Fosfopeptitlerin Titanyum Dioksit Bazlı Zenginleştirilmesi: Peptit Kütüphanesinden Fosfopeptitlerin Seçici İzolasyonu İçin Bir Yöntem

Fosfopeptitler, fosforile edilmiş serin, treonin veya tirozin kalıntıları içeren kısa amino asit dizileridir. Fosfopeptitleri bir peptit karışımından izole etmek için, bir tüpte titanyum dioksit boncukları alarak başlayın. Bir su verme maddesi içeren uygun bir asitleştirilmiş bağlayıcı tampon kullanarak boncukları koşullandırmak için dengeleyin. İstenilen konsantrasyonda peptit karışımını boncuk bulamacına ekleyin.

Boncukların çökmesini önlemek için karışımı sürekli çalkalayarak inkübe edin. Asidik durum, titanyum boncuklarla koordinat bağları oluşturmak için fosfopeptitlerin fosfat grubunu teşvik eder. Tampondaki su verme maddesi, fosforile edilmemiş peptitlerin boncuklara spesifik olmayan bağlanmasını azaltır ve bunları süspansiyon içinde bırakır.

Fosforile edilmemiş peptitler süpernatantta kalırken, fosfopeptide bağlı boncukları peletlemek için santrifüjleyin. Süpernatanı atın. Fosfopeptit bağlı boncukları önceden monte edilmiş bir spin filtre kolonuna aktarın. Bağlayıcı tamponu çıkarmak ve fosfopeptit konjuge boncukları yakalamak için santrifüjleyin.

Filtreyi temiz bir tüpe aktarın ve amonyak içeren bir çözelti ekleyin. Amonyak, süspansiyon bazini döndürür ve fosfopeptitlerin b