Mezotelyal Hücre İzolasyonu: İnsan Omentum Dokusu Örneğinden Birincil Mezotelyal Hücreleri İzole Etme Tekniği

İnsan birincil mezotelyal hücreleri veya HPMC'ler, omentum veya periton boşluğunda bulunan yağ dokusu tabakası gibi birçok iç organı kaplar.

Mezotelyal hücreleri izole etmek için, fazla kırmızı kan hücrelerini veya RBC'leri çıkarmak için bir insan omentum örneğini uygun bir tampona batırarak başlayın. Ardından, omentumu bir cam tabağa koyun ve parçalara ayırın. Bu, dokuyu ayrıştırır ve HPMC'leri kontamine edici RBC'lerle birlikte serbest bırakır.

Parçaları konik bir tüpe aktarın ve istenen süre boyunca hareketsiz kalmalarına izin verin. Düşük yoğunluklu yağ bakımından zengin kıyma dokusu üste çıkarken, yoğun hücresel bileşenler dibe çöker. Ardından, HPMC'leri ve RBC'leri içeren alttaki sıvıyı yeni bir tüpe aspire edin.

Hücreleri toplamak için santrifüjleyin. Tampon içeren süpernatanı çıkarın. Peletleri mezotelyal bir büyüme ortamında yeniden süspanse edin ve istenen süre boyunca inkübe edin. Medya, HPMC'lerin RBC'lere göre seçici büyümesini kolaylaştırır.

Küboid şeklindeki insan mezotelyal hücrelerinin büyümesini doğrulamak için bir ışık mikroskobu kullanarak hücreleri gözlemleyin.

Cerrahi bir insan omentum örneği alındıktan sonra, örneği hemen oda sıcaklığında PBS'ye daldırın. Dal