JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 4:50 dk. • April 30th, 2023
Tirozin gibi spesifik amino asit kalıntılarının fosforilasyonu, çeşitli hücresel sinyal yollarının düzenlenmesinde kritik rol oynayan fosfopeptitler üretir. Bunları incelemek, kanser tedavisi için potansiyel biyobelirteçlerin tanımlanmasına izin verir.
Fosfopeptitleri izole etmek için, kanser dokusundan ekstrakte edilen liyofilize edilmiş saflaştırılmış peptit sintileri tozu ile başlayın. Düzgün bir peptit süspansiyonu hazırlamak için tozu uygun bir tampon içinde yeniden süspanse edin. Peptit stabilitesini sağlamak için nötr bir pH koruyun.
İstenen tamponda spesifik anti-fosfopeptit antikorlarına konjuge hidrojel boncuklardan oluşan bir bulamaç hazırlayın. Boncuk bulamacını peptit süspansiyonuna ekleyin. Boncuklar üzerinde hareketsiz hale getirilen antikorlar, fosfopeptitler içindeki spesifik fosforile amino asit kalıntılarını tanır ve bunlara bağlanarak kompleksler oluşturur.
Peletteki fosfopeptit-boncuk komplekslerini toplamak için karışımı santrifüjleyin. Bağlanmamış peptitler veya spesifik olmayan fosfopeptitler içeren süpernatanı çıkarın. Komplekslere uygun bir düşük pH elüsyon tamponu ekleyin ve inkübe edin. Düşük pH, fosfopeptit kalıntıları ile antikor-boncuk kompleksleri ar
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin