Name: Tanı Otopsi ve Sıçanlar ve Fareler Seçilmiş Doku ve Örnek Toplama (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-08-07T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 13 s
Description: Öğrenin sıçan ve farelerde tanı otopsisi yapmayı; organ, mezenterik lenf nodu ve beyin örneği toplama yöntemlerini keşfedin. Histopatoloji ile sağlık durumunu değerlendirin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

1. Nekropsi Hazırlık <ol><li> Herhangi bir brüt postmortem muayene (brüt nekropsi) önemli parçalarından hayvan tarih ve bulguların açıklama. </li><li> Histopatoloji slaytlar okuma veteriner patolog hayvan gördük ve arka plan bilgileri için size güveniyor. </li><li> Hayvan euthanize önce ne gördüğünüzü tam olarak açıklayınız. Örneğin, "dişi fare, kafese beş C57BL/6N; baş sağa doğru eğik" veya "kahverengi erkek sıçan suşu bilinmeyen; kuyruk yakın sirti yamali saç dökülmesi var, hayvan kaşıma. head ". </li><li> Net, açıklayıcı, nesnel bir dil kullanın. "Ilımlı", "hafif" ve "ciddi" olarak Modifiers düzeyleri arasındaki kesilecek bölgenin sınırları eğer yararlı olabilir. Yiyecek ya da ev eşyaları açısından nitelendiren şeyler genellikle tavsiye edilmez. </li><li> Hayvanlar, bulgular veya organların Tartı ve ölçüm genellikle yararlıdır. Bir "büyük dalak" başka bir gözlemci için normal dalak olabilir. Dalak 3cm x 1.5cm daha objektif bilgi sağlar tedbirler olduğunu söyledi. </li><li> Photodocumentation çok değerli olabilir. </li><li> Ilgili tüm iş sağlığı ve canlı hayvanlar, potansiyel olarak bulaşıcı karkasların veya formalin gibi kimyasal maddeler ile çalışmak için gerekli kişisel koruyucu ekipmanlar dikkat edin. </li></ol> 2. Brüt postmortem konumu ve kalp muayenesi, akciğer, karaciğer, böbrekler, dalak <ol><li> Hayvanın ötenazi için önce gerekli malzemeleri toplayın. Minimal, bu bir diseksiyon tahtası ya da benzer bir çalışma yüzeyi, forseps, makas, konteynırlar için etiket, fiksatif ve herhangi bir medya ya da toplama tüpleri / potansiyel gerekli olabilir bardak içermelidir. </li><li> Kısaca durum, davranış, ve hayvan hareketi değerlendirir. Solunum kalıpları (örneğin, hızlı, sığ) yanı sıra ayaktan yeteneği ve yürüme (örneğin, topallama, çizerek, titreme) dikkat edin ve kaydedin. </li><li> AVMA ilkelerine her zaman bağlı kalarak, kurumda standart prosedürlere göre hayvan Euthanize. </li><li> Deri ve tüy anormallikleri, zayıflama, veya dehidrasyon için hayvanın vücut kondisyonu değerlendirin. Herhangi bir yapay manipülasyonlar, implantlar veya cerrahi yara not edin. </li><li> Tüm dış deliklerini (kulaklar, gözler, burun, anüs, genital açıklıklar ve oral kavite) inceleyin. Diseksiyon kapsamı kullanımı daha yakın gözlem için tavsiye edilir. </li><li> Temiz bir diseksiyon kurulu veya benzeri bir çalışma yüzeyi sırt yatma ötenazi fare veya sıçan karkas yatırın. </li><li> Makaslar kullanılarak, cilt yansıtan ve karın duvarı incising, karın iç organları, tükürük ve klitoral / prepusyal bezleri ve servikal ve aksiller lenf düğümleri teşhir, cilt anüs çene ventrum tam uzunlukta insizyon. Sternumun üst akciğer lobları iyice incelemek için yeterince geniş bir alan açmak için, 2 göğüs kafesinin her iki tarafındaki yanal kadar keser, daha sonra üzerinden bir yaparak torasik organlar ortaya çıkarmak ve incelemek için göğüs kafesi kesin. </li><li> Kas-iskelet yapısı görünümünü inceleyin. </li><li> Anormallikleri bütün organları değerlendirin. Özellikle göğüs boşluğunda kalp ve akciğerler bulmak ve tanımlamak. Özellikle bulmak ve karın boşluğunda karaciğer, böbrekler ve dalak belirlemek. Not herhangi bir renk değişiklikleri, büyüklük farklılıkları, ve eksik veya mislocated organları. Yüzeylerin tutarlılık, herhangi bir ek doku (örneğin, kitleler), sıvı cepleri, ya da karın / torasik boşluklarında sıvı varlığında unutmayın. </li><li> Kalınlaşmış duvar, kitleler ve / veya kanama için özel bir dikkat göstererek, gastrointestinal içeriğini sistem, ya da içeriğini eksikliği dikkat edin. Herhangi bir anormallik parankim kontrol etmek için bir neşter veya ustura bıçağı ile böbrekler (orta hat-boyuna sol bölümünde, sağ-kesit, ancak off-center) İnsizyon. Mezenter lenf düğümleri ve / veya kitleler için kontrol edin. </li><li> Tıkanıklıkları, sıvı cepleri, kanama veya diğer anormallikleri arıyorsanız, ürogenital sistem inceleyin. </li></ol> 3. Postmortem toplama, kalp, karaciğer, böbrekler, ve dalak histopatoloji için <ol><li> (NBF) tamponlu formalin,% 10 nötr uygun bir miktar dolu etiketli konteyner (ler) uygun boyutta toplayın. 20:01 oranı fiksatif bir doku elde etmek için% 10 NBF miktarını ayarlayın. </li><li> Dorsal yatma fare veya sıçan karkas temiz bir diseksiyon kurulu veya benzer çalışma yüzeyine yerleştirin ve doku ortaya çıkar. </li><li> Doku forseps ve makas kullanılarak karkas çıkarın. </li><li> Doku, yağ ve gereksiz bağ dokusu yakından kaldırmak için kesilmiş olmalıdır. Doku kan temiz olmalı, gerektiğinde durulama normal kullanım (veya fizyolojik) tuzlu su). Dokularda durulama için distile veya musluk suyu asla kullanmayın. </li><li> Doku% 10 NBF konteyner içine yerleştirin. </li></ol><ol><li> % 10 NBF uygun miktarda dolu etiketli konteyner (ler) uygun boyutta toplayın. 20:01 oranı fiksatif bir doku elde etmek için% 10 NBF miktarını ayarlayın. </li><li> Temiz bir diseksiyon kurulu veya benzeri bir çalışma yüzeyi sırt yatma fare veya sıçan karkas yerleştirin. </li><li> Trakea, kalp ve akciğerler Açığa. </li><li> Makas ve forseps kullanma ventral göğüs ve boyun bölgeleri örten deri ve kas çıkarın. </li><li> Makas ve forseps kullanma, göğüs kafesi, akciğer lobları iyice incelemek için yeterince geniş bir alan açmak için 2 göğüs kafesinin her iki tarafındaki yanal kadar keser, daha sonra üzerinde tek bir klavikula yakın yaparak kalp ve akciğerler açığa çıkarın. </li><li> Trakea üzerinde olanlar da dahil olmak üzere, sternum ve kaburga çene kadar uzanan boyun kasları kesip. </li><li> Makas, kaburga kafesinin ön kenar altında takın ve trakea üzerinde kemik bölümü kaldırmak için, her iki tarafta, 2 kesimler yapmak. </li><li> Forseps ile trakea çene yakın tutun ve forseps üzerine yerleştirilen makas ile trakea yoluyla tamamen kesmek </li><li> Tüm torasik dokular hafifçe kadar makas ile ventral doku bağlantıları kırpma, forseps kullanarak trakea yukarı römorkör (trakea, akciğerler, kalp, bu bazen "koparmak" denir) vücut çıkarıldı. </li><li> Akciğerlerin çalışma yüzeyinin düz yatırın. </li><li> Trakea çevresinde sıkı çekin özen dikiş materyali veya mutfak sicim gevşekçe bir parça bağlarlar. </li><li> Bir şırınga fiksatif ile doldurun ve trakea girmek için yeterince küçük bir iğne takılır. Fareler için 26 gauge iğne ile 1 ml veya 3 ml şırınga iyi çalışır. Sıçanlar için 18 gauge bir şırınga ile bir 5ml şırınga iyi çalışır. </li><li> Trakeanın ağzına iğne takın ve iğne çevreleyen trakea tutmak için forseps kullanabilir. Fiksatif ile ciğerlerine doldururken yavaş yavaş başlayın. </li><li> Akciğerleri tam şişirilmiş kadar doldurun. Aşırı ya da underinflate etmeyin. Fiksatif akciğerler tamamen şişirmek için gerekli miktarı, yaş, gerginlik ve hayvan sağlığı ile değişir. <ol><li> Aşırı-enflasyon sızan ve akciğer dokusunda köpük sıvı tarafından tespit edilir. </li><li> Underinflation, tüm alanlarda, düz ve dolu değil görünmesini akciğerler tarafından tespit edilmiştir. </li></ol></li><li> Trakea iğne çıkarın. </li><li> Dikiş materyali veya akciğerlerin fiksatif dışarı akışı önlemek için trakea çevreleyen dize sıkın. </li><li> Doku oranı yaklaşık 20:01 fiksatif kullanarak şişirilmiş akciğerler fiksatif içine yerleştirin. </li></ol> 5. Beynin postmortem toplama <ol><li> % 10 NBF uygun miktarda dolu etiketli konteyner (ler) uygun boyutta toplayın. 20:01 oranı fiksatif bir doku elde etmek için% 10 NBF miktarını ayarlayın. </li><li> Temiz bir diseksiyon tahtası ya da benzer bir çalışma yüzeyine ventral yatma ötenazi fare veya sıçan karkas yerleştirin. </li><li> Makas ve forseps kullanma, calvaria örten deri ve kas çıkarın. </li><li> Makaslar kullanılarak karkas tamamen baş kaldırmak. </li><li> , Küçük makas, foramen magnum, kafatası spinal kanal içine açılır açılış alt bıçağının kullanılması ve muhafaza makas ipuçları yukarı çekti, doğrudan ve calvaria orta hat üzerinden kesme başlar. </li><li> Forseps kullanarak, beynin maruz calvaria her iki yarısı da geri yansıtır. 1. Mümkün olduğunda, kafatası ise hala fiksatif içine maruz kalan bir beyin. Bu doku, gerekirse kafatası kaldırılması için önce firma olmayı sağlayacaktır. Birçok patologlar bölümlerde ise hala beyin kafatasının kesilmiş olduğunu tercih ediyor. </li><li> Bu yerçekimi doku kafatası düşmesine yardımcı olacak, böylece kafatası hafifçe çevirin. </li><li> Kavisli bir forseps kullanarak, dikkatli bir şekilde, beyin kapsamında ve beyincik doğru hareket eden, beynin dış kenarı boyunca ve koku alma lobları başlayan beyin altında forseps slayt. Yavaşça kafatası düşen beyin inhibe forseps herhangi bir bağ dokusu veya sinirlerin tutam. </li><li> Fiksatif için bir doku yaklaşık 20:01 oranını kullanarak beyin fiksatif içine yerleştirin. </li></ol> 6. Postmortem toplama mezenterik lenf düğümleri (MLN) <ol><li> PCR analizi için doku toplama aseptik teknik kullanılarak yapılmalıdır. Alev, sterilize otoklav veya eşdeğer steril aletlerin kullanılması gerekir. </li><li> Steril Eppendorf tüpleri ve steril makas ve forseps birleştirin. </li><li> Temiz bir diseksiyon kurulu veya benzeri bir çalışma yüzeyi sırt yatma ötenazi fare veya sıçan karkas yerleştirin. </li><li> Steril makas ve forseps kullanarak göğüs kafesi tabanı, genital bölgede ventral karın duvarı insizyonHem cilt ve kas kaldırma ve bağırsaklarda ortaya. </li><li> MLN çekum hemen bitişiğinde, kolon boyunca mezenterik doku karın boşluğuna bulunmaktadır. </li><li> MLN bulmak için, öncelikle, büyük bağırsak, virgül şeklinde bölümünde çekum bulun. Kolon, çekum uzanan ve genellikle fekal pelet varlığı tespit edilebilir. MLN çekum komşu kolon boyunca mezenter bulunmaktadır. Beyaz mezenterik doku doku sarı, oval veya küresel küçük yumru olarak tanımlanır ve genellikle etrafındaki mezenter ve yağ dokusu daha biraz daha kalın ve sıkı olabilir. Yönlendirme için gerekli anatomi ders kitapları kullanın. </li><li> Aseptik teknik ve steril aletler kullanarak tanımlayıcı bilgiler etiketli bir Eppendorf tüp içine MLN ve yer çıkarın. </li></ol> 7. Postmortem toplama solunum aspirat <ol><li> Gerekli malzemeleri birleştirin - steril pipet, steril makas ve forseps, steril solüsyonların kullanımı, solunum yolu ile yıkanmalıdır ve temiz bir diseksiyon kurulu veya benzer bir çalışma yüzeyi. </li><li> Kesme tahtası üzerinde sırt yatma ötenazi fare veya sıçan karkas yatırın. </li><li> Sıçanlarda bronşiyal aspirat, trakea yoluyla solunum yolu erişebilirsiniz. Trakea yoluyla veya nazofarengeal meatus yoluyla sıçan, erişim, burun aspirat. Farelerde bronş ya da burun aspiratlar, nazofarengeal meatus yoluyla solunum yolu erişebilirsiniz. </li><li> Nazal ve bronşial aspiratlar gerekmesi durumunda, ilk olarak bronşiyal aspirat gerçekleştirin. Burun aspirat yeni bir steril pipet kullanarak gerçekleştirin. </li><li> Trakeal erişim (sıçanlar için önerilen yöntem): <ol><li> Deri, derialtı dokularda açığa servikal bölgede uzak yansıtmaktadır. </li><li> Tükürük bezleri ve servikal trakea maruz kas çıkarın. </li><li> Lümen erişimine izin vermek için steril aletler kullanarak, trakea insizyon. Toplama boyunca asepsi (adım 7.7) koruyun. </li></ol></li><li> Nazofaringeal meatus erişimi (burun aspirat ve bronş aspirat, trakea küçük boyutu nedeniyle fareler için önerilen yöntem): <ol><li> Bu prosedür, burun aspirat ve bronş aspiratı her ikisi için de yapılabilir. </li><li> Alev sterilize veya otoklava aletleri kullanarak, temporomandibular eklem (çene) sever ve maksillanın uzak mandibula yansıtacak, nazofarengeal meatus açığa. Toplama boyunca asepsi (adım 7.7) koruyun. </li></ol></li><li> Örnekleme sıvı yaklaşık 1ml steril bir pipet içine çizin. Bu normal tuzlu su, fosfat tamponlu salin ya da Triptikaz Soya suyu. (Toplama aspirat göre, 7.8 veya 7.9 adıma gidin.) </li><li> Bronş aspirat: 1. Aseptik kaudal yönettiği, trakeal lümen içine pipet yerleştirin ve yavaş yavaş, bronş ve akciğer içine örnekleme sıvısı enjekte. Pipet, bronşlar ve akciğerlerden örnekleme sıvı çekiniz ve trakea pipet kaldırmak. Tüm sıvı pipet içine dönecektir. Daha fazla sıvı test için ihtiyaç duyulması halinde tekrarlayın. </li><li> Burun aspirat: <ol><li> Aseptik nazofarengeal meatus (fare) veya cranially yönettiği trakeal lümen (sıçan), pipet yerleştirin ve yavaş yavaş, burun boşluğuna örnekleme sıvı enjekte. </li><li> Nazal kavite, pipet ile, ya da zorla, burun orifis (burun) ya da saydam bir ağız damak görünür sıvı olarak menisküs şekillendirme olarak görülen boşluğu, içine sıvı gözlem nazal damak temas ile varılan olduğundan emin olun. Ağız yoluyla sıvı çıkmadan görülmemelidir. Eğer öyleyse, yeniden yönlendirmek pipet. </li><li> Pipet içine nazal kavite örnekleme sıvı çekiniz ve meatus veya trakea pipet kaldırmak. </li></ol></li><li> Test için uygun ortam veya konteyner aseptik örnek aktarın. </li></ol> 8. Temsilcisi sonuçları <img src="/files/ftp_upload/2966/2966fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1 fare Abdominal ve torasik organlar. Bu organlar, bir hayvan ilk açıldığında (organların hiçbiri, karın boşluğunda da mevcut diğer organların açığa taşındı) tipik olarak görülebilir.) Timus, b) kalp, c) akciğer, d) diyafram, e ) karaciğer , f) küçük bağırsak, g) çekum, h) mesane. <img src="/files/ftp_upload/2966/2966fig2.jpg" alt="Şekil 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 2"> Şekil 2 fare abdominal ve retroperitoneal organlar. Bağırsak ve karaciğer kaldırdı ve (veya kaldırılabilir) taşınır varsa, bu organların ca, kolon azalan, mide n görülmektedir. a) karaciğer (referans için), b) bağırsak (referans için), c), d) dalak, e) böbrekler, f), g) rahim. <img src="/files/ftp_upload/2966/2966fig3.jpg" alt="Şekil 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 3"> Şekil 3. Erkek üreme organları. Bu, daha büyük, cinsel olarak olgun erkeklerde daha büyük olabilir.) Seminal veziküller ve pıhtılaştırma bezleri, b) testis (fare ve sıçanlarda açık kalır kasık yüzük, karın boşluğu ile skrotum içine itti), c) mesane, d) prepusyal bezleri, e) epididim. <img src="/files/ftp_upload/2966/2966fig4.jpg" alt="Şekil 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 4"> Şekil 4 Kadın üreme organları) olmayan gravid rahim (fareler ve sıçanlar bir bicornuat rahim) b), yumurtalık yağ yastığı, c gömülü yumurtalık), mesane, d) klitoral bezleri (erkek prepusyal bezleri benzer) .

<ol><li>AVMA. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22AVMA+Guidelines+on+Euthanasia%22">AVMA Guidelines on Euthanasia</a>. , (2007).</li>
<li>Feldman, D. B., Seely, J. C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFeldman%2C+DB+%22Necropsy+Guide%3A+Rodents+and+the+rabbit%22">Necropsy Guide: Rodents and the rabbit</a>. , CRC Press. (1988).</li>
<li>King, J. M., Dodd, D. C., Roth, L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKing%2C+JM+%22The+Necropsy+Book%22">The Necropsy Book</a>. , 4th edn, C.L. Davis Foundation. (2006).</li>
<li>Kittel, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revised+guides+for+organ+sampling+and+trimming+in+rats+and+mice--Part+2.+A+joint+publication+of+the+RITA+and+NACAD+groups%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Toxicol+Pathol%22%5BJournal%5D)">Revised guides for organ sampling and trimming in rats and mice--Part 2. A joint publication of the RITA and NACAD groups.</a> Exp Toxicol Pathol. 55, 413-431 (2004).</li>
<li>Fox, J. G. Chapter 1. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKomarek%2C+V+%22The+Mouse+in+Biomedical+Research%22">The Mouse in Biomedical Research</a>. , Elsevier. Vol. 3: Normative biology, husbandry, and models 1-22 (2007).</li>
<li>Morawietz, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revised+guides+for+organ+sampling+and+trimming+in+rats+and+mice--Part+3.+A+joint+publication+of+the+RITA+and+NACAD+groups%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Toxicol+Pathol%22%5BJournal%5D)">Revised guides for organ sampling and trimming in rats and mice--Part 3. A joint publication of the RITA and NACAD groups.</a> Exp Toxicol Pathol. 55, 433-449 (2004).</li>
<li>Popesko, P., Raijtová, V., Horák, J. Colour Atlas of Anatomy of Small Laboratory Animals. 2, 1st edn, Saunders. vol. 2: Rat, mouse, hamster 91-106 (2002).</li>
<li>Ruehl-Fehlert, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revised+guides+for+organ+sampling+and+trimming+in+rats+and+mice--part+1%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Toxicol+Pathol%22%5BJournal%5D)">Revised guides for organ sampling and trimming in rats and mice--part 1.</a> Exp Toxicol Pathol. 55, 91-106 (2003).</li>
</ol>

Yazarlar, bu hizmetlerin ticari sunulmaktadır Charles River laboratuvar kemirgen teşhis laboratuvarı, tüm çalışanları vardır.

Veri toplama bir çalışmanın sonunda hayvanların postmortem muayene gerekebilir. Görülen şeyin iyi tanımlamak ve tüm dokularda incelemek unutmayın. Bu prosedürler, öncelikle nekropsi ve örnek toplama bulaşıcı hastalık gözetim için optimize etmek için tasarlanmıştır, ama en kolay prosedürleri belki de yalnızca bir alt kümesini istihdam olacağı hastalık şüphesi olayları ya da salgınlar odaklı araştırmalara uyarlanmıştır. Prosedürlerin çoğu aynı zamanda daha yaygın bir sonraki analiz için özel çalışma örneklerinin koleksiyo...

<table border="1"><tbody><tr><th> Reaktif adı </th><th> Şirket </th><th> Katalog numarası </th><th> Yorumlar </th></tr><tr><td> Kesim tahta </td><td> Thermo Electron Corp Kedi # 36.114 </td><td> Kedi # 36.114 </td><td></td></tr><tr><td> Küçük makas </td><td> ROBOZ </td><td> RS-5910, G204 </td><td> 23mm bıçakları, 3.5 &quot;uzunluk, düz </td></tr><tr><td> Orta makas </td><td> ROBOZ </td><td> RS-6808, G207 </td><td> 5 &quot; </td></tr><tr><td> Büyük makas </td><td> ROBOZ </td><td> RS-6826, G65 &quot; </td><td> 6.25 &quot; </td></tr><tr><td> Forseps-Eğri </td><td> ROBOZ </td><td> RS-8254 (M1/21004) </td><td> 4.5 &quot;, tırtıklı, hafif eğri </td></tr><tr><td> Forseps-Microdissecting </td><td> ROBOZ </td><td> RS-5238 </td><td> Hudson (Ewald) </td></tr><tr><td> Forseps-Doku Forseps </td><td> ROBOZ </td><td> RS-8160 </td><td> Sıçan diş </td></tr><tr><td> Alev sterilizatör </td><td> Oxford Laboratuvar Ürünleri </td><td> Bacti-ölü yakma fırını # 5889-001007 </td><td></td></tr><tr><td> Skalpel </td><td> Kanser Diagnostics, Inc. </td><td> Parmak Neşter # 60 # FS0060, Kedi </td><td></td></tr><tr><td> Pipetler </td><td> VWR </td><td> Pasteur pipetleyin 5 3 / 4 &quot;, Kedi # 14.672-400 </td><td></td></tr><tr><td> Otoklav çanta </td><td> Uygun Üretim Şirketi </td><td> Sterilizatör Çanta Kağıt Torbalar Kedi # 021.002 (3.100.923) E09110 </td><td> Pasteur pipetler için </td></tr><tr><td> Pipet ampul </td><td> VWR </td><td> Kedi # 56310-240 </td><td></td></tr><tr><td> Eppendorf tüpleri </td><td> Sarstedt </td><td> SafeSeal mikrotüp 2mL, Ref No: 72,695 </td><td></td></tr><tr><td> Eppendorf tüpleri </td><td> Argos </td><td> 5ml mikrotüp Cat # T20765-C </td><td></td></tr><tr><td> Şırınga </td><td> BD (Beckton Dickenson) </td><td> 1ml-309.602 3 ml-10 ml 300.910 5ml-309.603 Kedi # 309.604 20ml Kedi # 309.661 </td><td></td></tr><tr><td> Iğneler </td><td> BD </td><td> 26g-309.625 18G-305.195 </td><td></td></tr><tr><td> Nötr formalin solüsyonu </td><td> VWR </td><td> 20L% 10 NBF, Kedi # 16.004-128 </td><td></td></tr><tr><td> Tuzlu </td><td> ThermoScientific </td><td> Önbellekli Kan Bankası Tuzlu, Kedi # 23-309-178 </td><td></td></tr><tr><td> Triptikaz soya broth </td><td> Becton Dickenson </td><td> TSB: Susuz, Kedi # 211.825 </td><td></td></tr><tr><td> Fosfat tamponlu salin </td><td> Sigma Aldrich </td><td> HA Tampon, Kedi # P3813-10PAK </td><td></td></tr><tr><td> Formalin bardak </td><td> VWR </td><td> 4oz Kedi # 36.318-852 8oz Cat # 36.318-860 16oz Cat # 36.318-858 </td><td></td></tr><tr><td> Büyük formalin bardak </td><td> Oakridge Ürünler </td><td> 32oz konteyner Kedi # 0432-1100 </td><td></td></tr><tr><td> Ekstra büyük formalin fincan </td><td> VWR </td><td> HDPE Çok Amaçlı 160oz konteyner Cat # 89.038-282 </td><td></td></tr><tr><td> Dikiş materyali </td><td> Henry Schein </td><td> Örgülü ipek cerrahi dikiş, Ref # 100-5000, M766750 </td><td> Fare akciğer enflasyon için </td></tr><tr><td> Sicim </td><td> Staples </td><td> Kedi # Qua-46.173 </td><td> Sıçan akciğer enflasyon </td></tr></tbody></table>

tanı otopsi ve sıçanlar ve fareler seçilmiş doku ve Örnek toplama

Diagnostic Necropsy and Selected Tissue and Sample Collection in Rats and Mice

Teşhis veya bir hayvan koloni enfeksiyöz ajanlar keşfetmek yardımcı olmak amacıyla bir ötenazi hayvan toplanan olabilir birden fazla örnek türleri vardır. , Daha fazla histolojik işlem için dokuların doğru toplanması, test sonuçlarının kalitesini etkileyebilir. Bu makale, kalp kimlik, karaciğer, akciğerler, böbrekler, dalak, yanı sıra bu organların nasıl toplamak da dahil olmak üzere temel bir brüt muayene davranış açıklanmıştır. Ayrıca dört daha zor doku / numune toplama teknikleri gösterilmektedir. Doku doku içinde sırayla düzgün bir şekilde düzeltmek için ayrıntılı bir histolojik değerlendirme ve etkinleştirmek için bir fiksatif ile şişirilmiş olması gerekir gibi Akciğer toplama ve perfüzyon özellikle zor olabilir. Bu makale, fiksatif ile akciğer dokusunun en iyi fiksasyon 24 saat içinde ulaşmak için kaldırmak ve şişirmek için adım adım tekniği ile göstermektedir. Beyin dokusu yumuşak ve kolayca zarar toplama benzer zor olabilir. Bu makale, minimal doku hasarı ile kafatası beyin ortaya çıkarmak ve kaldırmak için adım adım tekniği ile göstermektedir. Mezenterik lenf nodu Enterik virüsler lenf nodu onlar dışkı döken daha uzun süre devam ettiği çok yaygın bulaşıcı ajanların algılamak için iyi bir örnek türüdür. Bu makale, bulma ve aseptik mezenterik lenf nodu kaldırılması için adım adım prosedürü göstermektedir. Son olarak, solunum yolu enfeksiyon ajanlarının belirlenmesi, burun ve / veya bronşiyal nekropsi az sıvı alınması aspiratlarda bakteriyel kültür veya PCR testi yapılabilir. Bu prosedür, solunum aspirat örneği almak ve bakteriyel kültür ve PCR testi için hazırlanıyor açıklamaktadır.

Bu makale, bir fare veya sıçan bir temel postmortem muayene yapılması için usul ve toplama temel organlarının yanı sıra, histolojik, mikrobiyolojik ve PCR değerlendirilmesi için daha zorlu örnek türleri açıklanmaktadır.

Tanı Otopsi ve Sıçanlar ve Fareler Seçilmiş Doku ve Örnek Toplama

Bir hayvanda enfeksiyöz ajanların teşhis edilmesine veya keşfedilmesine yardımcı olmak amacıyla, ötanazi uygulanmış bir hayvandan toplanabilecek birden fazla örnek tipi bulunmaktadır...

Bu prosedürün genel amacı, temel bir kemirgen nekropsisi gerçekleştirmektir. Bu işlem, öncelikle hayvan hakkında temel bilgilerin kaydedilmesiyle sağlanır. Prosedürün ikinci adımı ise viseral organların incelenmesidir.Üçüncü adım, organlar veya mezenterik lenf düğümleri gibi örneklerin toplanmasıdır. Nihai olarak, bir hayvanın sağlık durumu histopatoloji veya diğer tekniklerle belirlenebilir. Genellikle, nekropsiye yeni başlayan kişiler, kemirgen anatomilerini uygulama sırasında öğrendikleri için zorlanacaklardır.Bu yöntemler, bir araştırma kolonisindeki hayvanların sağlık durumuna ilişkin temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Çeşitli dokuların konumlarını öğrenmek ve normal dokuyu anormal dokudan ayırt etmeyi kavramak zaman aldığı için, bu tekniklerin görsel olarak gösterilmesi büyük önem taşımaktadır. Hayvanı ötanize etmeden önce, geçmişine dair bilgileri toplayın; fiziksel durum, davranış, cinsiyet, yaş, ağırlık, strain ve benzeri mevcut özelliklerini kaydedin.Bu kayıt, hayvanı ötanazi etmeden önce dokuları inceleyecek kişi için hayati bir yaş bilgisidir. Uygun kişisel koruyucu donanımın kullanıldığından emin olun. Bir diseksiyon tahtası, pens, makas, kap etiketleri, tespit edici, ortamlar ve toplama kapları hazırlayın.Hayvan ötanazi edildikten sonra, vücut kondisyonunu değerlendirin; deri ve tüy anormalliklerini, zayıflamayı ve dehidrasyonu kontrol edin. Ayrıca hayvan üzerinde yapay manipülasyon, implant veya cerrahi skar izleri olup olmadığını araştırın. Ardından, bir diseksiyon mikroskobu kullanarak tüm dış açıklıkları ayrıntılı bir şekilde inceleyin.Bunlar arasında kulaklar, gözler, burun, ağız, anüs ve genital organlar yer alır. Şimdi, hayvanı diseksiyon tahtasına sırtüstü yatırın, derisini pensle kaldırın ve makas kullanarak deriyi anüsten çeneye kadar kesin. Ardından, deriyi yanlara doğru sıyırın ve karın duvarı ile göğüs kafesini kesin.Göğüs kafesinin her iki yanından lateral olarak iki kesi yaparak torasik viseraları açığa çıkarın. Diyaframı kesin. Ardından, sternumun üzerinden enlemesine keserek göğüs kafesini çıkarın.Şimdi, açığa çıkan torasik ve abdominal organları inceleyin. Herhangi bir renk değişikliğini, olağan dışı kokuları, boyut farklılıklarını ve eksik veya yer değiştirmiş organları belirleyin. Organ yüzeylerinin kıvamını inceleyin ve herhangi bir doku kitlesini veya sıvı dolu cepleri not edin.Ayrıca, her iki boşlukta da sıvı olup olmadığını not edin. İncelemeye gastrointestinal kanal ile devam edin. Mezenteriyi, büyümüş lenf nodları veya doku kütleleri açısından inceleyin.Gastrointestinal kanalın içeriğini tanımlayın ve duvar kalınlaşması, kitle veya hemoraji açısından dikkatlice kontrol edin. Böbreklerin içini incelemek için, bir bistüri yardımıyla sol böbrekten boylamasına, sağ böbrekten ise orta hattın dışından enine bir kesit alın. Parankimi herhangi bir anormallik açısından kontrol edin.Şimdi erkeklerde ürogenital sistemi inceleyin. Seminal vezikülleri, testisleri, epididimisi, üreterleri ve dişilerdeki perüral bezleri tanımlayın. Uterusu, yumurtalıkları ve üreterleri tanımlayın.Ürogenital sistemde tıkanıklıklar, sıvı birikimleri, hemoraji veya diğer anormallikler olup olmadığını inceleyin. Bu incelemeleri tamamladıktan sonra, daha ayrıntılı analizler için hedef organları izole edin ve çıkarın. Genellikle kalp, karaciğer, böbrekler ve dalak, çıkarıldıkları sırada toplanır.Yeterli fiksasyon sağlamak için her organı bir fiksatöre daldırın veya dondurma ya da immünohistokimya gibi bu dokuları gerektiren bir protokolün ilk adımlarını takip edin. Genellikle dokular, bir hacim dokuya 20 hacim fiksatör oranında %10 NBF gibi bir koruyucuya daldırılır. Sıçanlarla çalışırken, nazal aspirattan önce bronşiyal aspiratı toplayın.Sırasıyla, tükürük bezlerini ve servikal kas yapısını açığa çıkarmak için deri ile deri altı dokuları servikal bölgeden uzağa doğru yansıtarak başlayın. Ardından, trakeayı açığa çıkarmak için bu dokuları uzaklaştırın. Trakeada üç milimetrelik bir insizyon yapın ve bir mililitre örnekleme sıvısı yüklü bir pipeti, trakeal lümene doğru çeyrek açıyla yerleştirin.Örnekleme sıvısını trakeadan akciğerlere doğru üç kez yavaşça pompalayın. Ardından örnekleme sıvısını geri çekin ve pipeti trakeadan çıkarın. Sıvının tamamı pipete geri dönmeyecektir.Bu nedenle, daha fazla sıvıya ihtiyaç duyulursa işlemi tekrarlayın. Farelerde test etmek için; nazal aspirat veya bronşiyal aspirat örneği almak için, sterilize edilmiş makas kullanarak nazofaringeal ATU'ya erişin.Temporomandibular eklemi kesin ve mandibulayı maksilladan uzaklaştırarak reflekte edin; böylece nazal aspirat toplamak için nazofarinks girişini açığa çıkarın. Farelerin nazofarinks girişine veya sıçanların trakeal lümenine bir mililitre örnekleme sıvısı yüklü bir pipet yerleştirin. Pipet kranial yöne doğru yönlendirilmeli ve içeri itilmelidir.Böylece uç, nazal palata temas eder. Bu noktada, örnekleme sıvısını yavaşça enjekte edin. Sıvı nazal kaviteye girdiğinde, nazal orifiste menisküsler oluşturacak ve ayrıca yarı saydam oral palate üzerinden de görünür olacaktır.Ancak, sıvı ağızdan dışarı çıkarsa pipeti yeniden yönlendirin. Tam olarak enjekte edildikten sonra, örnekleme sıvısını burun boşluğundan pipete geri çekin ve ardından pipeti çıkarın. İşleme, trakeyi pensle kavrayıp pensin hemen üzerinden keserek başlayın.Ardından, tüm toraks dokuları çıkarılabilene kadar doku bağlantılarını keserek trakeyi nazikçe yukarıya doğru çekin. Şimdi, akciğerleri çalışma yüzeyine düz bir şekilde yerleştirin ve trakenin etrafına bir parça sütür veya ipi gevşekçe bağlayın. Düğümü çok sıkmayın, aksi takdirde iğneyi trakenin içine geçiremezsiniz.Şimdi, bir şırıngayı fiksatif ile doldurun ve trakeyi iğneye sabitleyerek iğneyi trake açıklığına yerleştirin. Bir forseps yardımıyla, akciğerler tamamen şişene kadar onları yavaşça fiksatif ile doldurun. Kullanılacak fiksatif hacmi hayvanın yaşına, suşuna ve sağlık durumuna göre değişiklik gösterecektir.Dokular yetersiz şişirilmişse düz görünür; fazla şişirilmişse, doldurulduktan sonra dokudan köpüklü sıvı sızacaktır; fiksatifin akciğerlerden geri akmasını önlemek için trakeayı çevreleyen dikiş malzemesini veya ipi sıkılaştırın. Ardından, şişirilmiş akciğerleri fiksatife yerleştirin. Kadavrayı temiz bir diseksiyon tahtasına ventral rekumbent pozisyonda yerleştirin ve kalfanın üzerindeki deri ile kası çıkarmak için makas ve pens kullanın.Ardından, küçük bir makas kullanarak karkasın başını kesin. Alt bıçağı foramen magnum'a yerleştirin ve yukarı doğru bir hareketle kafa tası orta hattı boyunca kesin. Şimdi, kafa tasını pensle açarak beyni açığa çıkarın.Patolog, beynin kesitlerini kafatası içindeyken almaya tercih ederse, beyni açık olan kafatasını hemen %10 NBF içerisine yerleştirin. Aksi takdirde, başı burun kısmından pens veya parmaklarla kavrayın ve dokunun kafatasından düşmesine yardımcı olmak için kafatasını nazikçe ters çevirin. Olfaktör loblardan başlayarak, kavisli pensi beynin dış kenarı boyunca dikkatlice kaydırın.Penseti kranyum boyunca serebelluma doğru kaydırmaya devam ederken, aynı pensetle sinirleri nazikçe sıkıştırın. Beyin serbest kaldığında fiksatifin içine yerleştirin; mezenterik lenf düğümlerini bulmak için öncelikle bağırsağın sekum şeklindeki büyük kısmını bulun. Mezenterik lenf düğümleri, sekuma komşu mezenterdeki sarı oval veya küresel doku kitleleridir.Bunlar genellikle çevreleyen mezenter ve yağ dokusundan biraz daha kalın ve doku olarak daha serttirler. Dokuları başlangıçta ayırt etmek için bir diseksiyon büyüteci faydalı olabilir, ancak deneyim kazandıkça buna gerek kalmayacaktır. Pens ve makas kullanarak mezenterik lenf nodlarını izole edin, ardından bunları kültür, PCR veya histopatoloji için kullanılmak üzere bir saklama tüpüne aktarın.Protokol tamamlandıktan sonra, bir patolog veya bilim insanı için şunlar hazır olacaktır: ötanazi anındaki objektif ve sübjektif durumun yazılı bir raporu; dokuların fiksasyon öncesi objektif tanımı; fiksatif içindeki tüm ana abdominal ve torasik organlar; beyin ve mezenterik lenf düğümleri ile nazal ve bronşiyal aspirat örnekleri. Uzmanlaşıldığında, kısaltılmış bir nekropsi 30 dakikadan kısa sürebilir.Bu prosedürü gerçekleştirirken, hayvanın ve dokularının durumuna ilişkin gözlemlerinizi kaydetmeyi hatırlamanız önemlidir. Bu videoyu izledikten sonra, perfüze edilmiş akciğerlerin, mezenterik lenf düğümlerinin ve beynin toplanmasını da içeren eksiksiz bir kemirgen nekropsisinin nasıl yapılacağı konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.

diagnostic-necropsy-selected-tissue-sample-collection-rats

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu makale, endo-veya ectoparasitism algılamak için tarama sıçan ve fareler için çeşitli prosedürler açıklanmaktadır. Birkaç tanı testleri gösterilecektir, canlı hayvanlar üzerinde kullanım için uygundur ve bu hayvanın ötenazi sonra kullanılan hem de. Sıçan ve fare parazitlerin belirlenmesinde yardımcı Fotoğrafları dahil edilecektir.

Tanı Laboratuvarı Sıçanlar ve Fareler Ecto-Endoparasites

Video, odak oluşturma testi yoluyla birden fazla fare organında Zika virüsünü ölçmek için bir prosedürü göstermektedir. İşlem, memeli hücre tek tabakalarının virüsle enfekte olmuş doku homojenatları ile enfekte edilmesini ve ardından viral yayılmayı önlemek için metil selülozun kullanılmasını içerir. Daha sonra, organa özgü enfektivitenin hassas bir şekilde ölçülmesini ve ölçülmesini sağlamak için immün boyama kullanılır.

Enfekte Bir Farenin Organlarındaki Virüs Titrelerini Ölçmek için Odak Oluşturan Bir Test

Bu video, donmuş sıçan beyin dokusunun enzimatik sindirim ve mekanik öğütme kullanılarak tek hücreli bir süspansiyona ayrışmasını göstermektedir. Hazırlanan hücreler, akış sitometrisi veya gen ekspresyon analizi gibi sonraki uygulamalar için etanol ile sabitlenir ve geçirgenleştirilir.

Donmuş Sıçan Beyin Dokusundan Tek Hücreli Süspansiyon Elde Edilmesi

Biz burada, formalinle fiksasyonlu, parafine gömülü sıçan merkezi sinir sistemi (CNS) ve periferik lenf nodu (LN) doku kesitlerinde çift immün boyama için optimize edilmiş, ayrıntılı bir protokol sunuyoruz.

Sıçan Santral Sinir Sistemi immunohistokimyasal Analizi ve Çevresel lenf nodu Doku Bölümler

Memeli beyninin nörokimyası birçok nörolojik ve sistemik hastalıkta değişmiştir. Serebral metabolitlerin karakteristik profilleri, beyin dokusunun ham ekstraktlarına dayalı olarak verimli bir şekilde elde edilebilir. Bu amaçla, metabolit konsantrasyonlarının (metabolomikler) ayrıntılı kantitatif analizini sağlayan yüksek çözünürlüklü NMR spektroskopisi kullanılır.

Doku Esansı Yüksek Çözünürlük Nükleer Manyetik Rezonans Spektroskopisi ile Sıçan Beyin metabolomic Analizi

Bu protokolün amacı, hücre tipine özgü gen ekspresyonunun, epigenetik belirteçlerin ve/veya protein ekspresyonunun sonraki analizi için belirli nöral hücre tiplerini sıralamak için floresanla aktive edilmiş hücre sıralama (FACS) tekniğini kullanmaktır.

Sıçan beyin dokusunda incelemek için THP kullanılarak hücre-tipi-spesifik gen ifadesi

Bu protokolün amacı, kuduz testi için tatmin edici doku örnekleri elde etmek için küçük ve büyük hayvanlarda güvenli Otopsi teknikleri göstermektir.

Büyük ve küçük hayvanlarda kuduz Necropsy teknikleri

Bu makale, bir sıçan modelinde orta hat laparotomi yoluyla keskin bipolektomi ile 5/6 nefrektomi için standart bir protokol sunmakta olup, büyük ölçüde metodik hassasiyet ve düşük teknik hata riski ile renal parankim redüksiyonu yoluyla böbrek yetmezliği durumunu indüklemeyi amaçlamaktadır.

Sıçanlarda Orta Hat Laparotomi ile Keskin Bipolektomi Kullanılarak 5/6 Nefrektomi

Bu çalışma, genellikle yağlı pankreas ile karakterize edilen basit obezite sergileyen obez sıçan modelleri oluşturmak için tekrarlanabilir ve standartlaştırılmış bir yöntem sunmaktadır. Ayrıca pankreas dokusu örneklemesi ve immünohistokimya için ayrıntılı protokoller içerir.

Tipik Yağlı Pankreas ile Obez Sıçan Modelleri Oluşturmak için Bir Metodolojinin Geliştirilmesi ve Doğrulanması

Teşhis Araçları Geliştirmek İçin Mikro-Elektro-Mekanik Sistemler (MEMS)

Öğrenin sıçan ve farelerde tanı otopsisi yapmayı; organ, mezenterik lenf nodu ve beyin örneği toplama yöntemlerini keşfedin. Histopatoloji ile sağlık durumunu değerlendirin.

Tanı Otopsi ve Sıçanlar ve Fareler Seçilmiş Doku ve Örnek Toplama

Daha fazla video keşfet