JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 2:43 dk. • April 30th, 2023
Formalinle sabitlenmiş parafin gömme veya FFPE tekniği, uzun süreli depolama için parafin blokları içinde sabit, susuz ve temizlenmiş doku örneklerinin korunmasına izin verir. FFPE, doku morfolojisinden ödün vermeden proteinleri ve diğer hayati hücre içi bileşenleri korur.
Deparafinizasyon veya gömülü dokuyu çevreleyen parafin mumunun çıkarılması, aşağı akış analizi için herhangi bir FFPE doku örneğini işlemeden önce kritik bir adımdır. Deparafinizasyona başlamak için, uygun bir kalınlığa sahip lekelenmemiş bir FFPE doku kesiti taşıyan bir cam slaytla başlayın.
Doku bölümünü bir ksilen banyosuna daldırın ve istenen süre boyunca inkübe edin. Organik bir çözücü olan ksilen, dokuya gömülü ve nüfuz etmiş olan parafin mumunu çözer. Parafin mumunun tamamen çıkarılması, sabit ve susuz kalmış şeffaf doku örneğini ortaya çıkarır.
Deparafinizasyonun ardından, numuneyi mutlak etanol ile muamele edin. Etanol, doku bölümündeki herhangi bir ksilen izini uzaklaştırır ve uzaklaştırır. Daha sonra, dokuyu azalan etanol konsantrasyonlarına daldırın. İşlem, aşağı akış histolojik analizi için dokuyu yeniden sulandırır.
Son olarak, slaydı istediğiniz süre boyunca rahatsız edilmeden bırakın. Bu adım, etanol ve suyun buharlaşmasına ve kuru, yeniden sulandırılmış bir doku kesiti elde etmesine izin verir.
Başlamak için, 10 mikrometre lekelenmemiş formalinle sabitlenmiş parafine gömülü bölümler hazırlayın. Slaytları bir cam sürgü tutucuya yerleştirin ve slayttaki tüm dokunun suya batırıldığından emin olarak ksilen ile doldurun. Slaytları 15 dakika ksilen içinde bırakın. Ardından, slaytları düşmemeleri için bir pipet ucuyla tutarken ksileni dökün. Daha önce olduğu gibi aynı seviyeye daha fazla ksilen dökün ve inkübasyonu tekrarlayın.
Ksileni dökün ve sürgü tutucuyu %100 etanol ile doldurun, sürgü üzerindeki tüm dokunun tamamen suya batırıldığından emin olun. Slaytları etanolde 3 dakika bekletin. Ardından, etanolü taze etanol ile değiştirin ve iki dakika daha inkübe etmelerine izin verin. Etanolü dökün ve slaytları çıkarın. Temiz bir kağıt havluya yüzleri yukarı bakacak şekilde dikkatlice yerleştirin ve 10 dakika kurumaya bırakın.