Name: Fare lazer Doppler flowmetre Rehberlik İskemik İnme intraluminal Orta Serebral Arter Tıkanıklığı (MCAO) Model (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-05-08T14:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 1 s
Description: Öğrenin fare lazer Doppler flowmetre kullanarak intraluminal orta serebral arter tıkanıklığı modelini. Bu yöntem iskemik inme araştırmalarında kan akışını izlemek ve tekrarlanabilir sonuçlar elde etmek için değerlidir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu protokol, Kurumsal Hayvan Bakım tarafından onaylanmış ve Florida Üniversitesi'nde Komitesi (IACUC) kullanın ve "Laboratuvar Hayvanları Bakım ilkesi" (NIH yayın No 86-23, 1985 revize) ile uyum içerisindedir. 1. Malzemeler <ol><li> Hayvanlar: cerrahi anda 20-26 gram ağırlığında Erkek C57BL / 6 fareler (Harlan Laboratuvarları, Indianapolis, IN, ABD). </li><li> Anestezi: <ol><li> Anestezi makinesi: VetEquip inhalasyon anestezi sistemi (VetEquip A.Ş., Pleasanton, CA, USA). </li><li> Anestezik Soluma: İsofluranın (Baxter İlaç, Deerfield, IL). </li></ol></li><li> Cerrahi araçları: SUPERCUT Iris makas, düz (Dünya Precision Instruments, Inc, Sarasota, FL, ABD); Vannas mikro-makas, düz (Dünya Precision Instruments, Inc, Sarasota, FL, ABD); Dumont forseps (ince uçlu, 45 ° bükülmüş ipuçları, Dünya Precision Instruments, Inc, Sarasota, FL, ABD); Bipolar koagülasyon birimi (Yüksek Frekanslı Desikatör 900, Dünya Precision Instruments, Inc, Sarasota, FL, ABD), mikro damar klip (Dünya Hassas Aletler A.Ş., Sarasota, FL, ABD) </li><li> Cerrahi malzemeler: Steril pamuk ipuçları; Mendil, tül süngerler; Sütür (dikiş 7-0 İpek, Ethicon, Inc, Somerville, NJ, ABD); Doku yapıştırıcı (Vetbond, 3M Company, St Paul, MN, ABD); Cerrahi fırçalayın : Bethadine,% 70 etanol ve steril salin% 0.9; Göz merhemi (Puralube Veteriner Merhem, Pharmaderm, Melville, NY, ABD). </li><li> Tıkanıklığı sütür MCAO için hazırlanması: <ol><li> MCA oklüzyonu Filament: 7-0 cerrahi naylon monofilament sütür (Ethicon, Inc, Somerville, NJ, ABD). </li><li> Isı kaynağı sütür ucu (Termal Koter Birimi, Dünya Precision Instruments, Inc, Sarasota, FL) küntleşme. </li><li> Sıvı silikon kauçuk (Silikon RTV yapıştırıcı, Dünya Precision Instruments, Inc, Sarasota, FL, ABD). </li></ol></li><li> / Cerrahi mikroskop Diseksiyon (Leica Stereo Mikroskop MZ6). <ol><li> Fiber optik aydınlatma (Fiber Optik aydınlatma FO1-150, TechniQuip Corp Livermore, CA, USA). </li></ol></li><li> Lazer Doppler flowmetre (PeriFlux Sistemi 5000 Perimed, Stockholm, İsveç). <ol><li> Esnek mikrotip (MT B500-0 Düz mikrotip, Perimed, Stockholm, İsveç) </li></ol></li><li> Isı parametreleri: <ol><li> Rektal ısı monitörü (BAT-12, Dünya Precision Instruments, Inc, Sarasota, FL). </li><li> Termal battaniye (T / POMPA, TP600, Gaymar, NY, ABD). </li></ol></li><li> Boyama ve hacim infarkt kantitatif ölçümü: <ol><li> % 2 solüsyon 2,3,5-triphenyltetrazolium klorür (2% TTC, Sigma-Aldrich Co-St Louis, MO, ABD). </li><li> Fareler beyin matris dilimleme makinesi (Zivic-Miller Lab. Inc, Allison Park, PA, USA). </li><li> Dijital fotoğraf makinesi (V1253, Kodak Co, Rochester, NY, ABD). </li><li> Görüntü J yazılımı (ImageJ 1.42q yazılımı, ABD Ulusal Sağlık Enstitüleri, Bethesda, MA, ABD). </li></ol></li></ol> 2. Cerrahi öncesi adımlar <ol><li> Ameliyat öncesinde, farelerin, su ve kemirgen yemi ücretsiz erişim ile 12:12 ışık / karanlık döngüsü altında muhafaza edilir. </li><li> (7-0 kuru izin MCAO için Dikişler, ısı ve ucundan sıvı silikon kauçuk kaplama dikiş şaft 3-4mm ile sütür ucu 1-2mm küntleşme tarafından hazırlanan; ucu çapı, 0.20-0.25mm; kaplama uzunluğunda, 3-4mm; dikiş uzunluğu 11-13mm). Sterilite, söz konusu adımların tüm korunmuş olması gerekir. </li><li> Fare ağırlığında sonra, anestezi indüksiyon odasında izofluran% 4 ile indüklenen ve% 30 O 2 ve% 70 N 2 O gaz karışımı bir yüz maskesi ile% 1.5-2 izofluran ile prosedür boyunca sürdürülmüştür. </li><li> Fare (termal battaniye) sıcaklık kontrollü bir işletim yüzey üzerinde duran bir gazlı bez üzerine yüzükoyun pozisyonda yerleştirilir; baş kürk traş. </li><li> Yağ oftalmik merhem iki göz için uygulanır ve göz kapaklarının cerrahi işlemi sırasında göz kuruma önlemek için kapalı. </li><li> Nasion ve cilt esnek bir mikrotip (0.5mm çap MT B500-0 Düz mikrotip) yapıştırmayın yanal çekilir üstün ense hattan kalvaryumda örten cilt üzerinde orta hat insizyonu (1 cm) yapılır. Mikrotip lazer Doppler flowmetre MCA topraklarında kan akışını izlemek için sağ parietal kafatası yüzeyi (1 mm arka ve bregma lateral 5 mm) dik olarak yerleştirilir. </li><li> Hayvan supin pozisyonda açılmadan önce esnek mikrotip kafatasına sıkıca takılı olduğundan emin olun. Hayvanın boyun yumuşak bir yastık yerleştirilir ve burun burun konisi anestezi cihazların tutulur. Bu esnek mikrotip için yeterli alana sahip neden olacaktır. </li><li> Rektal ısı probu 37 ± 0.5 ° C sabit bir hayvan çekirdek sıcaklığını korumak için eklenir </li><li> Her iki forepaws ve hindpaws işletim platformu yüzeye bantlanmış ve kuyruk rektal tüp bantlanmış. </li> &lt;/ Ol&gt; 3. MCA oklüzyonu cerrahisi: <ol><li> Operasyon mikroskobu altında, orta hat boyun insizyonu gevşek deri hafifçe kaldırarak manubrium ve çene arasındaki makas ile yapılır. </li><li> In situ sol sol bezi ile eşleştirilmiş yatan submandibular bezlerin açık açık ayrılır. Sağ submandibular bezi cranially retrakte ve sternokleidomastoid kas ile birlikte güvence altına alınmıştır. </li><li> Carotica'nın kapsayan omohyoid kas maruz kalan bölümü dikkatle manyetikler ile ayrılmıştır. </li><li> Sağ karotis arter (CCA), vagus siniri ve kılıf (CCA lateralinde bulunan) dikkatlice ayrılmış ve izole edilmiştir. </li><li> Bundan sonra, farklı MCA oklüzyonu gerçekleştirmek için sık sık kullanılan 2 cerrahi yöntemler : </li></ol> Koizumi Kullanıcı 4 yöntem <ol class="lroman" type="i"><li> Üç gevşek yakalı sütür (7-0 ipek) sağ CCA etrafında hazırlanmıştır. </li><li> Eksternal karotid arter (ECA), tespit izole ve koterize (bifurkasyon için distal 2-3mm). Bu daha sonra mikro makas ile ayrılabilir. Koterizasyon yerinde yanlışlıkla periferik hasarları önlemek için, güç, güç düğmesini kullanarak 1 ayarlanmış olmalıdır. Bu tüm cauterizations için tutarlı. </li><li> Yeterli gerilim, kan akımı (kalıcı ligasyonu) CCA kapamak için en proksimal yaka dikiş uygulanır. Akış tıkanma temel kortikal perfüzyon değerlerinin ~ 50% düşüş tarafından doğrulanmadı. </li><li> Sonra bir gemi klibi arteriyotomi zaman retrograd akışını önlemek için sadece CCA çatallanma önce yerleştirilir. </li><li> Bir arteriyotomi mikro-makas (yakın ligasyonu) ile proksimal bağlandı dikiş ve CCA damar klip arasında yapılır. </li><li> Arteriyotomi ısı köreldiğini silikon kaplı 7-0 naylon sütür ile tanıştırdı ve damar klip ulaşana kadar gelişmiş. Arter duvarında travmatize dikkatli, CCA üzerinden akış kaçağı önlemek için arteriyotomi ve damar klip arasında CCA çevresinde kalan 2 gevşek yakalı sütür hafifçe sıkılır, daha sonra damar klip çekilmiş. </li></ol> Longa Kullanıcı 3 yöntem <ol class="lalpha" type="a"><li> ECA, tespit koterize (1 gücü ile), (dilli ve maksiller arterlerin ayrılmasından yakınında) mümkün olduğu kadar disseke ve mikro-makas ile bölünmüş. </li><li> İki gevşek yakalı sütür (7-0 ipek) CCA çatallanma sadece yukarıda proksimal ICA çevresinde hazırlanmıştır. </li><li> CCA geçici bir gemi klibi ile kapatılır. Akış tıkanma temel kortikal perfüzyon değerlerinin ~ 50% düşüş tarafından doğrulanmadı. </li><li> Sonra ICA arteriyotomi zaman retrograd akışını önlemek için iki gevşek yakalı sütür üzerinde bir gemi klip ile geçici olarak kapatıldı. </li><li> Güdük yansıyan ECA yakın bir arteriyotomi mikro-makas kullanılarak yapılır. </li><li> ECA arteriyotomi ısı köreldiğini silikon kaplı 7-0 naylon sütür ile tanıştırdı ve ICA uygulanan damar klip ulaşana kadar gelişmiş. Proksimal ICA 2 gevşek yakalı sütür, arter duvarındaki travmatize yeterince ilgi, ICA reflü kan akışını önlemek için proksimal ICA etrafında hafifçe sıkılır, daha sonra damar klip çekilmiş. </li></ol> Prosedürün geri kalanı büyük ölçüde yakınsak: <ol><li> Hafif bir direnç hissedilir kadar kapatılmasıy sütür internal karotis arter (ICA) kafa tabanına doğru yavaş yavaş ilerlemiştir. Serebral kan akımı değeri başlangıca göre bir yüzdesi (% 80) olarak eşzamanlı açılan lazer Doppler flowmetre tarafından teyit edilir. 2 yaka sütür eklenen filament etrafında sıkılır. </li><li> Kapatılmasıy dikiş geçici serebral iskemi deneyleri için, 45 dakika sonra hafifçe geri çekilir. Bu zaman noktası, çeşitli deneysel amaçlar için değiştirilebilir. </li><li> Arteriyotomi sitesinde dikiş filament çekilme sonra, ameliyat sonrası kanama önlemek için kapalı. Koizumi yöntemi, bu güvenli CCA etrafında yakalı sütür sıkma içerir. Longa tekniği, ECA üssünde arteriyotomi sitesi koterize, proksimal ICA yakalı dikişlerle sonra gevşedi ve karotis akışı geri kaldırılır. </li><li> Insizyon kapatmak için, submandibular bezi ve SCM ameliyat alanın üzerine serilir. Yara kenarları sonra servikal doku yapıştırıcısı ve kafa derisi alanları ile yaklaştırılır. Alternatif olarak, emilebilen bir sütür veya metal zımba, hayvanın uzun süreli sağkalım amaçlanan, özellikle yara kapatmak için kullanılan olabilir. </li><li> Kesi kapatılmasından sonra, hayvan hacmi ikmal olarak subkutan 1 ml ılık tuzlu su alır. Iyileşme döneminde hayvanın ağrı ve rahatsızlık en aza indirmek için uygun analjezik doz (0.05-0.1 mg / kg 'yani Buprenorfin) kullanılmalıdır. Animal cerrahi seti kaldırıldı ve yumuşak gıda ve su ücretsiz, kolay erişim, hipotermi önlemek için sıcak bir kurtarma alan / kafes yerleştirilir. </li></ol> 4. Post-Op nörolojik değerlendirme 3 aşağıdaki gibi, hayvan toplam bilinç kavuşur sonra nörolojik defisit basit bir ölçek (beş puanlık bir ölçek) tarafından değerlendirilmelidir. <ol start="0"><li> gözlemlenebilir açıkları yok </li><li> kontralateral forepaw (hafif fokal nörolojik defisit) genişletmek için başarısızlık </li><li> infarkt için kontralateral bir yön çizerek (orta fokal nörolojik defisit) </li><li> infarkt kontralateral bir yön düşen (ciddi fokal nörolojik defisit) </li><li> spontan hareket olmadan bilinç depresif </li></ol> 5. Boyama ve beyin infarkt hacmi kantitatif ölçümü <ol><li> MCA reperfüzyon 24 saat sonra, hayatta kalan fare,% 4 isoflorane ile derin anestezi tartılır ve onaylanmış protokole göre kurban. </li><li> Beyin dikkatle kaldırılır ve bir fare beyin matris dilimleyiciyi yerleştirilir ve 2 mm aralıklarla tüm serebrum koronal kesitli. </li><li> Bölümleri TTC 37 fosfat tamponlu salin (PBS)% 2 ° C de 20 dakika boyunca dalmış. TTC boyama sonra, infracted alan kırmızı tuğla (canlı) doku (Şekil 1) bitişik bir beyaz (boyasız) doku olarak gösterilmiştir. </li><li> Seri bölümleri, dijital kamera ve görüntü J programı ile ölçülür infarkt alanı kullanılarak fotoğraflandı. </li><li> Infarkt alanı (beyaz, boyasız), ipsilateral hemisferde (lekeli, tuğla, beyaz ve kırmızı) alanında ve kontralateral hemisferde (kırmızı tuğla, vitray) alanında, her bölüm için ölçülür. Hacmi, tüm bölümlerde temsilcisi alanlarda toplayarak ve kesit kalınlığı ile çarpılarak hesaplanır. Ödemi düzelttikten sonra, enfarktüs hacmi 9 aşağıdaki gibi hesaplanır: Düzeltilmiş İnfarkt Hacmi (CIV),% = [kontralateral hemisfere hacmi - (ipsilateral yarımkürede hacmi - infarkt hacmi)] / kontralateral yarımkürede hacmi x 100 </li></ol> 6. Temsilcisi Sonuçlar Geçici serebral iskemi kurmak için sol CCA ile MCA oklüzyon ve reperfüzyon sonra, hayvanlar kurban ve onların koronal kesitli beyinleri infarkt hacmi (Şekil 1) değerlendirmek için TTC ile boyandı. <img src="files/ftp_upload/2879/2879fig1.jpg" alt="Şekil 1"> Şekil 1 fareler TTC-lekeli seri koronal beyin bölümler (2 mm) MCA oklüzyonu tabi. </ol>

<ol><li><a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recommendations+on+stroke+prevention%2C+diagnosis%2C+and+therapy.+Report+of+the+WHO+Task+Force+on+Stroke+and+other+Cerebrovascular+Disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%3B+a+journal+of+cerebral+circulation%22%5BJournal%5D)">Recommendations on stroke prevention, diagnosis, and therapy. Report of the WHO Task Force on Stroke and other Cerebrovascular Disorders.</a> Stroke; a journal of cerebral circulation. 20, 1407-1431 (1989).</li>
<li>Lloyd-Jones, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+disease+and+stroke+statistics--2009+update%3A+a+report+from+the+American+Heart+Association+Statistics+Committee+and+Stroke+Statistics+Subcommittee%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Heart disease and stroke statistics--2009 update: a report from the American Heart Association Statistics Committee and Stroke Statistics Subcommittee.</a> Circulation. 119, e21-e181 (2009).</li>
<li>Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversible+middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%3B+a+journal+of+cerebral+circulation%22%5BJournal%5D)">Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.</a> Stroke; a journal of cerebral circulation. 20, 84-91 (1989).</li>
<li>Koizumi, J., Yoshida, Y., Nakazawa, T., Ooneda, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+studies+of+ischemic+brain+edema.+I.+A+new+experimental+model+of+cerebral+embolism+in+rats+in+which+recirculation+can+be+introduced+in+the+ischemic+area%5BTitle%5D)+AND+%22Jpn+J+Stroke%22%5BJournal%5D)">Experimental studies of ischemic brain edema. I. A new experimental model of cerebral embolism in rats in which recirculation can be introduced in the ischemic area.</a> Jpn J Stroke. 8, 1-8 (1986).</li>
<li>Clark, W. M., Lessov, N. S., Dixon, M. P., Eckenstein, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monofilament+intraluminal+middle+cerebral+artery+occlusion+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Neurol+Res%22%5BJournal%5D)">Monofilament intraluminal middle cerebral artery occlusion in the mouse.</a> Neurol Res. 19, 641-648 (1997).</li>
<li>Fujii, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strain-related+differences+in+susceptibility+to+transient+forebrain+ischemia+in+SV-129+and+C57black%2F6+mice.+%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%3B+a+journal+of+cerebral+circulation%22%5BJournal%5D)">Strain-related differences in susceptibility to transient forebrain ischemia in SV-129 and C57black/6 mice. </a> Stroke; a journal of cerebral circulation. 28, 1805-1810 (1997).</li>
<li>Bederson, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+2%2C3%2C5-triphenyltetrazolium+chloride+as+a+stain+for+detection+and+quantification+of+experimental+cerebral+infarction+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%3B+a+journal+of+cerebral+circulation%22%5BJournal%5D)">Evaluation of 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride as a stain for detection and quantification of experimental cerebral infarction in rats.</a> Stroke; a journal of cerebral circulation. 17, 1304-1308 (1986).</li>
<li>Qi, X., Hosoi, T., Okuma, Y., Kaneko, M., Nomura, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sodium+4-phenylbutyrate+protects+against+cerebral+ischemic+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Sodium 4-phenylbutyrate protects against cerebral ischemic injury.</a> Mol Pharmacol. 66, 899-908 (2004).</li>
<li>Barone, F. C., Knudsen, D. J., Nelson, A. H., Feuerstein, G. Z., Willette, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+strain+differences+in+susceptibility+to+cerebral+ischemia+are+related+to+cerebral+vascular+anatomy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Mouse strain differences in susceptibility to cerebral ischemia are related to cerebral vascular anatomy.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 13, 683-692 (1993).</li>
<li>Tureyen, K., Vemuganti, R., Sailor, K. A., Dempsey, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ideal+suture+diameter+is+critical+for+consistent+middle+cerebral+artery+occlusion+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Ideal suture diameter is critical for consistent middle cerebral artery occlusion in mice.</a> Neurosurgery. 56, 196-200 (2005).</li>
<li>Barber, P. A., Hoyte, L., Colbourne, F., Buchan, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temperature-regulated+model+of+focal+ischemia+in+the+mouse%3A+a+study+with+histopathological+and+behavioral+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%3B+a+journal+of+cerebral+circulation%22%5BJournal%5D)">Temperature-regulated model of focal ischemia in the mouse: a study with histopathological and behavioral outcomes.</a> Stroke; a journal of cerebral circulation. 35, 1720-1725 (2004).</li>
<li>Kapinya, K. J., Prass, K., Dirnagl, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isoflurane+induced+prolonged+protection+against+cerebral+ischemia+in+mice%3A+a+redox+sensitive+mechanism%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Isoflurane induced prolonged protection against cerebral ischemia in mice: a redox sensitive mechanism?</a> Neuroreport. 13, 1431-1435 (2002).</li>
</ol>

Yazarlar, herhangi bir çıkar çatışmasından olduğunu beyan ederim.

MCAO model fare türlerinde serebral iskemi çoğaltır kurulmuş bir model. Bu model ilk sıçanlarda kullanılır ve bundan sonra farelere adapte oldu. Kraniektomi kaçınmak, kan-beyin bariyeri geçirgenliği ve intrakranial basınç cerrahi manipülasyonu etkisini ortadan kaldırmak için bu tekniğin bir avantaj. Ancak, ilgili gerilim farklılıkları 10, 6, oklüzyon vücut ısısı 12, anestezi 13 sütür ucu 11, süresi büyüklüğü ve diğer faktörler gibi pek çok değişken, bu model infarkt hacimleri ...

<table border="1"><tbody><tr><th> Reaktifin Adı </th><th> Tip </th><th> Şirket </th><th> Katalog numarası </th><th> Yorumlar (isteğe bağlı) </th></tr><tr><td> Erkek C57BL / 6 fareler </td><td> Hayvan </td><td> Harlan Laboratuvarları, Indianapolis, IN, ABD </td><td></td><td> 20-26 gr </td></tr><tr><td> Diseksiyon mikroskobu </td><td> Mikroskop </td><td> Leica Stereo Mikroskop MZ6 </td><td></td><td> 6.3:1 zum </td></tr><tr><td> Fiber optik aydınlatma </td><td> Aydınlatıcı </td><td> TechniQuip Corp, Livermore, CA, USA </td><td></td><td> FO1-150 </td></tr><tr><td> İsofluranın </td><td> Anestezi </td><td> Baxter İlaç, Deerfield, IL </td><td> 1001936060 </td><td></td></tr><tr><td> Iris makas düz SUPERCUT </td><td> Cerrahi araç </td><td> Dünya Precision Instruments, Inc, Sarasota, FL, ABD </td><td> 14218 </td><td></td></tr><tr><td> Vannas mikro-makas, düz </td><td> Cerrahi araç </td><td> Dünya Precision Instruments, Inc, Sarasota, FL, ABD </td><td> 14003 </td><td></td></tr><tr><td> Dumont ince ucu forseps </td><td> Cerrahi araç </td><td> Dünya Precision Instruments, Inc, Sarasota, FL, ABD </td><td> 503290 </td><td></td></tr><tr><td> Gemi klip </td><td> Cerrahi araç </td><td> Dünya Precision Instruments, Inc, Sarasota, FL, ABD </td><td> 14120 </td><td></td></tr><tr><td> Yüksek Frekans Desikatör 900 </td><td> Cerrahi araç </td><td> Dünya Precision Instruments, Inc, Sarasota, FL, ABD </td><td> 500397 </td><td></td></tr><tr><td> 7-0 cerrahi naylon monofilament sütür </td><td> Dikiş </td><td> Ethicon, Inc Somerville, NJ, ABD </td><td> 1647G </td><td> Oklüzyonu Sütür </td></tr><tr><td> 7-0 cerrahi İpek sütür </td><td> Dikiş </td><td> Ethicon, Inc Somerville, NJ, ABD </td><td> 7733G </td><td> Ligasyonu için sütür </td></tr><tr><td> Silikon RTV yapıştırıcı </td><td> Silikon kauçuk </td><td> Dünya Precision Instruments, Inc, Sarasota, FL, ABD </td><td> 1571 </td><td></td></tr><tr><td> Vetbond </td><td> Doku yapıştırıcısı </td><td> 3M Company, St Paul, MN, ABD </td><td> 70200746587 </td><td></td></tr><tr><td> Puralube Veteriner Merhem </td><td> Göz merhemi </td><td> Pharmaderm, Melville, NY, ABD </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Buprenorfin hydrochlorode </td><td> Analjezikler </td><td> Hospira A.Ş., Lake Forest, IL, ABD </td><td> NDC 0409-2012-32 </td><td></td></tr><tr><td> Termal Koter Ünitesi </td><td></td><td> Dünya Precision Instruments, Inc, Sarasota, FL, ABD </td><td> 501292 </td><td></td></tr><tr><td> PeriFlux Sistemi 5000 </td><td> TCD flowmetre </td><td> Perimed, Stockholm, İsveç </td><td></td><td></td></tr><tr><td> BAT-12 </td><td> Rektal termometre </td><td> Dünya Precision Instruments, Inc, Sarasota, FL, ABD </td><td> Bat-12R </td><td></td></tr><tr><td> T / POMPA, TP600 </td><td> Termal battaniye </td><td> Gaymar, NY, ABD </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride </td><td> Reaktif </td><td> Sigma-Aldrich Co, St Louis, MO, USA </td><td> T8877 </td><td></td></tr><tr><td> Fareler beyin matris dilimleme makinesi </td><td> Beyin dilimleme makinesi </td><td> Zivic-Miller Lab. Inc, Allison Park, PA, USA </td><td> BSMAS001-1 </td><td></td></tr></tbody></table>

fare lazer doppler flowmetre rehberlik İskemik İnme intraluminal orta serebral arter tıkanıklığı (mcao) model

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

İnme, 1,2 2009 yılında Amerika Birleşik Devletleri 70 milyar ABD doları yakın bir tahmini maliyeti, üçüncü önde gelen ölüm nedeni ve özürlülük dünyanın önde gelen nedenidir. Koizumi 4 sıçan bu etkileyici insan patoloji simüle etmek için 1986 yılında intraluminal orta serebral arter tıkanıklığı (MCAO) modeli geliştirilmiştir. MCAO yöntemi bir değişiklik daha sonra Longa 3 tarafından takdim edildi. Her iki teknikte de yaygın iskemik inme ve olası tedavi yöntemleri 5 kaynaklanan beyin hasarının moleküler mekanizmaları tanımlamak için kullanılmaktadır. Bu nispeten noninvaziv bir metod sıçanlarda, farelerde transgenik ve nakavt suşları 6,7 yararlanmak kullanmak uzatıldı . Fokal serebral iskemi modeli için, intraluminal sütür internal karotid arter yoluyla MCA tabanı kapamak için ileri düzeydedir. Katlanması zaman belirli bir süre sonra dikiş spontan reperfüzyon taklit eder, ancak sütür de kalıcı olarak muhafaza edilebilir. Bu video, kademeli bir biçimde farelerde intraluminal MCAO prosedürü gerçekleştirmek için iki ana yaklaşım gösteren yanı sıra potansiyel sakıncaları ve tuzaklar anlayışlar olacaktır. Iskemik beyin dokusu daha sonra beyin enfarktüsü 8 ölçüde değerlendirmek için 2,3,5-triphenyltetrazolium klorür (TTC) ile boyanan olacaktır .

Intraluminal orta serebral arter tıkanıklığı (MCAO) modeli deneysel iskemik inme modelleri arasında en sık kullanılan model. Burada Lazer Doppler flowmetre kılavuzu ile ayrıntılı olarak tüm model ve onun temsilcisi sonuçları gösterecektir.

Fare lazer Doppler flowmetre Rehberlik İskemik İnme intraluminal Orta Serebral Arter Tıkanıklığı (MCAO) Model

İnme, dünyada üçüncü öncü ölüm nedeni ve birincil engellilik nedenidir; Amerika Birleşik Devletleri'ndeki tahmini maliyeti ise 70 milyar dolara yakındır...

Bu video makalesinde, orta serebral arter oklüzyonu veya MCAO olarak bilinen iskemik inmenin bir fare modelini sunuyoruz. Koil ile MCA oklüzyonunun orijinal yönteminde, orta serebral arteri tıkayarak kapatmak için ortak karotis arteri boyunca küt uçlu bir sütür ilerletilir. Bu yöntem, ortak karotis arterinin kalıcı oklüzyonu ile sonuçlanır.Longa tarafından yapılan metodolojik bir modifikasyon, eksternal karotis arter yoluyla orta serebral artere erişim sağlar. Bu yöntem, deneysel iskemik inme modelleri arasında komon karotis arterin fonksiyonunu ve distal dolaşımını korur. Sıçanlarda ve farelerde intralüminal filament orta serebral arter tıkanıklığı modeli, sıçanlarda ilk tanımlanmasından bu yana en sık kullanılan modellerden biridir; başlangıç modeline yönelik çeşitli modifikasyonlar yayınlanmış olup, günümüzde Longa modifikasyonu en belirgin varyasyondur.Bu model daha az invazivdir ve hem kalıcı hem de geçici iskeminin kontrollü bir şekilde gerçekleştirilmesini kolaylaştırır. İntralüminal filament orta serebral arter tıkanıklığı modeli, internal karotis artere bir monofilament yerleştirilmesini ve orta serebral artere giden kan akışını engelleyene kadar ilerletilmesini içerir. Bu model, tekrarlanabilir orta serebral arter bölgesi infarktları sağlar ve sütürün geri çekilmesinden sonra reperfüzyona olanak tanır.Bu teknikte enfarkt boyutunun, sütür çapı, sütürün silikon veya poliol lizin ile kaplanması veya filamentin kendisinin yerleştirilme uzunluğu gibi birçok spesifik faktörden etkilendiği görülmektedir. Bu videoda, bu modelin adım adım nasıl uygulanacağını ve bu yöntemin kullanımına ilişkin birçok potansiyel hata ve dezavantajın nasıl önleneceğini göstereceğiz. MCA tıkanıklığı için 7.0 monofilaman naylon sütür kullanılacaktır.Naylon sütürün ucuna bir ısı kaynağı yaklaştırılarak köreltülmelidir. Köreltilen uç düz ve pürüzsüz olmalı ve yaklaşık bir ila iki milimetre uzunluğunda olmalıdır. Uç köreltildikten sonra, sütür yaklaşık 11 ila 13 milimetrelik toplam bir uzunluğa kesilmelidir.Süturun küt ucu, ucundan üç ila dört milimetresi kaplanana kadar silikona daldırılır ve kurumaya bırakılır. Sütur hazırlığındaki tüm adımlar steril koşullar altında gerçekleştirilmelidir. Fare tartıldıktan sonra, bir indüksiyon kamarası kullanılarak %4 isof fluorine ile anestezi indüklenir.Fare, termal bir battaniye üzerine yerleştirilmiş bir gazlı bez ped üzerinde pron pozisyonda konumlandırılır. Vücut çekirdek sıcaklığını 37 derece seviyesinde tutmak için, işlem boyunca bir yüz maskesi aracılığıyla anestezi sürdürülür. Tıraş edilmiş kafa bölgesi alkol, Betadine ve ardından tekrar alkol ile temizlenir.bgma'nın bir milimetre posteriorunda ve beş milimetre lateralinde kalvaryumu açığa çıkarmak için ciltte bir santimetrelik bir insizyon yapılır. Kan akışını izlemek için sağ paryetal kafatasının yüzeyine dik olarak esnek bir mikro uç yerleştirilir. MCA bölgesindeki kan akışı lazer Doppler akım görüntüleme ile izlenir.Hayvan tekrar sırtüstü pozisyona getirildikten sonra, manubrium ile çene arasında makasla orta hat boyunca bir boyun insizyonu yapılır. Alttaki yapıları, yani digastrik kası, sternocleidomastoideus kasını ve trakeayı açığa çıkarmak için çift alt çene (submandibular) bezleri künt şekilde ayrılır. Bu yapıların geri çekilmesi ve daha ileri diseksiyon, ortak karotid arteri, vagus sinirini ve internal juguler veni ortaya çıkarır; ortak karotid arter burada eksternal karotid arter ve internal karotid arter olarak ikiye ayrılır.Oksipital arter, bifurkasyon bölgesinden köken alırken de görüntülenebilir. COE'nin yönteminde, proksimal ortak karotis arteri vagus sinirinden dikkatlice ayrılır ve izole edilir. Ortak karotis arterinin etrafına üç gevşek kolye dikişi hazırlanır.Vagus sinirinin sütür içine sıkışmaması için özel dikkat gösterilmelidir. Eksternal karotis arter tanımlanır ve izole edilir. Daha sonra, bifurkasyonun iki ila üç milimetre distalinden koterize edilir.Kan akışını kalıcı olarak kapatmak için ortak karotis arterindeki en proksimal kol dikişi sıkılaştırılır. Akışın kesildiği, bazal kortikal perfüzyon değerlerinde yaklaşık %50 oranındaki düşüşle doğrulanır. Dikişin serbest uçları kırpılır. Retrograd kan akışını önlemek için ortak karotis bifurkasyonunun hemen öncesine bir damar klibi yerleştirilir.Ardından, damar klipsi ile ligatür arasında mikro makasla bir arteryotomi gerçekleştirilir. Bu işlem, küt uçlu sütürün ortak karotise yerleştirilmesine ve damar klipsine ulaşana kadar ilerletilmesine olanak tanır. Ortak karotis üzerinden geri akış sızıntısını önlemek için geri kalan iki gevşek kolye sütürü nazikçe sıkılır.Damar klempi geri çekilir ve küt uçlu sütür nazikçe internal karotis arterine ilerletilir. Doppler ekranında hafif bir direnç hissedilene kadar işlem devam ettirilir; bu durum bazal değerlere göre yaklaşık %80'lik bir düşüşle sonuçlanır. Retrograd kanamayı önlemek için iki kolye sütür güvenli bir şekilde sıkıştırılır.Fare şimdi uygun bir süre boyunca iskemi durumunda bırakılabilir. Reperfüzyonu simüle etmek için, uygun bir aralıktan sonra tıkayıcı süturlar geri çekilir. Doppler okumasındaki bir sıçrama, kollateral kan akışının yeniden sağlandığını gösterir.Sütür tamamen geri çekilir ve iki yaka sütürü uzun yöntemde tamamen sıkılarak düzeltilir. Orta serebral arteri kapatmak için farklı bir yol kullanılabilir. Öncelikle, sütür yerleşimi için yeterli uzunluk bırakılarak, eksternal karotid arter mümkün olduğunca distalden tanımlanmalı, izole edilmeli ve koterize edilmelidir.Ardından eksternal karotis arteri bölünür ve dalları da koterize edilerek kesilir. Eksternal karotis arterinin güdüğü retraktörle çekilir. Ortak karotis bifurkasyonunun hemen üzerinde, proksimal internal karotis arter çevresine iki adet gevşek kolye dikişi hazırlanır.Common carotid arter, bir damar klempi ile geçici olarak kapatılır. Bu işlem, bifurkasyonun hemen distalinde perfüzyon değerlerinde yaklaşık %50'lik bir düşüşle sonuçlanır. Internal carotid arter de benzer şekilde bir damar klempi ile klemplenir ve mikrosizeler kullanılarak geri çekilmiş external carotid stump'ının ucuna yakın bir bölgeden arterotomi gerçekleştirilir.Isıyla köreltilmiş dikiş, arteria carotis externa üzerinden yerleştirilir ve internal carotid arterdeki damar klembine ulaşana kadar ilerletilir. Proksimal internal carotid arter etrafındaki iki gevşek kolye dikiş, arter duvarına travma yaratmayacak şekilde, ancak reflü kan akışını önleyecek kadar nazikçe sıkılır. Ardından damar klembi internal carotid arterden çıkarılır ve tri palatine artery internal carotid arterden ayrılır.Sütür nazikçe ilerletilirken, içine doğru yeniden yönlendirmeyi önlemek için dikkatli olunmalıdır. Doppler okumasında ikinci bir düşüş gözlemlenir. Künt uçlu sütür orta serebral artere ulaştığında, retrograd kanamayı önlemek için kolye sütürleri tekrar sıkılmalıdır.Fare, uygun bir süre boyunca iskemi durumunda bırakılabilir. Kör uçlu sütürün geri çekilmesi, Doppler monitöründeki yükselişle belirtildiği üzere kan akışını yeniden sağlar. Sütürler tamamen çıkarıldıktan sonra, eksternal karotis arterinin güdüğü koterize edilir.Ameliyat sonrası kanamayı önlemek için ortak karotis arterinin açıklığını korumaya özen gösterilmelidir. Ardından, proksimal internal karotis arterdeki kollet sütürler gevşetilip kesilir ve kan akışını yeniden sağlamak için ortak karotis arter üzerindeki klips çıkarılır. Bu durum, Doppler okumasındaki ikinci bir sıçrama ile belirlenir.Fare bilinci geri kazandığında, nörolojik defisitler beş puanlık bir ölçeğe göre çeşitli zaman noktalarında değerlendirilebilir. Sıfır puan, gözlemlenebilir bir nörolojik defisitin olmadığını; hafif inmeye karşılık gelen bir puan, inme hemisferinin karşı tarafındaki ön patinin (PA) ekstemasyonunda başarısızlığı; orta şiddetteki inmeye karşılık gelen iki puan ise inme hemisferinin ters yönünde dönme davranışını tanımlar.Şiddetli inmeyi temsil eden üç puanlık bir skor, inme hemisferinin tersi yönünde düşme ile kanıtlanır. Dört puanlık bir skora sahip bir farede kendiliğinden motor aktivite görülmeyecektir. İnme hacmi ölçümü elde etmek için, beyin uygun bir zaman noktasında kafatastan çıkarılır.Reperfüzyon sonrası beyin bir matris dilimleyiciye yerleştirilir ve tüm serebral doku koronal olarak dilimlenir. İki milimetrelik aralıklarla serebellum ve olfaktör bulbuslar atılır. Her iki milimetrelik kesit, karanlıkta 37 derecede 20 dakika boyunca %2 TTC çözeltisine daldırılır.Beyin kesitlerinin dijital görüntüleri, TTC'nin canlı dokuyu kırmızıya boyadığını ve her kesitte infarktlı dokuyu soluk beyaz bıraktığını göstermektedir. Burada bir olarak etiketlenen infarkt alanı, burada iki olarak etiketlenen tüm ipsilateral hemisfer alanı ve burada üç olarak etiketlenen kontralateral hemisfer alanı Image J programı ile ölçülmüştür; tüm kesitlerin alanları ölçüldükten sonra, alan değerleri toplanıp kesit kalınlığı ile çarpılarak toplam hacimler hesaplanabilmektedir.Ödeme göre düzeltilmiş infarkt hacmini bulmak için şu formül kullanılır. Bu hacim, ipsilateral hemisfer hacminin bir yüzdesi olarak ifade edilir. MCO modeli tekrarlanabilir sonuçlar sağlar.Bununla birlikte, birkaç prosedürel faktör tekniğin uygulanmasını etkileyebilir. Süturun ucundaki silikon kaplama, sütur yüzeyini pürüzsüzleştirdiği ve endotelyal abrazyon veya damar perforasyon riskini azalttığı için önemlidir. Ayrıca, sütur kaplaması farklı deneysel hedefleri yansıtacak şekilde modifiye edilebilir.Uçtan üç ila dört milimetrenin ötesine yapılan kaplama, orta serebral arterin proksimalindeki arterleri tıkayarak toplam inme hacmini artıracaktır. Vagus sinirini kısıtlamamak için renkli sütürler dikkatle uygulanmalı ve AAL duvarı travmaya uğramayacak şekilde nazikçe bağlanmalıdır. Fare vücut sıcaklığı enfarktüs derecesini etkileyebileceğinden, prosedür boyunca sabit tutulmalıdır.Bu videoyu izlemenin cerrahi süreçte size yol göstermesini ve kendi deneyleriniz için sağlam bir başlangıç noktası sağlamasını umuyoruz. İzlediğiniz için teşekkür eder, deneylerinizde başarılar dileriz.

intraluminal-middle-cerebral-artery-occlusion-mcao-model-for-ischemic

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

İpliksi Orta serebral arter oklüzyonu farelerde iskemik inme eğitimi için ortak bir model.

Fare Modelleme İnme - Filament Model Orta Serebral Arter Tıkanıklığı

Biz video intraluminal monofilament kullanarak yetişkin farelerde orta serebral arter oklüzyonu üretmek için bir yöntem ortaya koymaktadır. Ayrıca beyin enfarktüsü ölçüde 2,3,5-triphenyltetrazolium klorür (TTC) ile boyanarak tarafından nasıl değerlendirileceğini gösterir.

Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Fare Modeli

Farelerde intraluminal orta serebral oklüzyon modeli sunuldu. Serebral infarkt ölçüde bir nörolojik skoru ve cresyl violet boyama, TTC alternatif boyama, paralel birçok ilgi belirteçleri test etmek büyük avantajı sunarak değerlendirilir.

Intraluminar MCAO Mouse Model: kresil Violet Boyama tarafından Serebral İnfarktı Değerlendirilmesi

Serebral iskemi Çeşitli hayvan modellerinde inme insanlık durumu simüle etmek için geliştirilmiştir. Bu protokol sıçanlarda iskemik inme için endotelin-1 (ET-1) bağlı orta serebral arter tıkanıklığı (MCAO) modeli anlatılmaktadır. Buna ek olarak, önemli hususlar, avantajlar, ve bu modelin eksiklikler ele alınmaktadır.

Rat Lazer Doppler Flowmetri Rehberlik ile İskemik İnme için Endotelin-1 Bağlı Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Modeli

Orta serebral arter oklüzyonu (MCAO) çeşitli kemirgen modelleri yaygın deneysel beyin araştırmalarda kullanılır. Burada, insan iskemik strok çoğunluğu tarafından uygulanan zarar tekabül eden bir boyutta tutarlı bir kortikal enfarktüs üreten transkraniyal sürekli uzak MCAO modelini göstermektedir.

Farelerde Modelleme İnme: Distal Orta Serebral Arter Daimi Pıhtılaşma

inme patofizyolojisini anlamak için, güvenilir modeller kullanmak önemlidir. Farelerde en sık kullanılan inme modellerinden birini anlatacağız Bu yazıda, orta serebral arter tıkanıklığı (MCAO) modeli olarak adlandırılan reperfüzyon ile (ayrıca lümen içi filament veya sütür modeli olarak adlandırılır).

Farelerde Orta Serebral Arter Tıkanıklığı ve Reperfüzyon Kaynaklı İnme Cerrahi Yaklaşım

Burada, basit dikişler ve bir kelepçe kullanarak geçici bilateral ortak karotis arter tıkanma ile retina iskemisinin bir fare modelini tarif ediyoruz. Bu model, kardiyovasküler anormalliklerin neden olduğu retina iskemisinin patolojik mekanizmalarını anlamak için yararlı olabilir.

Geçici Bilateral Ortak Karotid Arter Tıkanması sonucu İndüklenen İskemik Retina Yaralanmasının Murine Modeli

Deneysel inme araştırmalarında orta serebral arter tıkanma (MCAo) farklı modelleri kullanılmaktadır. Burada, serebrovasküler trombüsin spontan pıhtı lizisi veya tedavisi nedeniyle çıkarıldığı insan inmesini taklit etmeyi amaçlayan dış karotis arter (ECA) yoluyla geçici MCAo'nun deneysel bir inme modeli tanımlanmıştır.

Farelerde Modelleme İnme: Dış Karotid Arter yoluyla Geçici Orta Serebral Arter Tıkanıklığı

Bu protokol, orta büyüklükte bir enfarktüse ve mükemmel bir hayatta kalma oranına sahip benzersiz bir fare vuruşu modeli gösterir. Bu model, klinik öncesi inme araştırmacılarının iskemi süresini uzatmasına, yaşlı fareleri kullanmasına ve uzun vadeli fonksiyonel sonuçları değerlendirmesine olanak tanır.

Yaşlı Farelerde İnme Sonuçlarını İncelemek için Modifiye Transkraniyal Orta Serebral Arter Oklüzyon Modeli

Bu protokol, orta serebral arterin intraluminal oklüzyonu yoluyla farelerde geçici fokal serebral iskemi modelini açıklar. Ek olarak, manyetik rezonans görüntüleme ve davranış testleri kullanılarak sonuç değerlendirme örnekleri gösterilmiştir.

İnmenin Geçici Orta Serebral Arter Oklüzyon Modeli

Burada, C57BL/6J farelerde transkraniyal elektrokoagülasyon yoluyla distal orta serebral arter tıkanıklığı (dMCAO) modeli oluşturmak ve sonraki nörolojik davranışları ve histopatolojik özellikleri değerlendirmek için bir protokol sunuyoruz.

Distal Orta Arter Oklüzyonu Tekniği Kullanılarak Farelerde Akut İskemik İnme İndüksiyonu

Öğrenin fare lazer Doppler flowmetre kullanarak intraluminal orta serebral arter tıkanıklığı modelini. Bu yöntem iskemik inme araştırmalarında kan akışını izlemek ve tekrarlanabilir sonuçlar elde etmek için değerlidir.

Fare lazer Doppler flowmetre Rehberlik İskemik İnme intraluminal Orta Serebral Arter Tıkanıklığı (MCAO) Model

Daha fazla video keşfet