Çekal ligasyon Delinme Prosedürü
May 7th, 2011
Çekal ligasyon ve ponksiyon insan sepsis çalışma için değerli bir araç olarak fare modeli.
Merhaba, benim adım Miguel Toscano, Temple Üniversitesi Mikrobiyoloji ve Hemoloji Bölümü'ndeki Dr.Dena'nın laboratuvarından. Bugün size C 57 Black Seas Mouse türünde iCal iddiası ve delinme modelini nasıl kuracağınızı göstereceğiz. Bu modeli laboratuvarımızda insan sepsisini taklit etmek için kullanıyoruz.
Temel olarak, bu model, polimikrobiyal bir sepsis oluşturmak için dışkı materyalinin periton boşluğuna salınmasına izin veren ve böylece daha şiddetli bir bağışıklık tepkisi oluşturan bir seum delinmesinden oluşur. Bu modelde birçok organ ve farklı hücre tipleri geri dönüşü olmayan bir şekilde hasar görür. Sonunda bu hayvanın ölümüne neden olabilir.
Öyleyse başlayalım. Fareyi uyuşturmak. İlk adım, intraperitoneal enjekte edilerek hayvanın uyuşturulmasıdır.
Ketomin ve ksilazinin bire bir karışımı. Fare tarafından ısırılmamak için, ona zarar vermemek için fareyi bir elimizle kuyruğundan tutmalıyız. Diğer elimizle yere geri bastırıyoruz.
Sonra fareyi başının arkasından tutabilir ve ardından karnını ortaya çıkarmak için hayvanı sırt üstü çevirebiliriz. 29 gauge insülin şırıngası ile periton boşluğuna 20 ila 30 mikrolitre anestezi enjekte ediyoruz. Fareyi prosedür için hazırlarken, farenin arkasını tutun ve farenin kuyruğuna ve/veya bacağına bastırarak karnını tıraş edin.
Farenin ağrıya duyarlı olmadığını kontrol ediyoruz, Sonra karın dezenfekte edilir. Önce Betadine solüsyonu ile ovalayın, ardından izopropil alkollü mendille silerek en az bir dakika boyunca. Laparotomi uygulaması Laparotomi yapmak için, karnın ortasındaki cildi forseps ile kaldırıyoruz ve yaklaşık bir santimetre uzunluğunda küçük bir kesi yapıyoruz.
Sonra perineyi kaldırın ve periton boşluğunu ortaya çıkarmak için başka bir küçük kesi uygulayın. Kavisli Forseps kullanarak periton zarını tutun. Çekumu periton zarından geçirerek tanımlayın ve açığa çıkarın.
Karnın üzerine yerleştirin. Şimdi ligasyon zamanıdır. Bu önemli bir faktördür.
Modelin ciddiyetini belirlemek için, prosedürün ciddiyetini modüle edebiliriz. Ligasyonun uzamasıyla, fareler daha hafif bir sepsis geliştirecektir. Ligasyon çekumun sonuna daha yakın yapılırsa, ortada yapılırsa orta dereceli bir sepsis ve ileoçekal valfe daha yakın yapılırsa şiddetli bir sepsis, prosedürün ciddiyeti mortalite yüzdesi ile yansıtılacaktır.
İleoçekal valfi asla bağlamayın. Şimdi ligasyonu sıkı hale getirmek için çift düğümlü ipek sütür kullanarak yapın, delinmeyi yapın Çekumu tutun ve dikkatlice ligasyon bölgesine yakın bir delik açın ve çekumun ucuna daha yakın bir başka delme yapın. Sekumun zarı yumuşaktır ve çok kolay delinir.
Farklı kalınlıklarda iğneler kullanarak ve bir veya iki delik açarak, modelin ciddiyetini de modüle edebiliriz. Burada gösterilen tek veya çift delme yöntemi, klasik ara ve baştan sona devam eden delme yöntemine alternatif bir tekniktir. Tek veya çift delme yöntemini kullanmanın avantajı, sıkılmak istendiğinde ekstrüde edilen dışkı miktarını daha iyi kontrol edebilmesidir.
Sekum'u her iki parmağınızla tutun ve çok az miktarda dışkı çıkarmak için çekumu hafifçe çıkarın. Laparotominin kapatılması, Ardından peritonu kaldırın ve çekumu dikkatlice geri yerleştirin. Periton boşluğunda.
Çekumun kazara batmasını önlemek için son derece dikkatli olun Forseps ile daha büyük forseps kullanılması önerilir. Şimdi tam zamanı Periton boşluğunu kapatmak için. İpek sütür kullanarak, çok iyi kapatıldığından emin olmanız çok önemlidir.
Düğüm attığımız yaranın bir tarafından başlıyoruz. İpeği önceki delinmenin ilmeğinin altından geçirerek diğer tarafa kadar dikiş yapmaya devam edin. Cildi kapatmak için, klipsleri kapatmak için doğru aleti kullanarak Mitchell yara klipslerini veya refleks klipslerini kullanabiliriz.
Yaranın Kapalı olduğundan emin olmak için gerektiği kadar klips yerleştirin. Fareleri deri altına bir mililitre ön ısıtma tuzlu su çözeltisi enjekte ederek canlandırın. 25 gauge iğne kullanarak, bu sıvı resüsitasyon ölçüsü sepsisin hiperdinamik fazını indükleyerek prosedürü tamamlayacaktır.
Fareyi kızılötesi bir ısıtma ışığının altına veya alternatif olarak bir ısıtma yastığının üzerine yerleştirin Fare anesteziden kurtulana kadar. Kafesin zemininde yiyecek ve su sağlayın ve hayvanları hastalık belirtileri açısından her sekiz ila 12 saatte bir denetleyin. Postoperatif analjezi için deri altına buprenorfin enjekte edin.
Kullanılacak farklı bir analjezik T.Tramadol'dür. Sepsis belirtileri, sepsis belirtileri ateş, uyuşukluk, pelo, ereksiyon, ishal, toplanma ve halsizliktir. Çok hasta hayvanlar vücut ısısında ciddi bir azalma gösterir ve acı çekmemek için zar zor hareket ederler.
Bu aşamada ötenazi yapılmaları gerekir H.So orak ligasyonu ve dakik modeli bu şekilde gerçekleştiriyoruz. Umarım, bu prosedürün gösterilmesinden keyif almışsınızdır ve hayvan çalışmanıza başlamadan önce araştırmanız için çok yararlı bulmuşsunuzdur. Ligasyonun uzunluğunu, iğnenin kalınlığını ve delinme sayısını değiştirerek deneyleriniz için uygun şiddet derecesini belirlemek için eğitim için eski veya kullanılmayan zihinleri kullanmanızı şiddetle tavsiye ederiz.
Bununla birlikte, güle güle.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
Genel Bakış
Bu makale, insan sepsisini incelemek için kullanılan sekal ligasyon ve punktur fare modelini tartışmaktadır. Model, peritoneal boşluğa dışkı maddesi sokarak polimikrobiyal sepsisi simüle eder ve abartılı bir bağışıklık tepkisine ve potansiyel organ hasarına yol açar.
Çalışmanın Temel Bileşenleri
Bilim Alanı
- Mikrobiyoloji
- İmmünoloji
- Hayvan Modelleri
Arka Plan
- Sepsis, enfeksiyondan kaynaklanan ciddi bir tıbbi durumdur.
- Hayvan modelleri, sepsisin mekanizmalarını anlamak için kritik öneme sahiptir.
- Sekar ligasyon ve punktur modeli, insan sepsisini etkili bir şekilde taklit eder.
- Bu model, bağışıklık tepkileri ve organ hasarının incelenmesine olanak tanır.
Çalışmanın Amacı
- Sekar ligasyon ve punktur modelinin kurulumunu göstermek.
- Bu modelin sepsis araştırmasındaki önemini vurgulamak.
- Bu modelin neden olduğu bağışıklık tepkisi hakkında bilgiler sağlamak.
Kullanılan Yöntemler
- Model için C57BL/6 fareleri kullanılması.
- Dışkı maddesini serbest bırakmak için sekumun delinmesi.
- Bağışıklık tepkisi ve organ hasarının izlenmesi.
- Prosedür sonrası hayvanların hayatta kalma oranının değerlendirilmesi.
Ana Sonuçlar
- Model başarılı bir şekilde polimikrobiyal sepsisi indükler.
- Fareleri araştırmada önemli bir bağışıklık tepkisi gözlendi.
- Organ hasarı belirlendi ve potansiyel ölümlülüğe yol açtı.
- Bu model sepsis araştırması için değerli veriler sağlar.
Sonuçlar
- Sekar ligasyon ve punktur modeli, sepsisin incelenmesi için değerli bir araçtır.
- Araştırmacıların bağışıklık tepkilerini ve organ yetmezliğini araştırmasına olanak tanır.
- Daha fazla çalışma, sepsis mekanizmalarının anlaşılmasına yardımcı olabilir.
Sıkça Sorulan Sorular
Executive Industry Relevance
The cecal ligation and puncture (CLP) model provides a reproducible, polymicrobial sepsis model that mirrors human pathophysiology, enabling target validation and mechanistic de-risking in early discovery. By reproducing both hyperdynamic and hypodynamic phases, it supports predictive confidence in therapeutic screening and translational biomarker identification. This model aids in assessing drug efficacy across disease stages, reducing late-stage failure risk in sepsis-related programs.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Scientific Value: Enables interrogation of immunological and physiological status across sepsis phases to validate therapeutic hypotheses.
- Operational Value: Supports functional target validation by modeling cytokine profiles and lymphocyte apoptosis relevant to human sepsis.
- Scientific Value: Facilitates pathway clarification through controlled induction of polymicrobial infection and organ damage readouts.
Screening & Assay Development
- Scientific Value: Generates quantifiable immune response and organ dysfunction metrics for assay standardization.
- Operational Value: Provides reproducible survival and physiological readouts enabling reliable compound evaluation.
- Scientific Value: Allows modulation of sepsis severity via ligation length, puncture number, and needle thickness for dose-response screening.
Translational & Preclinical Research
- Scientific Value: Models disease-relevant immune depression and nocosomial infection risk for translational biomarker alignment.
- Operational Value: Supports preclinical continuity by replicating clinical sepsis progression from hyperdynamic to hypodynamic phases.
- Scientific Value: Enables risk-adjusted advancement decisions through measurable outcomes like body temperature drop and lethargy.
Pipeline & Workflow Integration
The CLP model fits within the discovery continuum from target validation through lead identification to preclinical efficacy testing, particularly for immunomodulatory agents.
- Discovery Biology: Supports hypothesis testing by modeling systemic inflammatory response and immunosuppression phases.
- Screening: Delivers quantitative outputs such as cytokine levels, organ injury markers, and survival rates for compound comparison.
- Analytics: Enables statistical analysis of time-to-event and physiological parameters to assess treatment effects.
- Translational Research: Connects to preclinical validation via replicated human sepsis cytokine profiles and organ failure patterns.
- Enterprise Reuse: Serves as a reusable platform for sepsis mechanism probing and therapeutic screening across multiple campaigns.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Predictive confidence in target validation through phase-specific pathophysiological modeling.
- Operational Value: Standardization via controlled severity modulation and postoperative monitoring protocols.
- Strategic Value: Improved go/no-go decisions by capturing stage-dependent drug effects in sepsis.
- Portfolio Impact: Risk-adjusted prioritization based on model reproducibility and translational fidelity.
Implementation Considerations
- Requires expertise in aseptic surgical technique and rodent anesthesia.
- Dependent on instrumentation for ligation, puncture, and postoperative monitoring.
- Necessitates cross-team standardization of severity scoring and resuscitation protocols.
- Adaptation considerations include mouse strain, sex, and baseline health status.
- Practical limitations include variability in fecal extrusion and model mortality rates.
