek. </li><li> Kan damarlarının Yedek şekilde dura aracılığıyla pia altında yatay yönde iğne takın. Alttan cihazın alt Sitböylece iki kraniyal pencere kenarları üzerine iğne kortikal yüzey (Şekil 1) normal konumlandırılmış. Elle kafatası pencere kenarlarını hem cihaz Dinlenme önemli ölçüde azaltmak veya aşağıdaki yordamı sırasında el sallayarak ortadan kaldıracaktır. Pia altına iğne yukarı kaldırın, sonra yavaş yavaş iğne derin gidemez kadar transkortikal bir kesim oluşturmak için daha düşük. ~ 135 ° uzakta VI alttan yarım daire beyaz madde / derin katmanı oluşturmak için orta hat döndürün. Sonra pia altına iğne tekrar yükseltin. Cihazı geriye doğru yatırın ve iğneyi çıkartın. </li><li> İsteğe bağlı olarak, yukarıdaki prosedürü (adım 2.5) tekrar ama pencerenin lateral kenarları ek bir transkortikal kesme oluşturacak kadar iğne açmadan. Bu, daha eksiksiz bir kortikal izolasyon yaratacaktır. </li><li> Plastik film (6 x 6 mm) bir parçası koruması için kafa pencere üzerine yerleştirin ve kafa derisi sütür. Anesteziden tamamen düzelene kadar ısıtılmış bir pad üzerinde hayvan yerleştirin. </li></ol> 4. Temsilcisi sonuçları: Koronal kortikal dilim alttan cerrahi başarı onaylamak için hazırlanmış olabilir. Ameliyattan 2 hafta sonra hazırlanan dilim, transkortikal ve alttan kesikler, mikroskop düşük güç hedefi (Şekil 2) altında görülebilir. Kısmen izole korteks genellikle biraz daha ince olur ve epileptiform aktivite alanında potansiyel kayıt (Şekil 3) ile kortikal dilim çoğunluğu tespit edilebilir. Kontrast, beyaz cevher veya derin kortikal tabakalar, büyük delik oluşumu Lezyonlu korteks, ya da altında veya üstünde beyaz cevher, hatalı kesim dramatik incelmesi, daha fazla deneyler için beyin kullanılamaz yapacak. <img src="/files/ftp_upload/2840/2840fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1. Alttan bir cihazın yapısı ve uygulama yol gösterici tüp (2), paslanmaz çelik ya da şeffaf plastik bir plaka (1) üzerine yapıştırılır . Bir şırınga (3) iğne ucu ~ 3 mm kılavuz tüp ve bükülmüş sokulur. Bir iğne, plastik tüp yapılmış durdurmak iğne iğne dikey hareket aralığı ~ 1.2 mm ve kullanım için sırasıyla P21 fare ve sıçanlarda ~ 1.5 mm ile sınırlıdır, böylece üst ucuna yapıştırılır. A segmentinde küçük bakır tel yönelim bükük iğne iğne göstergesi olarak kolu altında bağlanır. Not cihaz hareket ettirildiğinde ve kraniyal pencerede iki kenarı ile temas eden bir kesim pial yüzeyine paralel böylece. <img src="/files/ftp_upload/2840/2840fig2.jpg" alt="Şekil 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 2"> Şekil 2. Alttan dilim bir temsilcisi görüntü. P48 sıçan alttan lezyon iki hafta sonra hazırlanan bir dilim A. Floresan görüntü. Kesme yara, floresan boya DII etiketli oldu. Sağ tarafta beyaz oklar transkortikal kesim gösteren ve alt okları katmanlı IV ve beyaz madde arasındaki sınır rağmen geçti alttan göstermektedir. <img src="/files/ftp_upload/2840/2840fig3.jpg" alt="Şekil 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 3"> Şekil 3. Alan potansiyeli alttan alttan bir beyin dilim dilim Alan potansiyel kayıt kayıt yaralı kortikal doku hipereksitabilite düşündüren, epileptiform aktivite sergiledi.

<ol><li>Hoffman, S. N., Salin, P. A., Prince, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+neocortical+epileptogenesis+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Chronic neocortical epileptogenesis in vitro.</a> J Neurophysiol. 71, 1762-1773 (1994).</li>
<li>Topolnik, L., Steriade, M., Timofeev, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyperexcitability+of+intact+neurons+underlies+acute+development+of+trauma-related+electrographic+seizures+in+cats+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Hyperexcitability of intact neurons underlies acute development of trauma-related electrographic seizures in cats in vivo.</a> Eur J Neurosci. 18, 486-496 (2003).</li>
<li>Graber, K., Prince, D. A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGraber%2C+K+%22Models+of+Seizures+and+Epilepsy%22">Models of Seizures and Epilepsy</a>. , Elsevier. 477-493 (2005).</li>
<li>Nita, D. A., Cisse, Y., Timofeev, I., Steriade, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+propensity+to+seizures+after+chronic+cortical+deafferentation+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Increased propensity to seizures after chronic cortical deafferentation in vivo.</a> J Neurophysiol. 95, 902-913 (2006).</li>
<li>Sharpless, S. K., Halpern, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+electrical+excitability+of+chronically+isolated+cortex+studied+by+means+of+permanently+implanted+electrodes%5BTitle%5D)+AND+%22Electroencephalogr+Clin+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">The electrical excitability of chronically isolated cortex studied by means of permanently implanted electrodes.</a> Electroencephalogr Clin Neurophysiol. 14, 244-255 (1962).</li>
<li>Echlin, F. A., Battista, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epileptiform+Seizures+from+Chronic+Isolated+Cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Neurol%22%5BJournal%5D)">Epileptiform Seizures from Chronic Isolated Cortex.</a> Arch Neurol. 9, 154-170 (1963).</li>
<li>Prince, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epileptogenic+neurons+and+circuits%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Neurol%22%5BJournal%5D)">Epileptogenic neurons and circuits.</a> Adv Neurol. 79, 665-684 (1999).</li>
<li>Marin-Padilla, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+neuropathology+and+impact+of+perinatal+brain+damage.+II%3A+white+matter+lesions+of+the+neocortex%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuropathol+Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Developmental neuropathology and impact of perinatal brain damage. II: white matter lesions of the neocortex.</a> J Neuropathol Exp Neurol. 56, 219-235 (1997).</li>
<li>Jin, X., Prince, D. A., Huguenard, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+excitatory+synaptic+connectivity+in+layer+v+pyramidal+neurons+of+chronically+injured+epileptogenic+neocortex+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Enhanced excitatory synaptic connectivity in layer v pyramidal neurons of chronically injured epileptogenic neocortex in rats.</a> J Neurosci. 26, 4891-4900 (2006).</li>
<li>Li, H., Prince, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+activity+in+chronically+injured%2C+epileptogenic+sensory-motor+neocortex%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Synaptic activity in chronically injured, epileptogenic sensory-motor neocortex.</a> J Neurophysiol. 88, 2-12 (2002).</li>
<li>Salin, P., Tseng, G. F., Hoffman, S., Parada, I., Prince, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Axonal+sprouting+in+layer+V+pyramidal+neurons+of+chronically+injured+cerebral+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Axonal sprouting in layer V pyramidal neurons of chronically injured cerebral cortex.</a> J Neurosci. 15, 8234-8245 (1995).</li>
<li>Avramescu, S., Nita, D. A., Timofeev, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neocortical+post-traumatic+epileptogenesis+is+associated+with+loss+of+GABAergic+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Neocortical post-traumatic epileptogenesis is associated with loss of GABAergic neurons.</a> J Neurotrauma. 26, 799-812 (2009).</li>
<li>Avramescu, S., Timofeev, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+strength+modulation+after+cortical+trauma%3A+a+role+in+epileptogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Synaptic strength modulation after cortical trauma: a role in epileptogenesis.</a> J Neurosci. 28, 6760-6772 (2008).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Alttan model posttravmatik epileptogenezisin eğitimi için son derece etkili bir sistem. Tipik bir cerrahi bitirmek için sadece yaklaşık 20-30 dakika sürer ve uyarılmış veya cerrahi 1-2 iki hafta sonra spontan epileptiform aktivite çoğu hayvanlardan dilimleri kaydedilebilir. Daha da önemlisi, bu model, travmatik beyin hasarı, kanama, inflamasyon, ödem, axotomy ve nöronal ölüm 7 gibi aşağıdaki değişikliklerden yönlerini taklit eder. Kemirgenler ve diğer hayvanlardan sadece epileptiform aktivite gözle...

<table border="1"><tbody><tr><td> Malzeme Adı </td><td> Tip </td><td> Şirket </td><td> Katalog Numarası </td></tr><tr><td> Foredom mikromotor kiti </td><td> ekipman </td><td> Foredom </td><td> K.1070 </td></tr><tr><td> 1.5 inç 22-gauge enjektör iğnesi </td><td> malzeme </td><td> BD şirket </td><td> 305156 </td></tr><tr><td> 1.5 inç 25-gauge şırınga iğnesinin </td><td> malzeme </td><td> BD şirket </td><td> 305127 </td></tr><tr><td> Siyanoakrilat yapıştırıcı </td><td> malzeme </td><td> Ted Pella </td><td> 14450 </td></tr></tbody></table>

kemirgenler travma sonrası epileptogenezisin alt kesilme model hazırlanması

Preparing Undercut Model of Posttraumatic Epileptogenesis in Rodents

Kısmen izole korteks (&quot;alttan&quot;), travma sonrası epileptogenezisin bir hayvan modeli. Cerrahi işlem sensorimotor korteks ve serebral korteksin belirli bir bölgeye komşu korteks ve subkortikal bölgelerde 1-3 büyük ölçüde izole edilmiş, böylece beyaz madde (alttan) altında. Üzerinden kesme içerir. Epileptiform deşarjlar, ameliyatı takip eden iki hafta veya daha fazla bir gecikme sonra kemirgenler beyin dilimleri 1; ve elektrik veya davranış nöbet gibi kedi ve maymun 4-6 gibi diğer türler in vivo olarak görülebilir. Bu iyi kurulmuş bir hayvan modeli oluşturmak için etkili ve travmatik beyin hasarı birçok önemli özelliklerini taklit ederek. Ancak, teknik olarak ücretsiz bir el ile küçük kemirgen beyin hassas kortikal lezyonlar haline getirmeye çalışıyor zordur. Başlangıçta, Stanford Üniversitesi&#39;nden 1 Dr David Prince laboratuarda kurulan prosedürü dayanarak, burada fare ve sıçanlarda bu modelin hazırlanması için bir ameliyat gerçekleştirmek için geliştirilmiş bir teknik mevcut . Biz basit bir cerrahi cihaz ve daha kesin ve tutarlı sonuçlar üretmek için derinlik ve açı kesme daha iyi bir kontrol elde etmek için kullanmak için nasıl göstermektedir. Cihaz yapmak kolaydır ve prosedürü öğrenmek için hızlı. Bu hayvan modeli nesil posttravmatik epileptogenezisin mekanizmaları için verimli bir çalışma sistemi sağlar.

Kısmen izole korteks (&quot;alttan&quot;), travma sonrası epileptogenezisin verimli bir hayvan modeli. Burada nasıl bir roman cerrahi cihaz yapmak ve bu model oluşturmak için daha kesin ve tutarlı lezyonlar yapmak için kullanabilirsiniz göstermektedir.

Kemirgenler Travma Sonrası epileptogenezisin Alt kesilme Model hazırlanması

Kısmen izole edilmiş korteks ("undercut"), travma sonrası epileptogenezin bir hayvan modelidir. Cerrahi işlem, ... üzerinden kesme işlemini içerir.

Bu prosedür, sıçanlarda posttravmatik epileptogenez için bir undercut modeli nasıl hazırlanacağını gösterecektir. İlk adım, undercut cerrahisinin hassasiyetini ve tutarlılığını artıran basit bir düzenek hazırlamaktır. Ardından hayvan cerrahiye hazırlanır ve beyne erişim sağlamak için kafatası yüzeyinde bir kraniyal pencere açılır.Son olarak, undercut cihazının iğnesi serebral korteksin beyaz cevherine yerleştirilir ve hedef bölgede yelpaze şeklinde bir undercut oluşturmak için döndürülür. Nihayetinde, alan potansiyeli kaydı aracılığıyla beyin kesitlerinde epileptiform aktivite gösteren sonuçlar elde edilebilir. Bu tekniğin temel avantajı, basit ve özel yapım bir cerrahi cihazla daha hassas ve tutarlı kordon çarpışmasının gerçekleştirilebilmesidir.Bu hayvan modeli, travmatik beyin hasarı sonrası epileptogenezle ilgili temel soruları yanıtlamak için kullanılabilir. Bu model sıklıkla sıçanlarda kullanılsa da farelere de uygulanabilir. Genellikle bu yöntemde yeni olan kişiler, kemirgen korteksinde serbest el ile bu kadar hassas bir lezyon oluşturmanın zor olması nedeniyle güçlük çekerler.Cerrahi cihaz üç parçadan oluşmaktadır: bir destek plakası, bir kılavuz tüp ve ucuna yakın yerden 90 derece bükülmüş bir iğne. Üç ila dört haftalık sıçanlarda cerrahi için bir undercut cihazı hazırlamak için, önce 1 ila 1,5 milimetre kalınlığında, 7-10 x 30 milimetre boyutlarında dikdörtgen şeklinde paslanmaz çelik veya şeffaf plastikten bir parça kesin. Destek plakasını yapmak için 25 gauge ve 22 gauge şırınga iğnesi alın ve 25 gauge iğnenin uzunluğunu ölçün.Ardından, 22 gauge iğnenin plastik ucunu kesin, iğne işaretinin toplam uzunluğunu ölçün ve kılavuz tüpün son uzunluğu 25 gauge şırınga iğnesinden yaklaşık beş ila altı milimetre daha kısa olacak şekilde 22 gauge iğneyi uygun bir noktadan kesin. Ucunu düzleştirmek ve pürüzsüz hale getirmek için zımparalayın. Kılavuz tüpü destek plakasına sabitlemek için siyanoakrilat yapıştırıcı kullanın; bu sırada iğnenin destek plakasının kenarına dik ve hizalı olduğundan emin olun.25 gauge şırınga iğnesini kılavuz tüpe yerleştirin ve iğneyi ucundan 2,5 ila 3 mm uzaklıktan 90 derece bükün. Son olarak, iğnenin üst ucuna, bükülmüş uçla aynı yöne bakacak şekilde küçük bir bakır tel veya küçük bir bant parçası tutturun.Tel veya bant, undercut cerrahisi sırasında iğnenin dönme açısını belirtir. Bu prosedüre başlamadan önce, aşağıdaki işlemler için gerekli onayı almak amacıyla kurumsal hayvan bakım komitesine danışın. İlk olarak, tüm cerrahi aletlerin onaylanmış bir yöntemle sterilize edildiğinden ve cerrahi işlem için steril bir alanın hazır olduğundan emin olun.Onaylanmış protokole uygun olarak hayvanı anestezi altına alın, kuyruk sıkıştırma testi yaparak hayvanın tamamen anestezi altında olduğundan emin olun. Kesi yapılacak bölgenin çevresindeki kafa derisini tıraş etmek için elektrikli bir düzeltici kullanın. Ardından kafa derisini %10 povidon iyot çözeltisi ve ardından %70 Ethanol kullanarak dezenfekte edin.Kurumasını önlemek için hayvanın gözlerini oftalmik pomad ile kaplayın. Cerrahi işlem sırasında, başı sabit ve stabil bir pozisyonda tutmak için hayvanı stereotaksik bir düzeneğe monte edin. Hipotermiyi önlemek için hayvanı bir ısıtıcı ped üzerinde tutmanız en iyisidir.Bir bistüri kullanarak, kafa derisinde Lambda'dan iki göz arasına kadar uzanan bir orta hat anterior posterior insizyon yapın. Ardından, cildi kenara çekmek ve kafatasının sol tarafını yeterince açığa çıkarmak için hemostatlar kullanın. Kafatasının sol tarafında dikdörtgen bir kesi yapmak ve periostumu kazımak için bistüriyi kullanın.Bu adım, kanamayı azaltacak ve kafatası üzerindeki delme işlemini kolaylaştıracaktır. Öncelikle, kanı temizlemek ve bölgeyi kurutmak için steril salin ve birkaç pamuklu çubuk kullanarak kafatasını temizleyin. Ardından, kafatasının sol tarafının merkezine bir damla steril salin uygulayın.Ardından, kafatasının sol tarafının merkezinde dört çarpı beş milimetrelik dikdörtgen bir oluk oluşturmak için delmeye başlayın. Kemik derinliğinin yaklaşık üçte ikisi delindikten sonra, fazla salini uzaklaştırın ve delinen bölgeyi bir kulak çubuğu ile temizleyin. Merkezi kemik parçası, forsepsle hafifçe dokunulduğunda hareket edebilir hale gelene kadar yavaşça ve dikkatlice daha derine doğru delmeye devam edin.Undercut cihazını tutarken, kemik parçasını pensle nazikçe kavrayıp kemik penceresini yavaşça kaldırarak sol hemisferi açığa çıkarın ve merkezdeki kemik parçasını dikkatlice uzaklaştırın. İğneyi parasajital yönde, destek plakasını ise orta hatta dik olacak şekilde konumlandırın. Büyük kan damarlarından kaçınarak, iğne ucunu kranial pencerenin ortasında, süperior sagital sütürün bir ila iki milimetre lateraline yöneltin.Ardından, iğneyi dura boyunca ve pier'in altından yatay yönde yerleştirin. Kan damarlarını korumak için, iğnenin kortikal yüzeye dik konumlandığından emin olacak şekilde alt kesim cihazının tabanını kraniyal pencerenin her iki kenarına oturtun. İğneyi hafifçe kaldırarak pier'in altında olduğundan emin olun.Ardından, iğne daha fazla ilerleyemeyene kadar transkortikal bir kesi oluşturmak için iğneyi yavaşça indirin. Sonra, beyaz cevher derin altıncı tabakada yarım daire şeklinde bir alt kesi oluşturmak için iğneyi orta hattan uzağa doğru 180 derece döndürün. Son olarak, iğne delme noktasının altına gelene kadar iğneyi tekrar kaldırın.Ardından, undercut cihazını geriye doğru eğin ve iğneyi geri çekin. Koruma amacıyla kraniyal pencerenin üzerine bir parça plastik film yerleştirin. Daha sonra hemostatlari çözün, gerekirse kafa derisini steril salin ile nemlendirin ve eski konumuna getirin.Kesi yerini sütürlerle kapatın. Ardından hayvanı stereotaksik aparattan çıkarın ve anestezi etkisinden çıkana kadar bir ısıtma pedinin üzerine yerleştirin. Hayvanı kendi kafesine geri döndürdükten sonra, ilgili IA iacuc protokolünde tanımlandığı şekilde analjezi takibini yapmaya özen gösterin.Burada, undercut cerrahisinin başarısını değerlendirmek için prosedürden iki hafta sonra koronal kortikal kesitler hazırlanmıştır. Mikroskobun düşük güçlü objektifi altında transkortikal ve undercut insizyonları seçilebilmektedir. Bu alan potansiyeli kaydı, kısmen izole edilmiş kortekste uyarılmış leptiform aktiviteyi ortaya çıkarmaktadır.Bu teknikte uzmanlaşıldığında, doğru şekilde uygulandığı takdirde işlem yaklaşık 30 dakikada tamamlanabilir. Bu prosedürü denerken, cerrahi işlemden önce cerrahi cihazın kullanımına dair pratik yapmanın önemli olduğunu unutmamak gerekir. Bu videoyu izledikten sonra, kemirgenlerde post-travmatik epileptogenezin kesilmemiş modelinin nasıl hazırlanacağı konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.

preparing-undercut-model-of-posttraumatic-epileptogenesis-in-rodents

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Bu video, epilepsiye bağlı sıçanlarda epileptik nöbetlerin elektroensefalografik (EEG) kaydını göstermektedir. Ventral hipokampusa implante edilen elektrotlu bir sıçan, EEG kayıt sistemine bağlanır ve bir pleksiglas odaya yerleştirilir. Nöbet oluşumunu izlemek için beyin aktivitesi kaydedilirken sıçanın serbestçe hareket etmesine izin verilir.

Epilepsiye Bağlı Sıçanlarda Epileptik Nöbetlerin Elektroensefalografik Kaydı

Kaynak: Jang, S., et al, Postsinaptik Yoğunluk Proteinlerinde Nöbet Kaynaklı Değişiklikleri İncelemek İçin Sıçanlarda Elektrokonvülsif Nöbetler ve Hipokampuslarının Fraksiyonlanması. J. Vis. Uzm. (2017)Bu video, nöbetin neden olduğu nöroplastisiteyi incelemek için bir sıçan modelinde akut elektrokonvülsif nöbetin (ECS) indüksiyonunu göstermektedir. Araştırmacılar, kulak klipsi elektrotları aracılığıyla elektriksel stimülasyon uygulayarak nöronal hipereksitabiliteyi ve klonusu tetikler. Bu...

Bir sıçan modelinde akut elektrokonvülsif nöbetin indüklenmesi

Burada, insan hastalığının yenidoğan kemirgen modellerinde elektroensefalogram (EEG) için kablosuz bir etkinleştirme teknolojisinin kullanımını gösteriyoruz. Telemetri ile, engelleyici bağlantılar yoktur, bu nedenle doğal davranışlara izin verir.

Epoch Kablosuz Verici Sisteminin Kullanılması İnsan Hastalığı Küçük Kemirgen Modelleri Uzun süreli Sürekli EEG İzleme

Bu video, noninvaziv koşullar altında belirli bir preklinik fokal epilepsi modeli ile sedasyonlu sıçanlarda yüksek çözünürlüklü EEG'nin hazırlanma, kayıt ve kaynak analizi prosedürlerini tanıtmaktadır.

Yüksek Çözünürlüklü EEG Kayıtlar kullanarak Odak Epilepsi Preklinik Rat Modelleri Beyin Kaynak Görüntüleme

Bu iletişim kuralı ile pentylenetetrazole kimyasal çıra yöntemi açıklar ve epilepsi bir fare modeli sağlar. Bu iletişim kuralı, farelerde epileptik nöbetler sonra nöbet indüksiyon ve Escherichia türleri için güvenlik açığı araştırmak için de kullanılabilir.

Pentylenetetrazole kaynaklı çıra fare modeli

Akut kriz modelleri epileptiform olaylar altında yatan mekanizmaları eğitim için önemlidir. Ayrıca, epileptiform olaylar üstünde-istek oluşturma yeteneği kendi başlatma altında yatan olay tam sırası çalışmaya son derece verimli bir yöntem sağlar. Burada, fare ve insan dokusu içinde kurulan akut 4-aminopyridine kortikal nöbet modelleri açıklar.

Akut Ictal faaliyet kemirgen ve insan dokusu üretimi ve isteğe bağlı başlatma

Bu sistematik protokol tekrarlayan hafif travmatik beyin hasarı sonrası travma sonrası epilepsi yeni bir hayvan modeli açıklar. İlk bölüm değiştirilmiş bir kilo damla modeli kullanarak travmatik beyin hasarı indüksiyon için adımlar ayrıntıları. İkinci bölümde tek ve çok kanallı elektroensefalografik veri toplama sistemleri için cerrahi yaklaşım hakkında talimatlar verilmektedir.

Tekrarlayan Diffüz Travmatik Beyin Hasarının Fare Modelinde Travma Sonrası Epilepsi Nin İndüklemesi

Burada, renal korteks-hipokampus organotipik dilimlerin hazırlanmasını anlatıyoruz. Serumun kademeli ve kontrollü yoksunluğu altında, bu dilimler gelişen epileptik benzeri olayları tasvir eder ve epileptogenezin ex vivo modeli olarak kabul edilebilir. Bu sistem, spontan aktivitenin dinamiklerini izlemek ve epileptogenez boyunca nöroinflamatuar özelliklerin ilerlemesini değerlendirmek için mükemmel bir aracı temsil eder.

Renal Korteks-Hipokampus Organotipik Dilim Kültürlerinde Epileptogenez Modeli

Bu yazıda, transgenik VGAT-Cre farelerinin elektriksel çıralarına dayanan temporal lob epilepsi modeli oluşturma yöntemleri açıklanmaktadır. Kindled VGAT-Cre fareleri, epilepsiye neyin neden olduğunu belirlemede ve yeni tedavileri taramada yararlı olabilir.

Temporal lob epilepsisi için bir model oluşturmak üzere elektriksel olarak çırılan VGAT-Cre fareleri için elektrotların hazırlanması ve implantasyonu

C57BL / 6 farelerde Theiler'in murin ensefalomiyelit virüsü (TMEV) ile intraserebral enfeksiyon, insan hastalarda viral ensefalitin ve müteakip epilepsinin erken ve kronik klinik semptomlarının çoğunu çoğaltır. Bu yazıda TMEV modelinin virüs enfeksiyonu, semptomları ve histopatolojisi anlatılmaktadır.

Theiler's Murine Encephalomyelitis Virus Kullanarak Enfeksiyöz Etiyolojinin Epilepsisi İçin Bir Model

Amigdala, bu yapıdan kaynaklanan ve yayılan temporal lob epilepsisinde önemli bir rol oynar. Bu makale, hem kayıt hem de uyarıcı işlevlere sahip derin beyin elektrotlarının üretiminin ayrıntılı bir açıklamasını sunmaktadır. Amigdala kaynaklı medial temporal lob epilepsisinin bir modelini sunar.

Amigdala'nın Elektriksel Çırası ile Temporal Lob Epilepsi Fare Modeli Oluşturmak için Bipolar Elektrot Kullanma

Öğrenin, sıçanlarda travma sonrası epileptogenez için alt kesilme modeli hazırlama yöntemini. Özel cerrahi cihaz kullanılarak beyin lezyonları daha hassas ve tutarlı şekilde oluşturulur.

Kemirgenler Travma Sonrası epileptogenezisin Alt kesilme Model hazırlanması

Daha fazla video keşfet