JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 3:08 dk. • April 30th, 2023
Hücre lizatı veya parçalanmış hücre içeriği içeren sıvı, protein ekstraksiyonları ve analizleri gibi sonraki işlemlerde uygulama bulur. Bu fraksiyonları incelemek, hücrelerin özellikleri ve işlevleri hakkında bilgi verir.
Organoid protein lizatlarını hazırlamak için, istenen bir bazal membran matrisinde yetiştirilen bir organoid kültürü ile başlayın. Harcanan kültür ortamını tabaktan çıkarın. Matrisin üzerine proteaz içeren sıcak ortam ekleyin. Matrisi tabaktan çıkarmak için art arda pipetleyin.
Karışımı inkübe edin. Ortamdaki proteolitik enzimler matrisi bozar ve organoidleri çözeltiye bırakır. Organoidleri enzim içeren süpernatanttan ayırmak için numuneyi santrifüjleyin.
Organoid peleti uygun bir protein lizis tamponunda yeniden süspanse edin. Numuneyi inkübe edin. Tampondaki deterjanlar, organoidlerin hücre zarlarını bozarak hücre içi içeriği çözeltiye bırakır. Aynı zamanda, tampondaki protein inhibitörleri, salınan proteaz ve fosfataz enzimlerini inaktive ederek substrat proteinlerinin bozulmasını önler.
Ayrıca, hücreleri tamamen bozmak için karışımı sonikleştirin. Nükleer zarf yırtılır ve nükleer proteinleri çözeltiye bırakır. Sonik dalgalar ayrıca salınan nükleik asitleri kes
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin