Tümörlerden Organoidlerin Hazırlanması: 3 Boyutlu İn Vitro Tümör Modeli

Tümör dokusunu küçük parçalar halinde kıyın. Parçaları sindirim tamponu olan bir tüpe aktarın. Hücreleri çevreleyen kollajen lifleri parçalanır ve doku matrisini bozar. Ardından, sindirilmiş parçaları pelet haline getirin ve sindirim tamponunun çoğunu atın. Peleti parçalamak için tüpü hafifçe vurun.

Çözüm şimdi çeşitli büyüklükte hücre kümelerinden oluşuyor. Hücre kümelerini bir tripsin ve bir ROCK inhibitörü çözeltisi içinde yeniden süspanse edin. Tripsin tümörü parçalamaya devam eder ve inhibitör hücre ölümünü önler. Düzenli aralıklarla, kümeleri parçalamak ve hücreleri dağıtmak için çözeltiyi pipetleyin. Daha sonra, hücreleri uygun konsantrasyonda matris çözeltisi içinde yeniden süspanse etti.

Matris kubbeleri oluşturmak için çözeltinin damlalarını bir kültür plakasına yerleştirin. Plakaları bir inkübatöre baş aşağı yerleştirin ve matrisin tamamen katılaşmasına izin verin. Ardından, hücre kültürü ortamını ekleyin ve sağ tarafı yukarı bakacak şekilde inkübe edin. Matris, organoidin üç boyutlu büyümesini desteklemek için bir iskele sağlar.

Kıyma işleminden sonra, tümör parçalarını 37 santigrat derecede 1,5 ila 2 saatlik sindirim için 15 mililitrelik bir sindirim tamponu tüpüne yerleştirin. Sindirimin sonunda, sindirilen dokuyu santrifüjleme ile çökeltin ve süpernatanı atın.

Hücre peletini gevşetmek için tüpü hafifçe vurun. Hücreleri, 10 mikromolar Y-27632 ROCK inhibitörü ile desteklenmiş 1 mililitre önceden ısıtılmış tripsin içinde 37 santigrat derecede 5 dakika boyunca yeniden süspanse edin.

İnkübasyonun sonunda, doku bulamacını standart P1000 pipet ucu ile beş kez ezin. 5 dakikalık ek bir inkübasyon ve ezme için tüpü su banyosuna geri koyun.

Matris kubbe kaplama için, sindirilmiş hücreleri 9 mililitre soğuk ortamda yıkayın, ardından hücreleri santrifüjleme ile toplayın. Hücreleri saymak için 1 mililitre taze ortamda yeniden süspanse edin ve saydıktan sonra hücreleri bir kez daha santrifüjleme ile toplayın. Tümör hücrelerini uygun matris hacminde seyreltin.

55 santigrat derece ısıtılmış 6 oyuklu bir plakanın her bir oyuğuna 200 mikrolitre matris hücre çözeltisini dikkatlice bırakın. Plakayı 2 dakika boyunca 37 santigrat derece inkübatöre baş aşağı yerleştirmeden önce kubbelerin oda sıcaklığında 20 dakika katılaşmasına izin verin.

Kubbeler tamamen katılaştığında, her bir oyuğa androjen R1881 ve ROCK inhibitörü ile desteklenmiş 2 mililitre prostat organoid ortamı ekleyin. Plakayı hücre kültürü inkübatörüne geri koyun.

• In vitro tumor models - Methods for studying tumor behavior in lab-controlled conditions.
• PeproTech Noggin - A protein used to regulate cellular processes in tissue culture.
• Tumor model - A method or process used to replicate tumor environment and behavior for scientific studies.
• Cell pellet - Cluster of cells collected at the bottom of a tube after centrifugation.
• ROCK inhibitor organoids - Compounds that prevent cell apoptosis during organoid creation.
• Noggin conditioned media - Media enriched with Noggin protein, used in cellular culture and experiments.
• Cell pellet in tube - Term refers to cells that have been concentrated by centrifugation in a sample tube.

• Introduce In vitro tumor models by defining this as a replicate of tumor behavior (e.g., in vitro tumor models).
• Key Concepts by summarizing principles involved in cell pellet creation (e.g., cell pellet).
• Underlying Mechanisms through visualizing the process of using ROCK inhibitor in organoid creation.
• Connect the process of tumor tissue mincing to the creation of a cell pellet and suspension in a matrix solution.

• What are in vitro tumor models and how to create a cell pellet in lab conditions?
• What role does the PeproTech Noggin play in the tumor model creation?
• How does the ROCK inhibitor assist in the creation of organoids?

• Practical Applications - Tumor models help study cancer growth and potential cures (e.g., in vitro tumor models).
• Industry Impact - Lab studies benefit the healthcare industry and the field of oncology (e.g., ROCK inhibitor organoids).
• Societal Importance - The research contributes to advancements in cancer treatment options (e.g., Noggin conditioned media).
• Link to Scientific Advancements - Understanding tumor behavior facilitates innovative treatment approaches.