Fosfopeptitlerin Titanyum Dioksit Bazlı Zenginleştirilmesi: Peptit Kütüphanesinden Fosfopeptitlerin Seçici İzolasyonu İçin Bir Yöntem

0 views • 3:33 min • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Fosfopeptitler, fosforile edilmiş serin, treonin veya tirozin kalıntıları içeren kısa amino asit dizileridir. Fosfopeptitleri bir peptit karışımından izole etmek için, bir tüpte titanyum dioksit boncukları alarak başlayın. Bir su verme maddesi içeren uygun bir asitleştirilmiş bağlayıcı tampon kullanarak boncukları koşullandırmak için dengeleyin. İstenilen konsantrasyonda peptit karışımını boncuk bulamacına ekleyin.

Boncukların çökmesini önlemek için karışımı sürekli çalkalayarak inkübe edin. Asidik durum, titanyum boncuklarla koordinat bağları oluşturmak için fosfopeptitlerin fosfat grubunu teşvik eder. Tampondaki su verme maddesi, fosforile edilmemiş peptitlerin boncuklara spesifik olmayan bağlanmasını azaltır ve bunları süspansiyon içinde bırakır.

Fosforile edilmemiş peptitler süpernatantta kalırken, fosfopeptide bağlı boncukları peletlemek için santrifüjleyin. Süpernatanı atın. Fosfopeptit bağlı boncukları önceden monte edilmiş bir spin filtre kolonuna aktarın. Bağlayıcı tamponu çıkarmak ve fosfopeptit konjuge boncukları yakalamak için santrifüjleyin.

Filtreyi temiz bir tüpe aktarın ve amonyak içeren bir çözelti ekleyin. Amonyak, süspansiyon bazini döndürür ve fosfopeptitlerin boncuklardan ayrılmasına neden olur. Bağlanmamış fosfopeptitleri elüte etmek ve toplamak için düzeneği santrifüjleyin. Titanyum dioksit boncukları filtre kartuşunda kalır. Amonyak kalıntılarını gidermek için fosfopeptitleri kurutun.

Titanyum dioksiti 500 mikrolitre% 100 ACN ile iki kez ön koşullandırın. Ardından, titanyum dioksiti 500 mikrolitre 0.2 M sodyum fosfat tamponu, pH 7 ile iki kez şartlandırın. Son olarak, boncukları üç kez yıkamak için 300 mikrolitre dengeleme tamponu kullanın. Düşük protein bağlayıcı tüpe 400 mikrolitre% 50 ACN,% 0.1 TFA ekleyin. Ardından 84 mikrolitre laktik asit ekleyin.

Yeniden süspanse edilmiş fosfopeptitleri düşük protein bağlayıcı tüpe aktarın ve 1 saat boyunca uçtan uca bir döndürücü kullanarak oda sıcaklığında inkübe edin. Boncukları peletledikten sonra, iki kez yıkamak ve döndürmek için 300 mikrolitre dengeleme tamponu kullanın. 300 mikrolitre durulama tamponu ile boncukları iki kez durulayın. Ardından, bunları 0,2 mikrometrelik bir döndürme filtresine aktarın.

Döndürdükten sonra, filtre ünitesini temiz 1,5 mililitrelik düşük protein bağlayıcı bir tüpe aktarın ve 200 mikrolitre% 0,9 amonyum su ile içeriği iki kez elüte edin. PH'ı kontrol ettikten sonra, amonyağı buharlaştırmak için elüatı gece boyunca kuruyana kadar vakumla konsantre edin.

10:27

Phosphopeptides Gelişmiş Zenginleştirme için Makrogözenekli Polimer Monoliths üzerinde yüksek Gözenekli Koordinasyon Polymer Coatings Hazırlanması

Related Videos

0 Views

08:01

Av tüfeği Proteomics derinlemesine Karakterizasyonu için LERLIC-MS / MS ve Glutamin ölçümü ve Asparajin deamidasyonu

Related Videos

0 Views

05:47

Arabidopsis'te Osmotik Stres Sinyali Profili Çıkarmak için Fosfoproteomik Strateji

Related Videos

0 Views

06:09

Proteinler Peptid immunoaffiniti Zenginleştirme kullanarak Niceleme Kütle Spektrometresi ile birleştiğinde

Related Videos

0 Views

03:21

Peptit Saflaştırma: Sindirilmiş Protein Lizatlarından Peptitleri Çıkarmak için RP-HPLC Tabanlı Bir Teknik

Related Videos

0 Views

04:50

Fosfopeptit Zenginleştirme: Spesifik Fosforile Peptitleri Kompleks Peptit Karışımlarından Ayırmak için Antikor Bazlı Bir İmmünopresipitasyon Tekniği

Related Videos

0 Views

09:30

Kemirgen Epididimal Spermatozoa'lar phosphopeptide Analizi

Related Videos

0 Views

12:23

Prostat kanserinde Phosphoproteome araştırmak için etiket içermeyen nicel kütle spektrometresi ile birleştiğinde Phosphopeptide zenginleştirme

Related Videos

0 Views

11:54

Peptit Zenginleştirme ve Kütle Spektrometresi ile Protein Ubiquitinasyon Sitelerinin Saptanması

Related Videos

0 Views

12:11

Niceleme ve Site Yerelleştirmesi Için İki Çeviri Sonrası Modifikasyonun Eşzamanlı Affinity Zenginleştirmesi

Related Videos

0 Views

Last updated: 18 July 2026