Name: Yayılma Depresyon Episodik ve Kronik Migren Sinir Bağışıklık Sinyalizasyonu Modelleme In Vitro /em (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-06-13T13:00:00.000+00:00
Duration: 16 min 13 s
Description: Keşfedin yayılma depresyonu ve migren sinir bağışıklık sinyalizasyonunu sıçan hipokampal kesit kültürleri kullanarak in vitro modelleme. Bu yöntem, migren tedavisi için yeni terapötik hedefler belirlemeye yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışma, Ulusal Nörolojik Bozukluklar Enstitüsü ve İnme (NS-19108), Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ulusal Enstitüsü (PO1-HD09402), Migren Araştırma Vakfı ve Beyaz Vakfı hibe ile desteklendi. Bayan Marcia P. Kraig kültür sistemlerinin hazırlanması ve bakım yardımcı oldu.

<ol><li>Kunkler, P. E., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+waves+precede+electrophysiological+changes+of+spreading+depression+in+hippocampal+organ+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Calcium waves precede electrophysiological changes of spreading depression in hippocampal organ cultures.</a> J Neurosci. 18 (9), 3416-3425 (1998).</li>
<li>Kunkler, P. E., Hulse, R. E., Schmitt, M. W., Nicholson, C., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+current+source+density+analysis+in+hippocampal+organotypic+culture+shows+that+spreading+depression+occurs+with+uniquely+reversing+currents%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Optical current source density analysis in hippocampal organotypic culture shows that spreading depression occurs with uniquely reversing currents.</a> J Neurosci. 25 (15), 3952-3961 (2005).</li>
<li>Hulse, R. E., Swenson, W. G., Kunkler, P. E., White, D. M., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monomeric+IgG+is+neuroprotective+via+enhancing+microglial+recycling+endocytosis+and+TNF-%CE%B1lpha%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Monomeric IgG is neuroprotective via enhancing microglial recycling endocytosis and TNF-αlpha.</a> J Neurosci. 28 (47), 12199-12211 (2008).</li>
<li>Hailer, N. P., Jarhult, J. D., Nitsch, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resting+microglial+cells+in+vitro%3A+analysis+of+morphology+and+adhesion+molecule+expression+in+organotypic+hippocampal+slice+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Resting microglial cells in vitro: analysis of morphology and adhesion molecule expression in organotypic hippocampal slice cultures.</a> Glia. 18 (4), 319-331 (1996).</li>
<li>Ransohoff, R. M., Perry, V. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglial+physiology%3A+unique+stimuli%2C+specialized+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Microglial physiology: unique stimuli, specialized responses.</a> Annu Rev Immunol. 27, 119-145 (2009).</li>
<li>Mitchell, H. M., White, D. M., Domowicz, M. S., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cold+pre-conditioning+neuroprotection+depends+on+TNF-%CE%B1lpha+and+is+enhanced+by+blockade+of+interleukin-11%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem+DOI%22%5BJournal%5D)">Cold pre-conditioning neuroprotection depends on TNF-αlpha and is enhanced by blockade of interleukin-11.</a> J Neurochem DOI. , (2010).</li>
<li>Mitchell, H. M., White, D. M., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strategies+for+study+of+neuroprotection+from+cold-preconditioning%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Strategies for study of neuroprotection from cold-preconditioning.</a> J Vis Exp. (43), (2010).</li>
<li>Kunkler, P. E., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reactive+astrocytosis+from+excitotoxic+injury+in+hippocampal+organ+culture+parallels+that+seen+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Reactive astrocytosis from excitotoxic injury in hippocampal organ culture parallels that seen in vivo.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 17 (1), 26-43 (1997).</li>
<li>Grinberg, Y. Y., Milton, J. G., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spreading+depression+sends+microglia+on+L%C3%A9vy+flights%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Spreading depression sends microglia on Lévy flights.</a> PLoS ONE. 6 (4), (2011).</li>
<li>Koroleva, V. I., Oitzl, M. S., Bures, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Threshold+of+synaptically+elicited+cortical+spreading+depression%3A+drug-induced+changes+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Electroencephalogr+Clin+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Threshold of synaptically elicited cortical spreading depression: drug-induced changes in rats.</a> Electroencephalogr Clin Neurophysiol. 60 (1), 55-64 (1985).</li>
<li>Gubern, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Validation+of+housekeeping+genes+for+quantitative+real-time+PCR+in+in-vivo+and+in-vitro+models+of+cerebral+ischaemia%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Validation of housekeeping genes for quantitative real-time PCR in in-vivo and in-vitro models of cerebral ischaemia.</a> BMC Mol Biol. 10, 57-57 (2009).</li>
<li>Tian, Y. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+quantification+of+ADAMTS+expression+in+an+animal+model+of+cerebral+ischemia+using+real-time+PCR%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Anaesthesiol+Scand%22%5BJournal%5D)">The quantification of ADAMTS expression in an animal model of cerebral ischemia using real-time PCR.</a> Acta Anaesthesiol Scand. 51 (2), 158-164 (2007).</li>
<li>Pfaffl, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+mathematical+model+for+relative+quantification+in+real-time+RT-PCR%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">A new mathematical model for relative quantification in real-time RT-PCR.</a> Nucleic Acids Res. 29 (9), e45-e45 (2001).</li>
<li>Bustin, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+MIQE+guidelines%3A+minimum+information+for+publication+of+quantitative+real-time+PCR+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Chem%22%5BJournal%5D)">The MIQE guidelines: minimum information for publication of quantitative real-time PCR experiments.</a> Clin Chem. 55 (4), 611-622 (2009).</li>
<li>Pusic, A. D., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammatory+gene+micro+array+profiling+demonstrates+%22T-cell-like%22+activation+after+recurrent+spreading+depression+-+implications+for+migraine+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Soc+Neurosci+abst%22%5BJournal%5D)">Inflammatory gene micro array profiling demonstrates "T-cell-like" activation after recurrent spreading depression - implications for migraine pathogenesis.</a> Soc Neurosci abst. , (2010).</li>
<li>Quinn, B., Graybiel, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+differentiated+silver+intensification+procedure+for+the+peroxidase-diaminobenzidine+reaction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histochem+Cytochem%22%5BJournal%5D)">A differentiated silver intensification procedure for the peroxidase-diaminobenzidine reaction.</a> J Histochem Cytochem. 44 (1), 71-74 (1996).</li>
<li>Caggiano, A. O., Kraig, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eicosanoids+and+nitric+oxide+influence+induction+of+reactive+gliosis+from+spreading+depression+in+microglia+but+not+astrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Eicosanoids and nitric oxide influence induction of reactive gliosis from spreading depression in microglia but not astrocytes.</a> J Comp Neurol. 369 (1), 93-108 (1996).</li>
</ol>

SD nitelikleri bugüne kadar bütün türlerin ve beyin bölgelerinde son derece korunmuş incelendiğinde beynin bir paroksismal pertürbasyon. SD neokorteks yaygın olarak incelenmiştir. Ancak, bu yapının nöral devre karmaşıklığı (hipokampus ile karşılaştırıldığında) yanı sıra uzun süreli dönemler için sükunet bağışıklık fonksiyonları ile in vitro neokorteks canlı tutmak için yetersizlik, uzun vadeli sonuçları tanımlamak için in vitro hazırlık olarak daha az kullanışlı hale SD duyarlılık. Buna karşın, hipokampus sadece SD en hassas olan beyin yapısı, aynı zamanda nöral aktivitenin SD duyarlılık modüle hangi neuroimmune anlamı tanımlamak için de uygundur daha basitleştirilmiş bir nöral devre yapısı ve fonksiyonu, bir archicortical yapıdır .

yayılma depresyon episodik ve kronik migren sinir bağışıklık sinyalizasyonu modelleme in vitro</em

Modeling Neural Immune Signaling of Episodic and Chronic Migraine Using Spreading Depression In Vitro

Migren ve kronik migren, dönüşüm, gelişmiş tedavi seçeneklerine ihtiyaç sağlık yükleri. Biz sinir bağışıklık sinyalizasyon, epizodik ve kronik migren için yeni tedavi hedefleri geliştirmek için bir araç olarak, yayılan depresyon (SD) ile in vitro olarak modellenmiş migren, duyarlılık modüle nasıl tanımlamak için çalışırlar . SD, migren aurası ve migren ağrısı muhtemel nedenidir. Paroksismal duyarlı beyin bölgeleri içinde yavaş yavaş yayar başlangıçta artmış nöronal aktivite ile tetiklenen nöronal fonksiyon kaybıdır. Normal beyin fonksiyonu için zarif hassas ve üzerinde tesadüf düşük düzeyde bağışıklık sinyal dayanır. Böylece, nöral bağışıklık sinyalizasyon muhtemelen elektriksel aktivite SD etkiler ve bu nedenle migren. Bütün hayvanlar SD Ağrı algılama çalışmaları, zorluklarla dolu, ancak bütün hayvanlar iyi SD trigeminal nosiseptif yolları aktive beri migren sistemleri biyoloji yönlerini incelemek için uygundur. Ancak, tek başına tüm hayvan çalışmaları deşifre SD hücresel ve sinirsel devre mekanizmaları kullanılabilir. Bunun yerine, çevre koşulları kontrol edilebilir, in vitro hazırlıkları gereklidir . Burada, akut dilimleri ve hipokampal dilim kültürlerin farklı avantajları sınırlamaları tanımak için önemlidir. Akut beyin dilimleri tetikler yalnız dilim hazırlanıyor beri bağışıklık sinyal ince değişiklikler ortaya: pro-inflamatuar değişiklikler, son günlerde, dilim canlandırmak için gerekli yüksek düzeyde oksijen gerginlik nedeniyle epileptiform davranış ve anoksik dilim merkezlerinde geri dönüşümsüz hücre hasarı. Latent astrositler, mikroglia ve sitokin düzeylerini göstermek; kültürleri yakından olgun trisynaptic fonksiyonu ile in vivo meslektaşı paralel yana aksine, biz olgun hipokampal dilim kültürlerde bağışıklık sinyal incelemek ve SD unanesthetized bir hazırlık kolayca indüklenir. Ayrıca, dilimleri uzun ömürlü ve SD, yaralanma olmadan bu hazırlık tek aracı kronik SD neuroimmune sonuçları modelleme yeteneğine güncel haline ardışık gün indüklenen olabilir ve bu nedenle belki de kronik migren. Elektrofizyolojik teknikler ve non-invaziv görüntüleme nöronal hücre ve SD tesadüf devre fonksiyonları ölçmek için kullanın. Sinir bağışıklık gen ekspresyonu değişkenleri (lazer diseksiyon mikroskobu ile) qPCR tarama, qPCR diziler, ve daha da önemlisi, cDNA amplifikasyon, tüm bölgesel, ya da belirli bir hücre gelişmiş kullanarak, interferon-gamma gibi ultra-düşük seviyesi hedefleri tespit için kullanımı ile ölçülür. örnekleme. Sitokin kaskad sinyalizasyon hücre-spesifik immün ile teyit çoğullanır gen ekspresyonu phosphoprotein ilgili tespit edilen hedefler ve phosphoprotein değişiklikleri ile değerlendirildi. Farmakolojik ve siRNA stratejilerini taklit ve SD bağışıklık sinyalizasyon modüle etmek için kullanılır.

Migren ve kronik migren, dönüşüm, gelişmiş tedavi seçenekleri ihtiyacı büyük sağlık yükleri vardır. Biz modellenen, sinir bağışıklık sinyalizasyon migren duyarlılık modüle nasıl tanımlamak isteyen<em&gt; In vitro</em&gt; Yeni tedavi hedefleri geliştirmek için bir araç olarak, hipokampal dilim kültürlerinde yayılan depresyonun kullanarak.

Yayılma Depresyon Episodik ve Kronik Migren Sinir Bağışıklık Sinyalizasyonu Modelleme In Vitro</em

Migraine and its transformation to chronic migraine are healthcare burdens in need of improved treatment options.  We seek to define how neural immune ...

Bu videonun amacı, hipokampal dilim kültürlerinin, migren aurasının ve belki de migren baş ağrısının altında yatan en olası neden olan depresyonun yayılmasına yatkınlığı modüle eden nöral bağışıklık sinyalini deşifre etmek için nasıl kullanılabileceğini göstermektir. Yayılan depresyon, hipokampal dilim kültürlerinde kolayca uyandırılır. Kültürler haftalarca in vitro olarak tutulduğundan, bireysel hücre tiplerinin davranışı uzun süreler boyunca ölçülebilir, taklit edilebilir ve modüle edilebilir.Bu özellikle nöral immün sinyalleme çalışması için önemlidir. Olgun hipokampal beyin dilimleri hareketsiz bir bağışıklık durumuna ulaştığından, yayılan depresyonun bağışıklık tepkileri, modern moleküler biyolojik teknikler kullanılarak anestezinin potansiyel olarak karıştırıcı etkileri olmadan değerlendirilebilir. Bir dilimde en az 50 hücreden yaklaşık 90.000 hücreye kadar sinyal veren sitokinlerin hassas tespiti buna göre belirlenebilir.Hipokampal beyin dilimi kültürleri, migreni hafifletmek için yeni nöral immün terapötiklerin geliştirilmesinde kullanım için idealdir. Benim adım Yian Berg ve bu Richard Craig'in laboratuvarından ve Chicago Üniversitesi Tıp Merkezi Nöroloji Bölümü'nden Aya Puss ve Heidi Mitchell. Bugün, sıçan hipokampusu, bitler, kültürler ve yayılan depresyonun düşük seviyeli bağışıklık sinyalizasyonunun çalışmasını göstereceğiz.Depresyonun yayılması, artmış sinaptik aktivite patlaması ile tetiklenen ve daha sonra hızlı bir şekilde tüm aktivitenin geçici bir kaybıyla takip edilen paroksismal bir nöral olaydır. Artan kanıtlar, düşük seviyeli bağışıklık sinyalizasyonunun beyindeki sinaptik aktiviteyi etkileyebileceğini ve karşılığında etkilenebileceğini göstermektedir. Sitokinlerin depresyonun yayılmasına ve bunun sonucunda migren aurasına ve belki de migren baş ağrısına karşı duyarlılığı modüle ettiğini varsayıyoruz.Burada tanımladığımız prosedürler, potansiyel olarak kafa karıştırıcı bağışıklık hücresi aktivasyonunu en aza indirmek ve düşük seviyeli bağışıklık sinyallerini tespit etme yeteneğimizi artırmak için tasarlanmıştır. Bu, en geniş nöral bağışıklık sinyali dizisini ve bunun yayılan depresyon ile etkileşimlerini tespit etmemizi sağlar. Bu işleme başlamak için, cam tüpleri 4,5 milimetre uzunlukta keserek toprak elektrotları yapın.Ardından, kesilen bölümleri her iki uçta kısaca ateşle parlatın. Daha sonra, 100 mililitre bir molar potasyum klorürü kaynatın, üzerine 3.5 gram agar ve 0.5 gram EDTA ekleyin. Berrak sarı bir çözelti elde etmek için karışımı sürekli karıştırın.Her cam tüpün üzerine bir parça kısa esnek boru yerleştirin. Daha sonra ılık potasyum klorür agri çözeltisini cam tüpe ve esnek boruya kısa bir mesafe çekin. Emmeyi serbest bırakın ve potasyum klorür agarın cam tüpün açık ucundan yavaşça damlamasına izin verin.Agar damlarken, açık cam tüpün ucuyla bir parça buza dokunun, bu da agarın elektrot ucunda jelleşmesini ve cam tüp tüpüne geri çekildikten sonra jelleşmemesini sağlayacaktır. Agar jölelendikten sonra, agra'nın konumunu değiştirmeden esnek tüpü nazikçe çıkarın. Cam tüplerde, 1,5 mililitrelik bir santrifüj tüp rafının her bir oyuğuna 0,5 mililitre bir molar potasyum klorür koyun.Ardından, uçları nemli tutmak için her bir potasyum klorür afil cam tüpünün ucunu ayrı oyuklara yerleştirin. Ardından, bir hemostat ile 80 santimetre uzunluğunda 15 gauge gümüş bir tel tutun. Tezgahın üzerine tutulan bir zımpara tahtasından teli kazıyarak dört tarafın her birini temizleyin.Bundan sonra, teli dört santimetre uzunluğunda kesin. Onları 20 ila 30 dakika boyunca çamaşır suyu ile doldurulmuş bir parıldama şişesine koyun. Temizlenmiş gümüş yüzeyin üzerine sağlam bir gümüş ila gümüş klorür kaplama yerleştirmek için, teli ikiye bükün ve yaklaşık dört ila altı milimetre açıkta bırakarak potasyum klorür agar ile doldurulmuş cam tüpe yerleştirin.Daha sonra gümüş teli ve telin küçük bir kısmını içeren cam tüp ucunu, potasyum klorür agarın kurumasını önlemek için suya dayanıklı ve esnek bir yapıştırıcı olan goop ile kaplayın, tüm elektrotlar için tekrarlayın ve tutkalın gece boyunca kurumasını bekleyin. Çizimden sonra, elektrotları beş mililitre bir molar potasyum klorür ve 25 miligram EDTA ile sintilasyon şişelerinde saklayın. Dört santigrat derecede flakon başına yaklaşık beş ila altı elektrot.Filamentli bo silikat cam tüpler ile kayıt elektrotları yapın. Daha sonra, yaklaşık 20 santimetre uzunluğunda Teflon kaplı platin meridyeni keserek uyarıcı bir elektrot yapın. Daha sonra uzunluğu ikiye bükün, gevşek uçları gevşek bir kare düğüme bağlayın ve düğümden telin uçlarına yaklaşık iki santimetre bırakın.Telin diğer ucunu bir hemostat ile tutarken düğümü bir masanın üzerine yerleştirilmiş bir elektrikli kutu matkabının aynasına sabitleyin. Tel sıkıca bükülene kadar matkabı kısa bir süre açın ve kapatın. Platin meridyum bükümlü telleri kurşun tellere bağlamak için, önce platin meridyum bükümlü teli bir tezgah üstüne bantlayın ve bükülmüş telin bir serbest ucuna bir konsantre hidroklorik asit birikintisi bırakın.Ardından, soyulmuş ucu bükülmüş tel ucuna bitişik bir kurşun tel üzerine yerleştirin ve ince uçlu bir havyadan ısı uygulayın, ardından iki tel sıkıca bağlanana kadar lehimleyin. Açıkta kalan kablo bağlantısının üzerine kısa bir uzunlukta ısıyla daralan makaron geçirin ve ısı ateşi ile büzülün. 15 santimetrelik bir pipetin ucunu parlatın ve bükülmüş platin meridyen telini pipetten aşağı doğru yönlendirin.Elektrotun her iki ucunu da kapatmak için su itici bir epoksi kullanın. Son olarak, stereoskopik gözlem altında uyaran izolatörüne bağlantı için kurşun tel uçlarına muz tapaları takın. Elektrot ucunu PBS'ye yerleştirin ve bükülmüş tellerin kenarlarından herhangi bir kabarcık geliyorsa, elektrot uçlarının yalnızca kesik ucundan gelen elektrolitik üretilen kabarcıkları arayın.Tellerin uzun eksenlerine sağlam bir yalıtım sağlamak için tek kenarlı bir tıraş bıçağı kullanarak elektrodu enine kesin. Anormal uyaran etkilerini çözmek için sorun giderirken, yeni kesilmiş bir elektrot ucu yapmaya çalışın. Bir diğer önemli adım, bir dilim kültür eki ve yaklaşık 1,0 santimetre aralıklı iki adet 1,0 x 12 milimetre cam çubuk üzerine oturan 35 milimetrelik bir kültür kabından oluşan kayıt kaplarını hazırlamaktır.Cam çubuklar, cam tüplerin ısıtılması ve ardından forseps ile tabana bastırılmasıyla çanak tabanına tutturulur. Statik kayıt koşulları için, tabağa 1,5 mililitre ortam ekleyin. Bunu takiben, 10 milimetre genişliğinde ve üç ila dört santimetre uzunluğunda bir parça steril pamuğu ıslatın.1.0 mililitre ortamda, pamuğu uzun eksen boyunca ikiye katlayın ve ek parçanın iç duvarı boyunca yerleştirin. Steril forseps ile ıslak pamuk, bulaşık neminin korunmasına yardımcı olur. Üç sıkıştırılabilir dört milimetre uzunluğundaki boru parçası, ek parçanın etrafına eşit aralıklarla yerleştirilmiştir.Gaz değişimine izin vermek için çanağı polivinil klorür film ile sıkıca kapatın. Ardından, fazla polivinil klorürü çıkarmak için orta dikey duvarının etrafını tek kenarlı bir tıraş bıçağıyla kesin. Film, 0.2 hertz'de 100 mikrosaniye darbelerle yaklaşık üç alan potansiyeli uyandırır ve bir yanıtı tetiklemek için yeterli olan yaklaşık bir ila beş mikroamperlik bir akımla başlar.Kayıt elektrodunu, alan potansiyeli maksimum olana kadar parametal nöron uzun ekseni boyunca artışlarla hareket ettirin. Ardından, bu konumda bir kayıt elektrodu ile akımı artırın ve yaklaşık 10 ila 20 mikro amperlik maksimum akım tepkisine dikkat edin. Son olarak, trans sinaptik olarak uyarılmış yayılan depresyon eşiğini belirlemek için deneyler için yarı maksimal uyaran yoğunluğunu kullanın.10 hertz'de darbe başına 100 mikrosaniyelik tek patlamaları manuel olarak uyandırmak için stimülasyon paradigmasını değiştirin. Yayılan depresyon tetiklenene kadar uyaran patlaması başına akım yoğunluğunu kademeli olarak artırın. Lumlarda yayılan depresyon eşiğini bildirin, bir saat boyunca her dokuz dakikada bir depresyonun yayılmasını tetikler.Ayrı dijital sinyal işleme sistemleri aracılığıyla üç alanlı hızlı potansiyel ve yavaş potansiyel değişikliklerini kaydedin. Son yayılan çöküntüden sonra, kültür ekini normal inkübasyon koşullarına geri getirin ve kültür kabı kapağını işaretleyin. Yayılan depresyonu yaşayan kültürü not etmek için, kültür hasadına kadar her üç ila dört günde bir ortam değiştirin.Bu prosedüre, ISO selektinini büyüme ortamında mililitre başına 20 mikrograma seyrelterek başlayın. Daha sonra dilim kültürleri görüntülemeden dört ila 10 saat önce normal inkübasyon koşullarında inkübe edin, mikroskop kamerasını, UV ışığını, sıcaklık kontrolünü ve gazları görüntülemeden en az bir saat önce açın. Ardından, görüntüleme için metamorf yazılımını kurun, bunu takiben, eki altta iki adet bir milimetre cam çubuk bulunan 35 milimetrelik bir kültür kabına yerleştirin.Ardından, ek parçanın duvarları ile kültür kabı arasına üç adet iki milimetrelik lastik boru yerleştirin. Ek parçayı daha da stabilize etmek için, ek parçanın içine ek bir mililitre ortama batırılmış 10 milimetre genişliğinde bir pamuk parçası yerleştirin. Nemlendirilmiş bir ortamı korumak için, kültür kabının üstünü polivinil klorür film ile sıkıca kapatın.Sıvı kaybını önlemek için, görüntülemenin odağının CA üç parametal hücre tabakası üzerinde olduğundan emin olun. İnce odak penceresinde beş x 10 x ve 20 x olarak faz resimleri çekerek dilimlerin yönünü not edin, aralık akımını sekiz ve doğruluğu tek tıklama olacak şekilde ayarlayın, zaman atlamalı pencerede odak içi bir görüntü sağlamak için odak bulun. Mikroglial hareketleri doğru bir şekilde yakalamak için zaman aralığını bir dakika ve süreyi altı saat olarak seçin.Görüntüleme, filmin sonunda dakikada bir defadan daha az sıklıkta olmamalıdır. PCR deneyleri için CY konuşma taraması ile hücre hasarını kontrol edin. Dilim kültürü eklerini daha sonra iki ila üç mililitre RNA'ya batırın ve daha sonraki işlemlere kadar üç güne kadar dört santigrat derecede saklayın.Hasat etmek için, bir cam bıçak kullanarak yabancı dokuyu çıkarın, dilimleri tek tek RNA'lara koyun. DNA'lar içermeyen 1.5 mililitre santrifüj tüpleri, 0.5 mililitre steril fosfat tamponlu salin içerir. İnce uçlu bir boya fırçası kullanarak, numuneleri bir dakika boyunca 10.000 RPM'yi stereotipik bir şekilde döndürün, böylece tüm dilimler tüplerinin aynı tarafına yapışır.PBS süpernatantını çıkarın ve numuneyi 500 mikrolitre triol içinde yeniden süspanse edin. Numuneleri eksi 80 santigrat derecede saklayın veya RNA ekstraksiyonuna kadar buz üzerinde tutun SI RNA yıkımından kaynaklanan protein ekspresyonu değişiklikleri, gümüş yoğunlaştırma ve müteakip densi metrik miktar tayini yoluyla geleneksel DAB immün boyamanın geliştirilmesiyle hassas bir şekilde değerlendirilebilir. Burada, CA üç parametal nöron tabakasına bir kayıt mikro elektrodunun yerleştirildiği ve dentat girusa bir bipolar uyarıcı elektrotun yerleştirildiği dilim kültürü elektrofizyolojik kayıt paradigması gösterilmektedir.Burada, yarı maksimal yanıtı oluşturmak için kullanılan, dentat girus stimülasyonu ile uyarılmış CA üç alan potansiyelinin bir örneği, burada, sonunda yayılan depresyonu tetiklemek için bir yoğunlukta kademeli olarak artan 10 hertz patlamasına CA üç alan potansiyeli tepkisini göstermektedir. Sağ altta. Burada örnek bir hayati bağışıklık hücresi gösterilmektedir.Bu görüntüleme, ilk kez, mikroglia'nın bir kısmının, sinaptik aktivite ile ters orantılı olan levy uçuşları olarak bilinen kırmızı ile gösterildiği gibi optimal bir arama modelinde uzun mesafeleri hareket ettirdiğini göstermektedir. CDNA'nın preem amplifikasyonu, hipokampal dilim kültürlerinde IFN gama'nın saptanmasına izin verir. Başlangıçta, bir referans gen RPL 13 A için BT 20.5 idi ve solda IFN gama tespit edilemedi.Bununla birlikte, sağda gösterilen Preem amplifikasyonundan sonra, IFN gama 29.0'da kolayca tespit edildi. RPL 13 A ile, sinyal amplifikasyonunda 12 kat artışı belirtmek için 14.1'de kaydedilen bir verimliliğin immünohistokimyasal doğrulaması burada gösterilmektedir. Peroksidaz diamin benzin immüno boyamanın farklılaştırılmış gümüş yoğunlaştırması, siRNA ile muamele edilen hipokampal dilim kültürlerinde siklofilin B üretiminin önemli ölçüde azalmasını ölçmek için kullanılır.Bu videoda özetlenen teknikler birkaç gün içinde gerçekleştirilebilir. Hipokampal dilim kültürlerimizin in vivo muadillerine çok yakın olduğunu ve bağışıklık sinyalizasyonunu incelemek ve depresyonu yaymak için ideal olduğunu vurgulamak isteriz. Bununla birlikte, hareketsiz bağışıklık ortamını kontrollü ve sahte koşullar altında tutmak esastır.Karıştırıcı immün aktivasyonu en aza indirmek için, kültürler steril koşullar altında tutulmalıdır. Aşırı kimyasal, mekanik veya termo bozulmalara maruz bırakılmamalıdırlar. Fizyolojik sitokin sinyalizasyonu femto molar seviyede gerçekleştiğinden, oldukça hassas ve tekrarlanabilir ölçüm teknikleri uygulanmalıdır.PCRA teknolojisi ve hassas proteomik teknikler kullanıyoruz. Son olarak, sitokinler hem pleiotropik hem de gereksizdir. Buna göre. Zaman içinde ölçülen multipleks sitokin hedefleri, bağışıklık sinyalizasyonunun burkulma, depresyon ve buna bağlı olarak migrene duyarlılığı nasıl modüle ettiğini incelemek için yararlıdır.

modeling-neural-immune-signaling-episodic-chronic-migraine-using

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Bu çalışmada yazarlar, ilk kez, yeni bir rapor, 3D-Sürükleyici ve in vivo olarak bir hastanın beyninin μ-opioid sisteminde kendiliğinden bir migren krizi etkisinden dolayı etkileşimli nöronavigasyon (3D-IIN).

3D-nöronavigasyon<em&gt; In Vivo</em&gt; Bir Spontan migren sırasında Hasta Beyin sayesinde

Bu makale, deneysel otoimmün ensefalomiyelit (EAE) modelinin indüksiyon ve skorlama yöntemlerini, çeşitli hastalık evrelerinde sırasıyla akış sitometrisi ve kantitatif PCR kullanılarak lenf düğümleri, dalak, kan ve omurilikteki immün hücre dağılımı ve mRNA sitokin seviyelerinin değerlendirilmesi ile birlikte açıklamaktadır.

Çeşitli Dokularda Bağışıklık Hücreleri Hastalık bağımlı Dağıtım Fareler ve Değerlendirilmesi Deneysel Otoimmün Ensefalomyelitli indüksiyon

Burada, nörovasküler birim bozulma deneysel otoimmun ensefalomiyelit içinde vivo sırasında araştırmak için protokolleri mevcut. Biz özellikle kan - beyin bariyerini geçirgenliği ve gelatinase etkinlik lökosit göç dahil glia limitans belirlemek nasıl adres.

Nörovasküler biriminin endotel ve gliyal engelleri bozulma Vivo deneysel otoimmun ensefalomiyelit sırasında görüntülenmesi

Kemirgenler migren semptomlarını bildiremezler. Burada, migrenli hastalarda en yaygın ve rahatsız edici semptomlardan biri olan ışıktan kaçınmayı ölçmek için yönetilebilir bir test paradigmasını (açık / karanlık ve açık alan testleri) açıklıyoruz.

Farelerde Işıktan Kaçınma Kullanarak Migren Benzeri Davranışların İncelenmesi

Migrenin en önemli belirtisi şiddetli baş ağrısıdır ve bunun meninksleri innerve eden duyusal nöronlar tarafından aracılık ettiği varsayılmaktadır. Burada, yüz aşırı duyarlılığını bir çıktı olarak kullanırken, maddeleri duraya minimal invaziv bir şekilde lokal olarak uygulamak için bir yöntem sunuyoruz.

Preklinik Bir Baş Ağrısı Modeli Olarak Farelerde Dural Stimülasyon ve Periorbital von Frey Testi

Bu protokol, miyelin oligodendrosit glikoprotein kullanılarak bir fare modelinde deneysel otoimmün ensefalomiyelitin indüklenmesini ve klinik bir skorlama sistemi kullanılarak hastalık sürecinin izlenmesini açıklamaktadır. Deneysel otoimmün ensefalomiyelit ile ilişkili semptomlar, hastalık sürecini kapsamlı bir şekilde değerlendirmek için fare femur mikro-bilgisayarlı tomografi analizi ve açık alan testi kullanılarak analiz edilir.

Deneysel Otoimmün Ensefalomiyelitin İndüksiyonu ve Çeşitli Değerlendirme Göstergeleri

Mevcut protokol, farelerde stabil ve tekrarlanabilir bir demiyelinasyon modeli oluşturmak için stereotaksik bir çerçeve yoluyla iki noktalı bir lizofosfatidilkolin enjeksiyonunu tanımlamaktadır.

Farelerde Lizofosfatidilkolin Kaynaklı Fokal Demiyelinasyon Modelinin Stably Olarak Kurulmuş İki Noktalı Enjeksiyonu

Deneysel otoimmün ensefalomiyelit (EAE), multipl sklerozun bir hayvan modeli olarak hizmet eder. Bu makalede EAE'de spinal kord inflamasyonu, demiyelinizasyon ve aksonal yaralanmayı skorlamaya yönelik bir yaklaşım anlatılmaktadır. Ek olarak, canlı farelerde aksonal hasarın değerlendirilmesini kolaylaştıran, fare serumundaki çözünür nörofilament ışık seviyelerini ölçmek için bir yöntem sunulmaktadır.

Deneysel Otoimmün Ensefalomiyelitte Merkezi Sinir Sistemi İnflamasyonu, Demiyelinizasyon ve Akson Hasarının Skorlanması

Deneysel otoimmün ensefalomiyelit, multipl sklerozun en yaygın kullanılan murin modellerinden biridir. Mevcut protokolde, her iki cinsiyetten C57BL / 6J fareleri, miyelin oligodendrosit glikoprotein peptidi ile aşılanır ve bu da esas olarak kuyruk ve uzuvların artan parezi ile sonuçlanır. Burada EAE indüksiyonu ve değerlendirme protokolünü tartışıyoruz.

İki Cinsiyette Multipl Sklerozun Modellenmesi: MOG35-55 ile İndüklenen Deneysel Otoimmün Ensefalomiyelit

Bu protokol, hafif bir travmatik beyin hasarını takiben yetişkin farelerde yayılan depolarizasyonları güvenilir bir şekilde tespit etmek için görüntüleme ve elektrofizyolojinin kombinasyonunu gösterir.

Farelerde yayılan depolarizasyonları görselleştirmek ve kaydetmek için görüntüleme ve elektrofizyolojiyi birleştirmek

Bu protokol, zaman kilitlemeden nörofizyolojik önlemlere uyumlu bir şekilde kemirgenlerde otomatik göz şaşılığının zaman içinde izlenmesi için bir yöntem sağlar. Bu protokolün, migren gibi ağrı bozukluklarının mekanizmalarını inceleyen araştırmacılar için yararlı olması beklenmektedir.

Fare Ağrısı Çalışmalarında Zaman Senkronizasyonu Davranışı ve Beyin Dinamikleri için Otomatik Bir Şaşılık Yöntemi

Keşfedin yayılma depresyonu ve migren sinir bağışıklık sinyalizasyonunu sıçan hipokampal kesit kültürleri kullanarak in vitro modelleme. Bu yöntem, migren tedavisi için yeni terapötik hedefler belirlemeye yardımcı olur.

Yayılma Depresyon Episodik ve Kronik Migren Sinir Bağışıklık Sinyalizasyonu Modelleme In Vitro

Daha fazla video keşfet