Mitokondriyal İzolasyon: İnsan Yumurtalık Kanseri Doku Örneğinden Mitokondriyi İzole Etme Tekniği
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 5:09 dk. • April 30th, 2023
Hücrenin güç merkezleri olarak bilinen sitoplazmik organeller olan mitokondri, kanserin ilerlemesi sırasında ciddi yapısal ve fonksiyonel değişikliklere uğrar.
Mitokondriyi izole etmek için, temiz kanserli dokuyu bir cam tabağa alın ve küçük parçalar halinde kıyın. Parçaları mitokondriyal izolasyon tamponu içeren bir tüpe aktarın. Hücreleri parçalamak ve organeller de dahil olmak üzere içeriklerini serbest bırakmak için numuneyi homojenize edin.
Karışımı düşük hızda santrifüjleyin. Bu, çekirdekler, doku kalıntıları ve herhangi bir sağlam hücre gibi daha yoğun bileşenleri peletleyerek süpernatantta mitokondri, mikrozomlar, peroksizomlar ve lizozomlar gibi daha az yoğun bileşenler bırakır. Süpernatanı toplayın ve yüksek hızda santrifüjleyin. Nispeten daha hafif olan mikrozomlar süpernatantta kalırken, ham mitokondri içeren fraksiyon altta peletlenir.
Süpernatanı çıkarın ve peleti uygun bir yoğunluk gradyan ortamında yeniden süspanse edin. Ham mitokondriyal fraksiyonu farklı yoğunluktaki ortamlar içinde katmanlayarak, bunları aşağıdan yukarıya doğru azalan yoğunluk sırasına göre düzenleyerek süreksiz bir yoğunluk gradyanı oluşturun. Çok yüksek hızda santrifüjleyin. Organeller, bağıl y
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin