Yumurta Pencereleme: Korioallantoik Membran Vaskülatürünü Ortaya Çıkarmak için Döllenmiş Tavuk Yumurtası Kabuğunu Açma Yöntemi

Döllenmiş bir tavuk yumurtasında, koryoallantoik zar veya CAM, iç yumurta kabuğu zarının altında bulunan oldukça vaskülarize bir tabakadır. Embriyo gelişimini destekleme işlevi görür.

Tam gelişmiş bir CAM'yi ortaya çıkarmak için, yumurtanın içini görselleştirmek için yumurta kabuğuna bir yumurta mumcusu (parlak bir ışık kaynağı) yerleştirerek başlayın. Dış ve iç yumurta kabuğu zarları ile yumurta içinde belirgin bir dallanma damar sistemi arasındaki hava hücresini bulun. Konumlarını harici olarak işaretleyin.

Bu noktalarda, alttaki beyaz kabuk zarını ortaya çıkarmak için yumurta kabuğunda küçük dairesel delikler açın. CAM'ı bozmadan veya albümin veya kan sızıntısına neden olmadan açıkta kalan zarı her iki yerde de nazikçe delin

Yumurtayı uzunlamasına tutarak, içeriden hava çekmek için doğal hava hücresi açıklığının üzerine emme uygulayın. Ortaya çıkan negatif basınç, CAM'ı ikinci açıklığın altına düşürür ve vasküler ağ üzerinde yapay bir hava hücresi oluşturur.

Yeri değiştirilen hava hücresinin ana hatlarını çizin. Hava hücresi-CAM sınırını bozmadan, dış çizginin birkaç santimetre içinde olacak şekilde yumurta kabuğunu kesin. Altta yatan CAM ve damar sistemini açığa çıkaran büyük bir pencere oluşturmak için kesik kabuğu çıkarın. Pencereyi canlı yumurtaların üzerine kapatmak için şeffaf bir film kullanın.

Gelişimin 7. veya 8. gününde, TAT tamamen geliştiğinde, yumurta döndürücüyü kapatın ve biyogüvenlik kabinindeki yumurta rafına yaklaşık 1 ila 3 yumurta yerleştirin. Işıklar kapalıyken, bir yumurtanın hava hücresinin yerini belirlemek ve işaretlemek için yumurta kabuğuna bir yumurta mumu yerleştirin. Ardından, büyük bir kan damarı ağı bulmak için yumurta mumunu kabuğun üzerinde hareket ettirin ve yumurtayı gerektiği gibi döndürün.

İdeal bir damar sistemi yumurtanın ortasına yakın bir yerde dallanacaktır. İmplantasyon için kullanılacak damar sistemini izlemek için bir işaretleyici kullanın. Davlumbazdaki ışığı tekrar açtıktan sonra, kabukta doğrudan hava hücresinin merkezi üzerinde küçük bir delik açmak için silisyum karbür taşlama taşı ile donatılmış kablosuz bir döner alet kullanın. Kabuğun çoğu çıkarıldığında, ancak beyaz, iç zar sağlam olduğunda, az önce gösterildiği gibi vasküler pencerenin açılacağı küçük bir delik daha açın. İkinci delik hazır olduğunda, beyaz iç zarı hava hücresi ve damar sistemi üzerinde nazikçe delmek için 18 gauge bir iğne kullanın ve CAM'ın değil, beyaz, iç zarın delinen alanın tamamı boyunca bozulmasına dikkat edin.

Davlumbaz ışığı tekrar kapalıyken, hava hücresinin yumurtanın ucundan damar sistemi üzerindeki alana aktarıldığını doğrulamak için yumurta mumlayıcısını kullanın. Gerekirse, orijinal hava hücresinin üzerindeki deliğin etrafına bir pipet kontrol cihazına yerleştirilmiş vakum hortumunu yerleştirin ve hava hücresini hareket ettirmek için kısa aralıklarla hafifçe emme uygulayın. Hava hücresinin yeni konumunun ana hatlarını, hava-CAM sınırının yaklaşık 0,5 santimetre içinde işaretleyin ve yeni hava hücresinin üzerindeki deliği kapatacak kadar büyük bir ambalaj bandı parçası sabitleyin.

Diğer iki yumurtayı gösterildiği gibi hazırladıktan sonra, yumurtaları kuluçka makinesine geri koyun ve deney için ek yumurtaları gösterildiği gibi 1 ila 3'lük gruplar halinde açın. Tüm yumurtalar açıldığında, yer değiştirmiş hava hücrelerine sahip 1 ila 3 yumurtayı biyogüvenlik kabinindeki yumurta rafına aktarın ve CAM veya damar sistemini bozmadan hava hücresi sınırı üzerinde küçük bir çizgi kesmek için dairesel bir kesme tekerleği ile donatılmış kablosuz bir döner alet kullanın. Kavisli makas kullanarak, kabukta bir pencere oluşturmak ve embriyonun canlılığını doğrulamak için kalan hava hücresinin etrafını kesin.

Canlı embriyolar geniş bir damar sistemi, berrak albümin, embriyo hareketi ve / veya görünür bir kalp atışı gösterecektir. Canlı olmayan embriyolarda, CAM opak görünebilir, eğer varsa, az sayıda damar mevcut olabilir ve embriyolar hareket veya kalp atışı olmadan küçük veya hiç olmayabilir. Semken forsepslerini kullanarak, steril bir pamuk topundan küçük pamuk parçaları çekin ve kabuk tozunu ve kalıntılarını temizlemek için canlı embriyoların CAM yüzeyini nazikçe kurulayın. Ardından, kabuk açıklığını CAM'a dokunmadan dörtte bir oranında 6 x 7 santimetrelik şeffaf bir film sargı parçasıyla kapatın ve yumurtaları, açılan pencere yukarı bakacak şekilde kuluçka makinesine geri koyun. Yuvarlanmaya devam eden yumurtaları desteklemek için bir parça yumurta rafı, yumurta döndürücünün kenarı veya başka bir uygun öğe kullanın.