Kanser Hücreleri için Optimal İnhibitör Tümör Tedavi Alanı Frekansının Belirlenmesi: TTFields'in Kanser Hücresi Canlılığı Üzerindeki Etkisini Değerlendirmek İçin İnvaziv Olmayan Bir İn Vitro Yöntem

Tümör Tedavi Alanları veya TTFields, kanser hücresi proliferasyonunu bozmak için alternatif elektrik alanları kullanır. TTFields'in kanserli hücreler üzerindeki etkisini in vitro olarak incelemek için, TTFields uyumlu yemekleri bir taban plakası üzerine monte ederek başlayın. Çanak duvarlara yerleştirilen bir çift elektrot, elektrik alanlarının dahili olarak iletilmesine yardımcı olur.

Monte edilmiş tabağın içine bir cam lamel yerleştirin. Lamel üzerine bir damla kanser hücresi süspansiyonu damlatın. Hücrelerin yerleşmesine ve lamel yüzeyine yapışmasına izin vermek için inkübe edin. Harcanan medyayı atın. Kanser hücrelerinin büyümesini ve genişlemesini desteklemek için taze bir büyüme ortamı ile destekleyin.

Elektrik alanı uygulaması sırasında bulaşık ısıtmasını telafi etmek için tertibatı soğutulmuş bir ortama aktarın. Ardından, düzeneği bir güç kaynağına bağlayın. Hücreleri istenen süre boyunca uygun bir elektrik alanına tabi tutun.

Hızla bölünen hücreler içinde, uygulanan alan, tübülin dimerleri ve septinler gibi yüklü moleküllerin kendi yönünde kuvvetlice hizalanmasına neden olur. Bu mekanizma, mikrotübül polimerizasyonu ve septin lifi lokalizasyonu gibi önemli mitotik olaylara müdahale eder. Ortaya çıkan mitotik arrest, tümör hücresi ölümüne yol açan apoptozu tetikler.

Başlamak için, kapaklı TTFields tabaklarını bir taban plakasına yerleştirin ve kontrol hücrelerini büyütmek için kullanılacak ek 8 tabak hazırlayın. Her tabağın altına 2 milimetrelik steril bir lamel yerleştirin. Daha sonra, bir mililitre DMEM ortamında dördüncü U-87 MG hücrelerine 5 kez 10 kez askıya alın.

Her bir tabakta kaplanmış uygun hücre sayısı, kullanılan hücre hattının özelliklerine bağlıdır. Hücre büyümesinin aşırı büyümesini önlemek için deneyden önce kalibre etmek çok önemlidir.

Her bir lamel üzerine yüzeyinde bir damla oluşacak şekilde 200 mikrolitre hücre süspansiyonu pipetleyin ve bulaşıkları kapaklarıyla kapatın. Hücrelerin yapışmasını sağlamak için tüm bulaşıkları gece boyunca 37 santigrat derecede, %5 karbondioksitte inkübe edin.

Hücreler bağlandıktan sonra, 200 mikrolitrelik bir pipet kullanarak ortamı lamellerden aspire edin. Ardından, her tabağa 2 mililitre tam büyüme ortamını dikkatlice pipetleyin. Sürgünün altına sıkışan hava kabarcıklarını serbest bırakmak için lamel kenarlarına steril bir pipet ucuyla hafifçe vurun.

Daha sonra, TTFields tedavisi başlayana kadar hücreleri 37 santigrat derecede,% 5 karbondioksitte inkübe edin. TTFields işlemine başlamak için, taban plakasını 37 santigrat derece inkübatörden çıkarın ve soğutulmuş bir karbondioksit inkübatöre yerleştirin.

Soğutmalı inkübatör sıcaklığı, elektrik alan yoğunluğunu belirleyecektir. TTFields'e karşı hücre duyarlılığına bağlı olan uygun yoğunluğu kullanmak önemlidir.

Ardından, düz kablolu bir dişi konektörü taban plakasına takın ve TTFields jeneratörünü AÇIK konuma getirin. TTFields in vitro uygulama sistemi için özel yazılımı açın. Deneyi yapan kişinin ve deneyi yapan kişinin adlarını girerek yeni bir etüt tanımladıktan sonra, her yemek için frekansı ve hedef sıcaklığı ayarlayın.

Yazılımda TTField'in tedavisini başlatmak için BAŞLAT düğmesine tıklayın ve tüm yemeklerin monitörde açık mavi görünüp görünmediğini kontrol edin, bu da doğru bağlantılarını onaylar. Bağlantıyı yeniden kurmak için, çanağı hafifçe aşağı bastırın ve çanak ekranda açık mavi görünene kadar yavaşça ileri geri döndürün.

Tedaviden 24 saat sonra, DURAKLAT'a tıklayarak yazılımdaki deneyi durdurun. Düz kablo konektörünü taban plakasından ayırın ve ardından taban plakasını laminer akış kabinine yerleştirin.

Ardından, bulaşıkların bulunduğu taban plakasını ve standart koşullarda yetiştirilen kontrol hücrelerini inkübatörlerinden çıkarın. Tüm yemeklerdeki ortamı taze tam büyüme ortamı ile değiştirin. Ardından, kontrol hücrelerini 37 santigrat derece,% 5'lik bir karbondioksit inkübatöre yerleştirin ve taban plakasını soğutmalı inkübatöre geri koyun.

Taban plakasını jeneratöre yeniden bağlayın. DEVAM butonuna tıklayarak tedaviye devam ediniz. Tedavi tamamlandıktan sonra, yazılımdaki DENEYİ SONLANDIR düğmesine tıklayarak deneyi bitirin. Ardından, sistemden yüklenen verileri kaydedin.

TTFields jeneratörünü KAPALI konuma getirdikten sonra, düz kabloyu taban plakasından ayırın ve sistemi inkübatörden çıkarın. Seramik kabı taban plakasından ayırmak için aşağı bastırın ve saat yönünün tersine çevirin.

Daha sonra, tedavi edilmiş TTFields ve kontrol lamellerini aseptik olarak daha fazla değerlendirme için taze besiyeri içeren steril Petri kaplarına aktarın.