Kemodirençli Prostat Kanseri Hücrelerinin Oluşturulması: İn Vitro İlaca Dirençli Kanser Hücrelerinin Elde Edilmesi İçin Bir Prosedür

JoVE Encyclopedia of Experiments

Kanser Araştırmaları

0 görüntüleme • 4:33 dk • April 30th, 2023

Kemorezentli hücreler oluşturmak için, bir kültür şişesinde insan prostat kanseri hücresi süspansiyonu alarak başlayın. Hücre yapışmasını ve tek tabaka oluşturmak üzere bölünmelerini kolaylaştırmak için şişeyi inkübe edin.

Hücreleri optimum konsantrasyonda bir anti-kanser ilaç çözeltisi ile destekleyin ve inkübe edin. İlaç molekülleri hücrelere girer ve hassas hücrelerde apoptozu indükler.

Bazı hücreler, ilaçları periyodik olarak uzaklaştıran özel ilaç akış taşıyıcılarını veya pompalarını eksprese eder. Bu mekanizma ilaç birikimini önleyerek bu hücrelerin anti-kanser ilaçlarının etkisine dayanmasını ve kemodirençli hale gelmesini sağlar.

İlaç ve enkaz içeren ortamları kültürden aspire edin. Kemorezistans hücrelerin büyümesini desteklemek için taze ilaçsız büyüme ortamı ile takviye edin. Harcanan medyayı atın. Hücreleri kültür şişesinden ayırmak için tripsinize edin ve bir tüpe aktarın.

Hücreleri peletlemek için tüpü santrifüjleyin. Tripsin içeren süpernatanı çıkarın. Hücreleri taze büyüme ortamında yeniden süspanse edin. Hücreleri yeni bir kültür şişesinde büyütün.

Daha sonra, kemodirençli hücreleri aynı anti-kanser ilacının artan dozlarına maruz bırakmak için ilaç tedavisi ve hücre kültürü adımlarını tekrarlayın. Bu teknik, yüksek oranda kemorezence hayatta kalan hücrelerden oluşan bir havuz oluşturmak için tüm hassas hücreleri ortadan kaldırarak kültürü tarar.

Bu işleme başlamak için, 20 mililitre ortam içeren 150 santimetre karelik şişelerde DU145 veya 22Rv1 hücrelerini plakalayın. 24 saat sonra, hücreler yaklaşık% 70 ila% 80 birleşimde olduğunda, 5 nanomolar'da dosetaksel ekleyin.

72 saat sonra, ilaç içeren ortamı aspire edin ve taze dosetaksel içermeyen ortam ekleyin. Ortamı her 3 ila 4 günde bir değiştirin ve şişede klonlar görünene kadar 1 ila 2 hafta bekleyin. Medyayı aspire edin. Hücreleri 15 mililitre PBS ile dikkatlice yıkayın ve hücreleri şişe yüzeyinden ayırmak için 37 santigrat derecede 3 ila 5 dakika boyunca 4 mililitre% 0.05 tripsin-EDTA ile inkübe edin. Ardından, 8 mililitre taze ortam kullanarak tripsinlenmiş hücreleri şişeden yeniden süspanse edin.

Hücreleri işlenmiş tüm şişelerden toplayın ve santrifüjleme ile peletleyin. Bunu takiben, süpernatanı çıkarın. Hücre peletini 20 mililitre taze ortamda yeniden süspanse edin ve hücreleri 150 santimetre karelik şişelere yerleştirin.

24 saat sonra, hücreler yaklaşık% 70 ila% 80 birleşim noktasındayken, tekrar 5 nanomolar dosetaksel ekleyin. Klonlar şişede görünene kadar prosedürleri daha önce gösterildiği gibi tekrarlayın. Ardından, hücreleri tekrar 150 santimetre karelik şişelere koyun.

24 saat sonra, hücreler yaklaşık% 70 ila% 80 birleşim noktasındayken, onlara 10 nanomolar dosetaksel uygulayın. Aynı adımları dosetaksel dozunu artıran bir şekilde tekrarlayın ve her konsantrasyon işleminden sonra hayatta kalan klonları bir araya getirmeye devam edin. İşlemin sonunda, deneysel kullanıma hazır bir dirençli hücre havuzu elde edeceksiniz.

11:50

İnsan Hücre Lines Kemorezistans Yumurtalık Kanser Kök Hücreleri Zenginleştirme

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:41

Modelleme Kemoterapi Dayanıklı Lösemi

İlgili videolar

0 Görüntüler

07:25

Kollarındaki ve floresan Orthotopic Syngeneic fare modeli androjen bağlı ve kısırlaştırma dayanıklı prostat kanseri

İlgili videolar

0 Görüntüler

03:28

Fonksiyonel Kemorezistans Karakterizasyonu: Klonojenik Test Kullanarak Kanser Hücrelerinde İlaç Direncini Değerlendirmek İçin Bir Yöntem

İlgili videolar

0 Görüntüler

07:16

İnsan Prostat Kanseri Örneklerinden Kanser Kök Hücreleri İzolasyon

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:03

Prostat Kanseri Hasta Üretimi Tümör Hücreleri Sirkülasyon gelen Xenograftlarında Modeller Türetilmiş

İlgili videolar

0 Görüntüler

06:44

Prostat kanseri hücre modelleri Anti-Mitotik Ajan Docetaxel direnç üretimi

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:59

Sürücü yolları için seyir elde hedefe yönelik tedavi direnci: ilaca dirençli Subclone üretimi ve duyarlılık Gene Knock-down tarafından geri yükleme

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:54

Prostat kanseri genetiği Işlenmiş fare modelleri tümör Organoids üretimi

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:36

Genotipleri ve Mutasyonel Profilleri Farmakolojik Tepkilere Çeviren Araçlar Olarak Prostat Organoid Kültürleri

İlgili videolar

0 Görüntüler

Son güncelleme: 29 Ağustos 2026