Prostat Organoid Testi: Prostat Epitel Hücrelerinin Farklılaşma Kapasitesini İncelemek İçin Matris Jel Halka Bazlı Ex Vivo Kültür Tekniği

Prostat epiteli esas olarak bazal epitel ve luminal epitel hücrelerini içerir. Tek katmanlı bir bazal hücre, bezin dış astarını oluşturur ve luminal hücre sağkalımını destekler. Tersine, luminal hücreler lümeni kaplar ve prostata özgü proteinleri salgılar.

Prostat epitel farklılaşmasını ex vivo incelemek için, bazal prostat epitel hücrelerinin süspansiyonu ile başlayın. Süspansiyonu istenen oranda soğutulmuş bir bazal membran matrisi ile karıştırın. Bu karışımı, hücre itici bir kültür plakasının iç duvarının tabanının yanına pipetleyin. Karışımın kuyu çevresi boyunca bir halka oluşturması için plakayı döndürün.

Matrisin katılaşmasına izin vermek için plakayı inkübe edin. Kültürü tercih edilen bir medya ile destekleyin. Ortamdaki büyüme faktörleri bazal epitel hücrelerinin çoğalmasını destekler. Aynı zamanda, kültür kabının hücre itici doğası, hücreleri matris içinde 3D sferoidler oluşturmaya teşvik ederek herhangi bir hücre bağlanmasını önler.

Zamanla, sferoidler çok katmanlı epitel ile sınırlanmış lümenler geliştirir. Lümen astarlı bazal epitel hücreleri sonunda farklılaşır ve salgı luminal hücreleri oluşturur, bu da 3D glandüler yapılara yol açar.

Bu prosedüre, metin protokolünde