JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 3:45 dk. • April 30th, 2023
Otofaji, lizozom adı verilen özel sindirim bölmeleri içinde istenmeyen sitoplazmik bileşenlerin ve organellerin bozulmasını kolaylaştıran hücre içi bir süreçtir. Otofajiyi değerlendirmek için, yeşil floresan proteinlere bağlı LC3 adı verilen otofajik belirteç proteinlerini eksprese eden prostat kanseri hücrelerinin yapışık bir kültürü ile başlayın.
Doğal olarak, prostat kanseri hücreleri, arginin amino asit sentezi için gerekli olan argininosüksinat sentaz enziminden yoksundur. Bu nedenle, bu hücreler, hayatta kalmak ve çoğalmak için ortam yoluyla harici arginin takviyesine bağımlıdır.
Daha sonra, hücreleri arginin deiminaz veya ADI ile tedavi edin. ADI, ortamdaki serbest arginini hidrolize ederek arginin tükenmesine yol açar. Sonuç olarak, hücreler metabolik strese maruz kalır ve dahili olarak otofajik bir tepki başlatır. Aynı zamanda, hücrelere, hücreler içindeki lizozomları etiketleyen kırmızı bir floresan boya uygulayın.
Otofaji sırasında, fagofor adı verilen fincan şeklindeki zarlı yapılar, hasarlı sitoplazmik bileşenlerin etrafında toplanır. Sonunda, çift zarlı veziküller veya otofagozomlar oluşturmak için otofajik işaretleyici proteinler LC3 ile konjuge olurken yüklerini gen
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin