JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 4:27 dk. • April 30th, 2023
Prostat organoidleri esas olarak bazal epitel hücrelerinin bir dış katmanını ve merkezi bir lümen etrafında düzenlenmiş luminal epitel hücrelerinin iç katmanlarını oluşturur.
Tam montajlı görüntüleme, morfolojilerini ve heterojenliklerini korurken bozulmamış 3D organoidlerin incelenmesine izin verir. Boyamaya başlamak için, organoidlere hücresel bileşenlerini yerine kilitlemek ve böylece onları korumak için uygun bir fiksatif uygulayın. Fazla fiksatifleri çıkarmak için numuneyi yıkayın.
Bloke edici çözelti ve DNA boyama boyası kokteyli ile inkübe edin. Bloke edici solüsyondaki proteinler, hücrelerin spesifik olmayan bölgelerine pasif olarak bağlanır ve herhangi bir arka plan lekelenmesini azaltır. Aynı zamanda, DNA boyama boyası hücrelerin çekirdeklerini boyar.
İki kurucu hücre popülasyonu tarafından eksprese edilen spesifik antijenleri hedefleyen iki set primer antikor ekleyin. Primer antikorlara bağlanan iki farklı floresan-boya konjuge ikincil antikor ile inkübe edin. Bağlanmamış antikorları çıkarmak için numuneyi yıkayın.
Organoid mimarisinden ödün vermeden doku şeffaflığını artırmak için lekeli organoidleri sırayla artan konsantrasyonlarda yüzey aktif madde içeren şeker çözelt
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin