Tümörlerden Organoidlerin Hazırlanması: 3 Boyutlu İn Vitro Tümör Modeli
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 3:17 dk. • April 30th, 2023
Tümör dokusunu küçük parçalar halinde kıyın. Parçaları sindirim tamponu olan bir tüpe aktarın. Hücreleri çevreleyen kollajen lifleri parçalanır ve doku matrisini bozar. Ardından, sindirilmiş parçaları pelet haline getirin ve sindirim tamponunun çoğunu atın. Peleti parçalamak için tüpü hafifçe vurun.
Çözüm şimdi çeşitli büyüklükte hücre kümelerinden oluşuyor. Hücre kümelerini bir tripsin ve bir ROCK inhibitörü çözeltisi içinde yeniden süspanse edin. Tripsin tümörü parçalamaya devam eder ve inhibitör hücre ölümünü önler. Düzenli aralıklarla, kümeleri parçalamak ve hücreleri dağıtmak için çözeltiyi pipetleyin. Daha sonra, hücreleri uygun konsantrasyonda matris çözeltisi içinde yeniden süspanse etti.
Matris kubbeleri oluşturmak için çözeltinin damlalarını bir kültür plakasına yerleştirin. Plakaları bir inkübatöre baş aşağı yerleştirin ve matrisin tamamen katılaşmasına izin verin. Ardından, hücre kültürü ortamını ekleyin ve sağ tarafı yukarı bakacak şekilde inkübe edin. Matris, organoidin üç boyutlu büyümesini desteklemek için bir iskele sağlar.
Kıyma işleminden sonra, tümör parçalarını 37 santigrat derecede 1,5 ila 2 saatlik sindirim için 15 mililitrelik bir sindirim tamponu tüpüne yer
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin