Peptit Saflaştırma: Sindirilmiş Protein Lizatlarından Peptitleri Çıkarmak için RP-HPLC Tabanlı Bir Teknik

Peptitleri izole etmek ve saflaştırmak için, sindirilmiş peptitlerin bir karışımını içeren bir protein lizat süspansiyonu ile başlayın.

Karışımı trifloroasetik asit veya TFA bazlı reaktif ile muamele edin. Bu anyonik veya negatif yüklü reaktif, peptitler üzerinde bazik veya pozitif yüklü kalıntılara sahip bir iyon çifti kompleksi oluşturur, böylece yüklerini maskeler ve peptit hidrofobikliğini iyileştirir.

Şimdi, polar olmayan hidrofobik ligandlarla hareketsiz hale getirilmiş, gözenekli silika bazlı sabit faz içeren ters fazlı yüksek performanslı bir sıvı kromatografisi veya RP-HPLC kolonu monte edin. Numune uygulamasından önce sabit fazı hazırlamak için kolona peptit uyumlu bir dengeleme tamponu ekleyin.

Şimdi, asitlenmiş numuneyi kolona yükleyin. Kolon içinde, hidrofobik peptitler, sabit fazın hidrofobik ligandlarına seçici olarak adsorbe olur. Bağlanmamış veya istenmeyen parçacıkları uzaklaştırmak için kolon boyunca bir yıkama tamponu çalıştırın.

Daha sonra, kolondan yüksek hidrofobikliğe sahip daha az polar bir organik elüsyon tamponu geçirin. Elüsyon tamponuna karşı seçici afiniteleri nedeniyle, bağlı peptitler kolon matrisinden desorbe olur.

Peptit içeren elüatı kolondan topl