JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 3:20 dk. • April 30th, 2023
Periton boşluğu, karın duvarı ile iç organların astarı arasındaki boşluktur. İntraperitoneal enjeksiyon için, canlı bir fareyi, farenin başı ventral karnı açıkta kalacak şekilde aşağı doğru eğilecek şekilde boyun bölgesinden tutarak başlayın.
Fareyi dizginlemek, hareketini kısıtlar ve karın organlarını diyaframa doğru kaydırır, böylece iğne yerleştirme sırasında organların kazara hasar görmesini önler.
Farenin karnının karşısındaki orta çizginin bitişiğinde, sağ alt kadranda, iğne batırmak için bir nokta bulun. Bu bölge çekumun delinme riskini önler.
Daha sonra, yumurtalık kanseri hücrelerinin tek hücreli bir süspansiyonunu içeren bir şırınga alın. İğneyi seçilen noktaya, sadece dış karın duvarına nüfuz etmek için yaklaşık yarım santimetre derinliğe kadar sokun. Son olarak, kanser hücresi süspansiyonunu yavaşça enjekte edin. Bu, hücrelerin periton boşluğu içinde verimli bir şekilde dağılmasını sağlar.
Fareyi kafesine geri koyun ve tümör büyümesi açısından izleyin. Periton boşluğu içindeki dokular, kanser hücrelerini çeken ve göçlerine ve kolonizasyonlarına yol açan ve sonunda tümör gelişimine katkıda bulunan spesifik kemotaktik molekülleri serbest bırakabilir.
Şırıngaya 500 mikrolitre floresan etiketli tek hücreli süspansiyon yükleyin. Ardından, enjeksiyondan önce hücre kesilmesini azaltmak için şırıngayı steril kapaklı 25 gauge bir iğneye koyun. Diğer elinizle fareyi tutarak, fareyi boynunun tırnağından tutun ve avuç içi ve işaret parmağını kullanarak kuyruğu tutun. Ardından, sol arka bacağınızı yüzük ve küçük parmak arasına sabitleyin. Karın organlarının travmatize olmasını önlemek için, fareyi enjeksiyon sırasında hareket edemeyecek şekilde iyice tutun.
Karın boyunca bir çizgi hayal edin ve hayvanın sağ tarafında ve orta hatta yakın bir nokta bulun. Giriş noktası, son meme ucunun kraniyal ve hafif medialidir. Çekumdan kaçınmak ve bağırsakların delinme riskini azaltmak için iğneyi farenin sağ tarafına sokmaya hazırlanın. İğneyi farenin karnının alt yan bölgesine yaklaşık 0,5 santimetre derinliğe kadar sokun. İğnenin bir kan damarına veya diğer periton organlarına nüfuz etmediğini doğrulamak için pistonu geri çekin.
Sıvı aspire edilmezse, numuneyi yavaş sabit basınç kullanarak enjekte edin. Ardından iğneyi çekin ve fareyi kafesine geri koyun. Keskin alet kabına atmadan önce şırıngayı tekrar kapatmayın.