JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 2:10 dk. • April 30th, 2023
Tek hücreli örnekleme, aşağı akış analizi için kanser hücrelerinin bir süspansiyonundan tek bir canlı hücrenin izole edilmesini sağlar.
İzolasyona bir kanser hücresi süspansiyonu ile başlayın. Bu süspansiyonun istenen hacmini bir cam slayt üzerine aktarın. Parçacık hareketini azaltmak ve hücrelerin yerleşmesine izin vermek için slaytı bir süre rahatsız etmeden bırakın.
Şimdi, slaytı bir mikrokılcal uca bağlı bir mikromanipülatör ile donatılmış bir mikroskop altına aktarın. Bu yüksek hassasiyetli alet, numunedeki hücrelerle mikroskobik düzeyde fiziksel etkileşimi kolaylaştırır.
Mikrokılcal ucu tek bir hedef hücreye yaklaştırın. Emme uygulayarak, hedef hücreyi mikrokılcal damar içine toplayın. Şimdi, mikrokılcal damarı doğrudan istenen toplama tamponunu içeren bir tüpe aktarın.
Yakalanan tek hücreyi tampona bırakmak için mikrokılcal içeriği çıkarın. İzole edilmiş canlı tek hücreyi daha fazla analize kadar buz üzerinde saklayın.
Mikromanipülasyon için, 100 mikrolitre hücre süspansiyonunun tamamını bir cam slayt üzerine aktarın. Ardından, cam slaytı bir mikromanipülatör ile donatılmış bir mikroskoba yerleştirin ve hücrelerin 5 dakika oturmasına izin verin. Daha sonra, 0.2 mililitrelik PCR tüplerinde, 2 mikrolitre hücre lizis ana karışımını pipetleyin ve buz üzerine aktarın. 1 mikrolitre 1X fosfat tamponlu salinde tek bir hücreyi toplamak için mikromanipülatörü kullanın.
Daha sonra, hücreyi doğrudan 2 mikrolitre hücre lizis ana karışımına aktarın. Tüpün dibindeki sıvıyı toplamak için numuneleri 2000 x g'da 3 saniye boyunca hızlı bir şekilde döndürmek için bir masaüstü mikrofüj kullanın.