Name: Çekal ligasyon Delinme Prosedürü (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-05-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 53 s
Description: Öğrenin, C57BL/6 farelerde çekal ligasyon delinme prosedürü ile sepsis modeli kurmayı. Bu yöntem, polimikrobiyal sepsisi taklit ederek bağışıklık yanıtı ve organ hasarını araştırmada değerli veriler sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, Pennsylvania Sağlık Bakanlığı bir hibe ile desteklenmiştir. Dr. Miguel Garcia Toscano Alfonso Martin Escudero Vakfı tarafından finanse edilen bu çalışma sırasında Temple Üniversitesi&#39;nde bir doktora sonrası Üyesi oldu. Biz Iliya Yordanov ve Kevin Kotredes video yapmak için teşekkür etmek istiyorum.

1. İnsan Sepsis Fare Modeli çekal ligasyon ve Delinme Bu yordamı C57BL / 6 farelerinde (eski 7-9 hafta) kullanılır. <ol><li> Intraperitoneal 01:01 ketamin (75mg/kg) ve ksilizin (15mg/kg) bir çözüm enjekte fare anestezisi. Bir referans olarak, 20 gram ağırlığında bir fare 1:1 çözüm 30 ul enjekte edilir. Alternatif olarak, fare, bir anestezik vaporizatör kullanılarak inhale izofluran ile anestezi olabilir. </li><li> Fare karın Tıraş ve% 70 alkol sürüntü (aşağıdaki resim dizisi 1 numara) ile silerek ilk uygulayarak betadin çözüm alanı dezenfekte. Klorheksidin alternatif bir antiseptik olarak kullanılabilir. İsteğe Bağlı: alanını temiz steril bir örtüyü korumak için kullanılıyor olabilir. </li><li> Aseptik koşullar altında, 1 ila 2 cm orta hat laparotomi uygulama ve bitişik bağırsak (2 ve 3) ile çekum maruz. </li><li> 6.0 ipek sütür (6-0 prolen, 8680G; Ethicon) ile çekum sıkıca bağlandı, bağırsak-çekal kapak altında baz ve aynı delikli bir veya iki kez bir 19-gauge iğne (4 ve 5) çekum tarafında. Çekum ligasyonu noktası distal ucu mesafe olarak tanımlanan bağlanan çekum uzunluğu şiddetinin derecesini belirlemek olacağını lütfen unutmayınız. &gt; 1cm mesafe yüksek dereceli sepsis ≤ 1 cm mesafe, orta-düşük dereceli sepsis üretir üretir. Ayrıca, burada gösterilen çekum perforasyonu yöntemi kullanarak ve ponksiyon tekniği ile (çekum bir iğne tanıtan) ile standart farklı olduğunu unutmayın. Her iki yöntem de aynı sepsis sonucu güvenilir bir şekilde üretirler. Ancak, bir dezavantajı yoluyla yoluyla tekniği çekum sıkılmış ekstrüde dışkı miktarı kontrol kolaylaştırmakla kalmaz ki. </li><li> Çekum perforasyonu siteleri (6), küçük bir miktarda dışkı a'ya yavaşça sıkılmış. Çekum periton boşluğuna geri döndü ve periton 6.0 ipek dikişlerle kapatılır. (7). </li><li> Cilt Refleks 7mm klipleri (RS-9258, Roboz Cerrahi Aletler) ya da Michel yara klipleri (7 mm, RS-9270) (8) ile kapatılır. </li><li> Subkutan 1 ml 25G iğne kullanılarak, önceden ısıtılmış% 0.9 salin solüsyonu enjekte edilerek farelerin Resüsite. Bu sıvı resüsitasyon önlemi sepsis hiperdinamik aşaması neden olacaktır. Bu kritik adım daha fazla tartışma bölümünde açıklanmıştır. </li><li> İsteğe bağlı: subkutan enjekte buprenorfin (0.05mg / kg vücut ağırlığı) ya da ameliyat sonrası analjezi için tramadol (20mg/kg vücut ağırlığı). Bu opiatlar solunum ve hareket bastırmak için tavsiye edilebilir ve bu etkiler, sepsis belirtileri olarak yanlış yorumlanabilir. </li><li> Hayvanların geçici olarak yerleştirilen bir ısıtma yastığı veya anestezi kurtarmak kadar alternatif bir kızılötesi ısıtma 150W lamba pozlama ile bir kafes hemen döndü. Iyileşme süresi 1 saat 30 dk. </li><li> Kafesin altına yerleştirilen yiyecek ve su (hidrojel) ücretsiz erişim sağlayın. </li><li> Fare, 1-2 hafta boyunca hayatta kalmak için her 12 saat denetim altında tutulan ya da farklı zaman noktalarında farklı parametrelerin analizi için ötenazi vardır. </li></ol> Deneysel tasarım için kontrol olarak, sahte hayvanlar ligasyonu ve delinme olmadan laparotomi tekniği takip edecek. Altı ila 12 saat sonra cerrahi işlem fareler uyuşuk olmak ve ateş, piloerection, ishal huddling, ve halsizlik gelişir; sepsis belirtileri. Çok ağır sepsis Fare ancak ölüm öncesinde hareket ve vücut ısısı dramatik bir azalma gösterirler. Bu adım fareler uzun süreli ağrı ve acı önlemek için ötenazi olmalı. <img src="/files/ftp_upload/2860/2860fig0.jpg" alt="Şekil 0" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 0"> 2. En Yaygın Analiz Parametreleri Prosedürünün sonuçlarını değerlendirmek için farklı parametreler, organların, hücre özleri veya vücut sıvıları analiz edilebilir. Örnekleri cerrahi işlem bir hafta sonra 3 saat kadar farklı zaman noktalarında toplanabilir. <ol><li> Fareler hayatta kalma. </li><li> Serum, peritoneal kavite ve organ özleri Sitokinler ve kemokinler. <ol><li> İnterlökin-6: monositler, dendritik hücreler, makrofajlar, B hücreleri, T hücreleri, granülositler, mast hücreleri ve daha birçok hücre tipleri tarafından üretilen ve piyasaya. Bu akut faz reaksiyonu ve inflamasyon önemli bir rol oynar. </li><li> Tümör nekroz faktörü-α: pleiotrofik sitokin inflamasyon ve apoptosis merkezi bir rol oynar. , Monositler, makrofajlar, nötrofiller, dendritik hücreler ve fibroblastlar tarafından üretilir. </li><li> nterleukin-1β: monositler, NK hücreleri, dendritik hücreler, B hücreleri ve T hücreleri tarafından üretilir. Ateş ve akut faz protein sentezini indükler. </li><li> İnterlökin 10: fagositik alımı ve Th2 yanıtları teşvik ama antig bastırırtr sunum ve Th1 proinflamatuvar yanıtları. </li><li> İnterlökin 10: fagositik alımı ve Th2 yanıtları teşvik ama antijen sunumu ve Th1 proinflamatuvar yanıtları bastırır. </li><li> Monosit kemotaktik protein-1 (CCL2 olarak da bilinir): Acemi monositler, bellek T hücreleri ve doku hasarı ve enfeksiyon sitelerine dendritik hücreler . </li><li> KC (CXCL1): makrofaj ve endotel hücreleri tarafından üretilir. Fare KC güçlü bir nötrofil cezbedici ve aktivatör. </li><li> RANTES: monosit kemoatraktan. Unstimulated CD4 chemoattract + / CD45RO + bellek T hücreleri ve uyarılmış CD4 + ve na ve ve hafıza fenotipleri ile CD8 + T hücreleri. </li><li> İnterferon-γ: Th1 hücreleri, sitotoksik T hücreleri, dendritik hücreler ve doğal öldürücü (NK) hücreleri tarafından salgılanan. Antijen sunumu ve makrofajlarda litik aktivite artırır ve Th2 hücre aktivitesi bastırır. Yapışma ve bağlama lökosit göçü için gerekli teşvik ve NK hücre aktivitesini destekler. </li><li> Yüksek hareketliliği grubu B-1 proteininin: monositler bir nükleer faktör kappa B aktivatörü, sepsis geç fazda proinflamatuar mediatörlerin salınımını aktive, önceden glikasyon ürünleri (RAGE) hücresel reseptör bağlayıcı . </li></ol></li><li> Nötrofil infiltrasyonu bir önlem olarak organlarda miyeloperoksidaz belirlenmesi. Miyeloperoksidaz (MPO), peroksidaz enzim nötrofil granülositler en bol miktarda mevcut. Nötrofil azurophilic granül saklanan bir lizozomal protein. MPO, irin ve mukus bazı formları gibi nötrofillerin zengin salgıları, yeşil renk neden olan bir pigment, hem vardır. </li><li> Bakteri sayısı mililitrede koloni oluşturan birimler olarak, organ ve kan akışı ölçmek yük. </li></ol> 3. Temsilcisi Sonuçlar CLP prosedürü başlangıçta C57BL / 6 fare zorlanma yapıldı. Şekil 1 ve 2'de gösterildiği gibi, iğne ligasyonu ve kalınlığı uzunluğu değiştirerek sepsis şiddetini modüle çeşitli parametrelere test etti . Ligasyonu uzunluğu, bu iki faktör arasında, yüzde hayatta değiştirmek için iğne kalınlığında daha etkili gibi görünmektedir. ≤ 1cm ligasyonu sahip fareler ile karşılaştırıldığında,% 100 mortalite fazla 1cm ligasyonu uzunluğu artan bir artış, Şekil 1'de kışkırtır gösterilmiştir . Iğne kalınlığının arttırılması da iki delikler ile% 55 (19G iğne ile),% 100 (22G iğne kullanılarak) yüzde hayatta kalma azaldı. Ayrıca, farklı fare suşları CLP-kaynaklı sepsis, benzer veya farklı duyarlılık gösterilecek olup olmadığını belirlemek için C57BL / 6 ve 129SvJ fareler üzerinde CLP etkisi test edilmiştir. Şekil 3'te görüldüğü aynı koşullar altında, yüzde bir artış ölüm ile gösterilir C57BL / 6, daha 129SvJ farelerin enfeksiyona karşı daha duyarlı olduğunu. <img src="/files/ftp_upload/2860/2860fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1. C57BL / 6 farelerin iki farklı boyda çekal ligasyon kullanarak hayvanın hayatta kalma çekum ligasyonu uzunluğu etkisi CLP yapıldı. Bu tek parametre 1 cm yaklaşık bir ligasyonu alana sahip bir hayvan grubu ile kıyaslandığında en az 3 gün içinde öldü 1 cm'den daha uzun bir ligasyonu alana sahip gruptaki hayvanların tüm bu yana dramatik bir hayvan hayatta kalma etkiler. (N = 8). <img src="/files/ftp_upload/2860/2860fig2.jpg" alt="Şekil 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 2"> Şekil 2. C57BL / 6 fareler kullanarak iki farklı iğnelerin, 19G ve 22G iğne kalınlığında sağkalım üzerine etkisi. CLP yapıldı. 19G iğne ile perfore çekum Fareler sağkalımı% 55-60 gösterdi. Buna karşılık, ilk 3-4 gün boyunca inflamasyon tipik belirtileri deneyimli olmasına rağmen, 22G iğne ile perfore çekum ile farelerin% 100 hayatta kalma gösterdi; (n = 8) 4 gün sonra kayboldu. <img src="/files/ftp_upload/2860/2860fig3.jpg" alt="Şekil 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 3"> Şekil 3. Iki farklı fare suşları arasında sepsis duyarlılık karşılaştırılması. CLP modeli, aynı koşullar altında 129SvJ ve C57BL / 6 yapıldı . 129SvJ suşu değerlendirme süresi sonunda yüzde sağkalım polimikrobiyal enfeksiyon tarafından indüklenen inflamasyon daha yüksek bir duyarlılık gösteren C57BL / 6 zorlanma göre% 25 daha az idi. (N = 6).

<ol><li>Angus, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+of+severe+sepsis+in+the+United+States%3A+analysis+of+incidence%2C+outcome%2C+and+associated+costs+of+care%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Epidemiology of severe sepsis in the United States: analysis of incidence, outcome, and associated costs of care.</a> Crit Care Med. 29, 1303-1310 (2001).</li>
<li>Riedemann, N. C., Guo, R. F., Ward, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+enigma+of+sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">The enigma of sepsis.</a> J Clin Invest. 112, 460-467 (2003).</li>
<li>Eichacker, P. Q., Gerstenberger, E. P., Banks, S. M., Cui, X., Natanson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Meta-analysis+of+acute+lung+injury+and+acute+respiratory+distress+syndrome+trials+testing+low+tidal+volumes%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Meta-analysis of acute lung injury and acute respiratory distress syndrome trials testing low tidal volumes.</a> Am J Respir Crit Care Med. 166, 1510-1514 (2002).</li>
<li>Buras, J. A., Holzmann, B., Sitkovsky, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+sepsis%3A+setting+the+stage%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">Animal models of sepsis: setting the stage.</a> Nat Rev Drug Discov. 4, 854-865 (2005).</li>
<li>Doi, K., Leelahavanichkul, A., Yuen, P. S., Star, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+sepsis+and+sepsis-induced+kidney+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Animal models of sepsis and sepsis-induced kidney injury.</a> J Clin Invest. 119, 2868-2878 (2009).</li>
<li>Godshall, C. J., Scott, M. J., Peyton, J. C., Gardner, S. A., Cheadle, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+background+determines+susceptibility+during+murine+septic+peritonitis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Genetic background determines susceptibility during murine septic peritonitis.</a> J Surg Res. 102, 45-49 (2002).</li>
<li>De Maio, A., Torres, M. B., Reeves, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+determinants+influencing+the+response+to+injury%2C+inflammation%2C+and+sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22Shock%22%5BJournal%5D)">Genetic determinants influencing the response to injury, inflammation, and sepsis.</a> Shock. 23, 11-17 (2005).</li>
<li>Diodato, M. D., Knoferl, M. W., Schwacha, M. G., Bland, K. I., Chaudry, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gender+differences+in+the+inflammatory+response+and+survival+following+haemorrhage+and+subsequent+sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22Cytokine%22%5BJournal%5D)">Gender differences in the inflammatory response and survival following haemorrhage and subsequent sepsis.</a> Cytokine. 14, 162-169 (2001).</li>
<li>Turnbull, I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+age+on+mortality+and+antibiotic+efficacy+in+cecal+ligation+and+puncture%5BTitle%5D)+AND+%22Shock%22%5BJournal%5D)">Effects of age on mortality and antibiotic efficacy in cecal ligation and puncture.</a> Shock. 19, 310-313 (2003).</li>
<li>Miyaji, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ethyl+pyruvate+decreases+sepsis-induced+acute+renal+failure+and+multiple+organ+damage+in+aged+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">Ethyl pyruvate decreases sepsis-induced acute renal failure and multiple organ damage in aged mice.</a> Kidney Int. 64, 1620-1631 (2003).</li>
<li>Torres, M. B., De Maio, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+exaggerated+inflammatory+response+after+CLP+correlates+with+a+negative+outcome%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">An exaggerated inflammatory response after CLP correlates with a negative outcome.</a> J Surg Res. 125, 88-93 (2005).</li>
<li>Doi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AP214%2C+an+analogue+of+alpha-melanocyte-stimulating+hormone%2C+ameliorates+sepsis-induced+acute+kidney+injury+and+mortality%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">AP214, an analogue of alpha-melanocyte-stimulating hormone, ameliorates sepsis-induced acute kidney injury and mortality.</a> Kidney Int. 73, 1266-1274 (2008).</li>
<li>Wilson, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluid+resuscitation+attenuates+early+cytokine+mRNA+expression+after+peritonitis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Trauma%22%5BJournal%5D)">Fluid resuscitation attenuates early cytokine mRNA expression after peritonitis.</a> J Trauma. 41, 622-627 (1996).</li>
<li>Zanotti-Cavazzoni, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluid+resuscitation+influences+cardiovascular+performance+and+mortality+in+a+murine+model+of+sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22Intensive+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Fluid resuscitation influences cardiovascular performance and mortality in a murine model of sepsis.</a> Intensive Care Med. 35, 748-754 (2009).</li>
<li>Hugunin, K. M., Fry, C., Shuster, K., Nemzek, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+tramadol+and+buprenorphine+on+select+immunologic+factors+in+a+cecal+ligation+and+puncture+model%5BTitle%5D)+AND+%22Shock%22%5BJournal%5D)">Effects of tramadol and buprenorphine on select immunologic factors in a cecal ligation and puncture model.</a> Shock. 34, 250-260 (2010).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.<br /&gt; Hayvan deneyleri Ulusal Enstitüsü Laboratuvar Hayvanları Bakım ve Kullanım Sağlık Rehberi uyarınca yapılır ve Temple Üniversitesi hayvan bakımı ve kullanımı komitesi tarafından kabul edildi.

Burada farelerde CLP modeli nasıl gerçekleştirmek için ayrıntılı göstermek ve şiddetinin derecesi modüle. Sepsis diğer hayvan modelleri ile karşılaştırıldığında, CLP, farklı yaş ve cinsiyet herhangi bir fare zorlanma yapılabilir. Bu nispeten kolay ve ucuz bir cerrahi işlemdir. Bu modelde, şiddet derecesi hayatta kalma oranı üzerinde doğrudan bir etkisi vardır. Ligasyonu uzunluğu, iğne kalınlığı ve delikler sayısı, şiddeti CLP mortalite / modüle kontrol edilebilir parametreler. Sonuç olarak, ...

<table border="1"><tbody><tr><th> Reaktifin Adı </th><th> Şirket </th><th> Katalog numarası </th><th> Yorumlar </th></tr><tr><td> Ketamin </td><td> Ketaset </td><td> 0856-2013-01 </td><td></td></tr><tr><td> Xylazine </td><td> AnaSed </td><td> ADA # 139-236 </td><td></td></tr><tr><td> İnsülin şırınga 29G </td><td> Exel </td><td> 26028 </td><td></td></tr><tr><td> İpek sütür, 6-0 prolen </td><td> Ethicon </td><td> 8680G </td><td></td></tr><tr><td> 19G ve 25G İğne </td><td> BD </td><td> 305186 </td><td></td></tr><tr><td> Tıraş makinesi </td><td> Genel kaynağı </td><td> Genel kaynağı </td><td></td></tr><tr><td> Kızılötesi Isıtma lamba </td><td> Genel kaynağı </td><td> Genel kaynağı </td><td></td></tr><tr><td> Michel klipleri 7mm yara </td><td> Roboz Cerrahi Instr </td><td> RS-9270 </td><td></td></tr><tr><td> Kulak Döngü Maske </td><td> Fisher Scientific </td><td> 19-130-4181 </td><td></td></tr><tr><td> Diseksiyon makası </td><td> Roboz Cerrahi Instr </td><td> RS-6702 </td><td></td></tr><tr><td> Betadine çözüm </td><td> VWR </td><td> 63410-992 </td><td></td></tr><tr><td> Cerrahi forseps </td><td> Roboz Cerrahi Instr </td><td> RS-5135 </td><td></td></tr><tr><td> % 70 izopropil alkol pedi </td><td> Fisher Scientific </td><td> 22-031-350 </td><td></td></tr><tr><td> Buprenorfin </td><td> Bedford Labs </td><td> 55390-100-10 </td><td></td></tr><tr><td> Tramadol </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 42965 </td><td></td></tr></tbody></table>

Çekal ligasyon delinme prosedürü

Cecal Ligation Puncture Procedure

İnsan sepsis, yanıt olarak, yerel ev sahibi tarafından yer olmak için başarısız yoğun ve şiddetli enfeksiyon sistemik reaksiyonlar bir dizi ile karakterizedir. Şu anda, ABD&#39;de yoğun bakım ünitelerinde 1 ilk on ölüm nedenleri arasında sepsis sırada yer alıyor. Sepsis sırasında çakışabilir iki kurulan hemodinamik evreleri vardır. İlk faz (hiperdinamik), makrofaj ve nötrofiller damar geçirgenliği (hipotansiyon), kalp fonksiyonu etkiler ve doku nekrozu ve organ yetmezliği ile sonuçlanan metabolik değişiklikler oluşturur proinflamatuvar sitokinler ve reaktif oksijen türlerinin büyük bir üretim olarak tanımlanır. Sonuç olarak, en yaygın ölüm nedeni akut böbrek hasarı. Ikinci aşaması (hypodynamic) değişmiş monosit antijen sunumu içeren bir anti-enflamatuar süreç, lenfosit proliferasyonu ve fonksiyon ve artan apoptozis azalmıştır. Immünosupresyon veya immün depresyon olarak bilinen bu devlet keskin nocosomial enfeksiyonları ve sonuçta, ölüm riskini artırır. Bu patofizyolojik süreçlerin mekanizmaları iyi karakterize değildir. Sepsis her aşamasında geri dönüşü olmayan ve telafisi mümkün olmayan hasara neden olabileceğinden, hastanın immünolojik ve fizyolojik durumunu belirlemek için esastır. Bu, pek çok tedavi edici ilaçların neden başarısız oldu ana sebebidir. Sepsis farklı aşamalarında verilen aynı ilaç tedavi ya da başka zararlı veya etkisi 2,3 hiçbir çeşitli düzeylerde sepsis anlamak için hastalığın klinik seyri üretir uygun ve kapsamlı hayvan modeli için çok önemlidir. Sepsis sırasında meydana gelen patofizyolojik mekanizmalar karakterize ve potansiyel terapötik ajanlar test etmek için model koşulları kontrol etmek için önemlidir. Insan sepsis araştırmacıların etiyolojisi araştırmak için farklı hayvan modelleri geliştirdik. En yaygın olarak kullanılan klinik modeli çekal ligasyon ve ponksiyon (CLP). CLP modeli periton boşluğuna fekal madde salınımını polimikrobiyal enfeksiyon tarafından uyarılan bir şiddetlenir bağışıklık yanıtı oluşturmak için izin çekum perforasyonu oluşur. Bu model, klinik olarak anlamlı olan insan bir koşulu yerine getirmektedir. İnsanlarda olduğu gibi, sıvı resüsitasyon CLP geçiren fareler zaman içinde ikinci (geç) hypodynamic aşaması ilerledikçe ilk (erken) hiperdinamik faz göstermektedir. Buna ek olarak, sitokin profili insan sepsis lenfosit apoptozis (gözden 4,5) artmış olduğu görülen benzer. Sepsis dahil birden fazla ve üst üste mekanizmaları nedeniyle, araştırmacılar, tutarlı ve tekrarlanabilir sonuçlar elde etmek için kontrollü şiddeti uygun bir sepsis modeli gerekir.

Çekal ligasyon ve ponksiyon insan sepsis çalışma için değerli bir araç olarak fare modeli.

Çekal ligasyon Delinme Prosedürü

İnsan sepsisi, yerel olarak kontrol altına alınamayan yoğun ve kitlesel enfeksiyona yanıt olarak gelişen bir dizi sistemik reaksiyon ile karakterize edilir...

Merhaba, ben Temple Üniversitesi Mikrobiyoloji ve Hemoloji bölümündeki Dr. Dena'nın laboratuvarından Miguel Toscano. Bugün size C 57 Black 6 fare suşunda iCal ligasyon ve punksiyon modelinin nasıl kurulacağını göstereceğiz. Laboratuvarımızda insan sepsisini taklit etmek için bu modeli kullanıyoruz.Temel olarak bu model, fekal materyalin polimikrobiyal sepsis oluşturmak amacıyla periton boşluğuna salınmasına izin veren bir serum delinmesinden oluşur ve böylece abartılı bir bağışıklık yanıtı meydana getirir. Bu modelde, birçok organ ve farklı hücre tipleri geri döndürülemez şekilde hasar görür. Bu durum, sonuç olarak hayvanın ölümüne neden olabilir.Hadi başlayalım. Fareyi anestezi etme. İlk adım, intraperitonal enjeksiyon yaparak hayvanı anestezi etmektir.Ketamin ve ksilazin'den eşit oranda hazırlanmış bir karışım. Fare tarafından ısırılmayı önlemek ve ona zarar vermemek için, fareyi bir elle kuyruğundan tutmalıyız. Diğer elle ise sırtını zemine doğru bastırırız.Ardından fareyi başının arkasından tutabilir ve karnını açığa çıkarmak için hayvanı sırt üstü çevirebiliriz. 29 gauge'lik bir insülin şırıngası ile periton boşluğuna 20 ila 30 µL anestezi enjekte ediyoruz. Fareyi prosedüre hazırlamak için, farenin kuyruğuna ve/veya bacağına bastırarak farenin sırtından tutun ve karnını tıraş edin.Farenin ağrıya duyarlı olmadığı kontrol edilir, ardından karın bölgesi dezenfekte edilir. İlk olarak Betadine solüsyonu ile ovalama yapılır, ardından en az bir dakika boyunca izopropil alkollü mendille silme işlemi gerçekleştirilir. Laparotomi uygulaması için karnın ortasındaki deri forseps ile kaldırılır ve yaklaşık bir santimetre uzunluğunda küçük bir insizyon yapılır.Ardından perineumu kaldırın ve peritoneal boşluğu açığa çıkarmak için başka bir küçük insizyon uygulayın. Kavisli Pens yardımıyla peritoneal membranı tutun. Çekumu, peritoneal membrandan geçirerek tanımlayın ve açığa çıkarın.Karın bölgesinin üzerine yerleştirin. Şimdi ligasyon anıdır. Bu önemli bir faktördür.Modelin şiddetini belirlemek için prosedürün şiddetini modüle edebiliriz. Ligasyonun genişletilmesiyle farelerde daha hafif bir sepsis gelişecektir. Ligasyon sekumun sonuna daha yakın yapıldığında orta dereceli, ortada yapıldığında orta düzeyde ve ileosekal valve daha yakın yapıldığında ise şiddetli bir sepsis oluşur; prosedürün şiddeti mortalite yüzdesi ile yansıtılacaktır.İleosekal valfi asla bağlamayın. Şimdi, sıkı olması için ipek sütürle çift düğüm atarak ligasyonu gerçekleştirin ve delme işlemini yapın. Sekumu tutun ve ligasyon bölgesine yakın bir yere dikkatlice bir delik açın, ardından sekumun ucuna daha yakın bir yere başka bir delik daha açın. Sekum membranı yumuşaktır ve çok kolay bir şekilde delinecektir.Farklı kalınlıklarda iğneler kullanarak ve bir veya iki perforasyon yaparak modelin şiddetini de modüle edebiliriz. Burada gösterilen tekli veya çiftli ponksiyon yöntemi, klasik boydan boya ardışık ponksiyonun alternatif bir tekniğidir. Tekli veya çiftli ponksiyon yöntemini kullanmanın avantajı, sekum sıkıldığında dışarı çıkan dışkı miktarının daha iyi kontrol edilebilmesidir.Çekumu her iki parmağınızla tutun ve çok küçük bir miktar dışkı almak için çekumu nazikçe dışarı itin. Laparotomiyi kapatın, ardından peritonu kaldırın ve çekumu dikkatlice periton boşluğuna geri yerleştirin.Çekumun yanlışlıkla delinmemesi için son derece dikkatli olun. Pens ile işlem yaparken, daha büyük penslerin kullanılması önerilir. Şimdi periton boşluğunu kapatma zamanıdır. İpek sütür kullanarak, buranın çok iyi kapatıldığından emin olmanız oldukça önemlidir.Yaranın bir tarafında bir düğüm atarak başlıyoruz. İpeği, önceki delme işleminin halkasının altından geçirerek karşı tarafa kadar dikiş yapmaya devam edin. Cildi kapatmak için, klipsleri kapatmaya uygun aleti kullanarak Mitchell yara klipsleri veya refleks klipsler kullanabiliriz.Yaranın kapandığından emin olmak için gerektiği kadar klips yerleştirin. Fareleri, cilt altına bir mililitre önceden ısıtılmış salin solüsyonu enjekte ederek canlandırın. 25 gauge iğne kullanılarak gerçekleştirilen bu sıvı resüsitasyon önlemi, sepsisinin hiperdinamik fazını başlatarak prosedürü tamamlayacaktır.Fare anestezi etkisinden çıkana kadar, kızılötesi ısıtıcı lambanın altına veya alternatif olarak bir ısıtma pedinin üzerine yerleştirin. Kafes tabanına yem ve su sağlayın ve hayvanları hastalık belirtileri açısından her sekiz ila 12 saatte bir denetleyin. Postoperatif analjezi için deri altına buprenorfin enjekte edin.Kullanılabilecek farklı bir analjezik T.Tramadol'dur. Sepsis belirtileri ve semptomları arasında ateş, letarji, pelo, ereksiyon, diyare, birbirine sokulma ve malaise yer alır. Çok hasta hayvanlarda vücut sıcaklığında ciddi bir düşüş görülür ve acı çekmemek için neredeyse hiç hareket etmezler.Bu aşamada ötanazi uygulanmalıdır. Orak ligasyonu ve noktasal model uygulaması bu şekilde gerçekleştirilir. Umuyoruz ki bu prosedürün gösteriminden memnun kalmışsınızdır ve hayvan çalışmanıza başlamadan önce araştırmanız için bunu çok faydalı bulmuşsunuzdur. Ligasyon uzunluğunu, iğne kalınlığını ve delik sayısını değiştirerek deneyleriniz için uygun şiddet derecesini belirlemek amacıyla, eğitim için yaşlı veya kullanılmamış fareler kullanmanızı şiddetle öneririz.Bununla birlikte, hoşça kalın.

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Biz koyun ileum içinde 'bağırsak döngüler' catheterizing için yeni bir cerrahi yöntem açıklanmaktadır. Hayvanlar cerrahiden sonra iyileşti ve antibiyotik ve analjezikler temizlendiğini, çoklu tedaviler kateterler yoluyla döngüler doğrudan yatırılır.

Ruminantlarda Bağırsak Döngüler kateterizasyonu

C-mühür zımbalanmış kolorektal anastomoz koruyan bir biofragmentable tahliye. Bu videoda, üretim, dağıtım ve kullanım ayrıntıları gösterilir.

C-mühür: Kaçak Zımbalanmış Kolorektal Anastomoz korunması Biofragmentable Tahliye

Kolon Ascendens Peritonit Stent (CASP) kemirgenlerde polimikrobiyal abdominal sepsis için oldukça iyi standardize edilmiş bir model. Bu makale CASP cerrahi prosedürü açıklar. CASP model ve türevleri, sepsis konu ile ilgili çeşitli sorunlar sistematik soruşturma izin verir.

Kolon Peritonit Stent Ascendens (CASP) - polimikrobik Abdominal Sepsis için bir Standart Model

Deneysel sepsis çekal ligasyon ve delme (CLP) yöntemini kullanarak farelerde neden olabilir. CLP kaynaklı sepsis bağlamında in vivo Otofaji değerlendirmek için mevcut protokoller burada sunulmuştur: (GFP)-LC3 fareler kullanılarak Otofaji ölçülmesi için bir protokol ve elektron mikroskobu ile autophagosome oluşumunu ölçmek için bir protokolü.

Çekal ligasyon ve Farelerde Autophagy incelemek için bir model olarak Sepsis Patamaya kaynaklı

Neonatal domuzlarda efferent lenflerden büyük miktarlarda lipid metabolizması bileşenlerini toplamak için bağırsak lenf gövdesini kateterize etmek için cerrahi bir prosedür sunuyoruz.

Yenidoğan Domuzların Lenf Bağırsak Lenf Trunk ve Koleksiyonu Uzun Vadeli Kateterizasyon

Bu protokol, uzun süreli kritik hastalığın merkezi olarak kateterize edilmiş bir fare modelini tanımlar. Sepsisi indüklemek için çekal ligasyon ve ponksiyon yöntemini, insan klinik ortamını taklit etmek için sıvılar, ilaçlar ve besin uygulaması için merkezi bir venöz hat kullanımı ile birleştiriyoruz.

Kritik Hastalık Fare Modeli Sıvılar, Uyuşturucu ve Besin İdaresi için Santral Venöz Hattı Kullanımı

Erişimi besinler, microbiota metabolitleri ve dolaşım için ilaçlar, gut-kan bariyerini (GBB) tarafından denetlenir. Biz hangi sık kullanılan dolaylı yöntemler aksine, karaciğer ve böbrek işlevleri tarafından etkilenmez neredeyse GBB geçirgenliği vivo içindeölçmek için doğrudan bir yöntem açıklanmaktadır.

Gut-kan bariyerini ve karaciğer metabolizması Microbiota ürünlerin değerlendirilmesi için In Vivo yöntemi

Bu protokol, ilk kez çekal ligasyon/delinme fareleri kurarak ve onları intrananöz enfeksiyona karşı zorlayarak bağışıklık bastırma sepsis klinik olarak alakalı bir model oluşturmak.

Sepsis kaynaklı bağışıklık bastırma, çekal ligasyon ve delinme ve Intranasal enfeksiyon çift model tasarımı

Düzensiz bağırsak epitel bariyer fonksiyonu ve immün yanıtlar, fizyolojik modellerin eksikliği nedeniyle kötü araştırılmaya devam eden enflamatuar bağırsak hastalığının ayırt edici özellikleridir. Burada, mukozal geçirgenliği ve lökosit işe alımını vivo olarak incelemek için iyi vaskülerleştirilmiş ve dışlanmış bir bağırsak segmenti kullanan bir fare bağırsak döngüsü modelini tarif ediyoruz.

Standartlaştırılmış Bağırsak Döngüsü Modeli Kullanılarak Farelerde Bağırsak Geçirgenliği ve Nötrofil Transepithelial Göçün Fonksiyonel Değerlendirmesi

Bu protokol, bir fare sepsis modelinde çekal ligasyon ve ponksiyonun (CLP) operatif ayrıntılarını sunar. CLP, sepsisin hayvan modelini oluşturmak için en yaygın kullanılan tekniklerden biridir. Bu nedenle, güvenilir araştırma sonuçlarının elde edilmesi için standartlaştırılmış bir CLP protokolü gereklidir.

Sepsisin Çekal Ligasyonu ve Delinmeye Bağlı Fare Modelinde Güvenilir Bir Biyobelirtecin Değerlendirilmesi

Öğrenin, C57BL/6 farelerde çekal ligasyon delinme prosedürü ile sepsis modeli kurmayı. Bu yöntem, polimikrobiyal sepsisi taklit ederek bağışıklık yanıtı ve organ hasarını araştırmada değerli veriler sunar.

Çekal ligasyon Delinme Prosedürü

Daha fazla video keşfet