Lazer Yakalama Mikrodiseksiyonu Kullanılarak Tek Hücre Örneklemesi: Heterojen Bir Hücre Popülasyonundan Hedef Hücreleri Hasat Etme Tekniği

Lazer yakalama mikrodiseksiyonu, bir cam slayt üzerinde hazırlanan bir hücre karışımından tek bir hedef hücre elde etmeye yardımcı olur. Yüzeyinde UV geçirgen, biyokimyasal olarak inert bir zar ile kaplanmış uygun bir cam slayt alarak başlayın. Daha iyi hücre yapışması için daha hidrofilik hale getirmek için slaytı UV ışığına maruz bırakın.

Slaytı bir sitosantrifüj aparatına monte edin. Aparatın huni portuna hücre süspansiyonu ekleyin. Merkezkaç kuvvetinin konsantre olmasını ve cam slayt üzerindeki küçük bir alanda tek bir hücre tabakasını biriktirmesini sağlamak için sitosantrifüj. Sürgünün kurumasına izin verin.

Slaytı, numune tarafı yukarı bakacak şekilde bir lazer mikrodiseksiyon mikroskobu altına yerleştirin. İlgilenilen hücreyi çevreleyen bölgeyi tanımlayın. Şimdi, zar kaplaması ile birlikte hedef hücre içeren bölgeyi incelemek için lazer ışınını odaklayın. Ardından, lazer ışınının odak noktasını kaldırın ve basınç oluşturmak için darbeleyin. Bu enerji, mikrodisseke edilmiş bölgeyi, sürgünün üzerine yerleştirilmiş bir tampon içeren önceden monte edilmiş bir toplama tüpünün ters çevrilmiş kapağına fırlatır.

Tüpü alın ve kapağını kapatın. Tek hedef hücreyi içeren tamponu tüpün dibine getirmek için tüpü döndürün. Daha fazla analize kadar tüpü soğutun.

Lazer mirkodiseksiyon için, 300 mikrolitre hücre süspansiyonunun tamamını 5 dakika boyunca 300 x g'da zar kaplı bir slayt üzerine sitosantrifüj edin. Ardından, membran kaplı slaytı lazer mirkodiseksiyon yapabilen bir mikroskop üzerine yerleştirin. Daha sonra, 4.5 mikrolitre hücre lizis ana karışımını 0.2 mililitrelik PCR tüpünün kapağına pipetleyin.

Kapağı numunenin üzerine yerleştirin ve lazer mikrodiseksiyon ile tek bir hücreyi hasat edin. Bundan hemen sonra, PCR kapağında izole edilmiş hücreler olup olmadığını kontrol edin. PCR tüpünü lazer mirkodiseksiyon mikroskobundan çıkarın ve tüpü kapatın. Kısa bir sıkma ile tüpün altındaki tüm sıvıyı toplayın.