JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 2:31 dk. • April 30th, 2023
Makrodiseksiyona başlamak için, bir doku örneği taşıyan bir cam slayt alın. Ek olarak, aynı doku örneğini taşıyan bir referans lamı alın ve H & E boyası için hematoksilen ve eozin kullanarak boyayın.
Normal hücrelerde hematoksilen nükleik asitlere mavi bir leke verirken, eozin karşı lekesi hücresel proteinleri pembe gösterir. Çekirdeğin koyu mavi rengi, kanser hücrelerini normal hücrelerden ayırt etmeye yardımcı olur.
Doku örneklerini hizalamak için H&E lekeli slaytı lekesiz slaytla kaplayın. H & E lekeli slaytta tümör hücrelerini içeren kısmı bulun. Lekesiz slaytta ilgili alanı işaretleyin.
İstenilen dokuyu lekelenmemiş slayttan kazıyın. Islak bir pipet ucu kullanarak, doku örneğinin kolay bir şekilde aktarılmasını sağlamak için kazınmış dokuyu toplayın. Dokuyu bir lizis tamponu içeren bir tüpe aktarın. Lizis tamponunun bileşenleri dokuyu sindirir ve hücrenin bileşenlerini serbest bırakır.
Lizatı uygun bir proteaz ile muamele edin ve yüksek bir sıcaklıkta inkübe edin. Proteaz, kirletici DNazları parçalar, böylece DNA'yı bozulmaya karşı korur. Aşağı akış analizi için doku lizatı içeren DNA'yı saklayın.
Makrodiseksiyon için en uygun tümör bölgesinin kanser dokularını uygun H&E boyalı bölüme göre tanımlayın. Ardından, işaretli bölüme göre kanser dokusunu makrodiseksiyon yapın. Temiz bir tıraş bıçağı alın ve kanser dokusunu slayttan nazikçe kazıyın, tek parça halinde tutmaya çalışın. Kazınmış dokuyu lizis tampon şişesine aktarmak için pipet ucunu kullanın.
Bu işlemi slaytların geri kalanıyla tekrarlayın. Tüm doku tüpe girdikten sonra, dokunun tamamen suya batırıldığından ve duvara yapışmadığından emin olmak için ucu kullanın. Şişeye 20 mikrolitre subtilisin ile ilişkili serin proteaz ekleyin ve karıştırmak için hafifçe vurun. Şişeyi en az 4 saat veya gece boyunca 55 santigrat derecelik bir ısı bloğuna yerleştirin ve 2 saat sonra hafifçe girdap yaptığınızdan emin olun.