Alt Kültürleme ve Nakliye için Sferoidlerin Bölünmesi: İnce Bağırsak Nöroendokrin Tümöründen Sferoidlerin Çoğaltılması ve Aktarılması İçin Bir Prosedür

Sferoidler, üç boyutlu küresel yapılar oluşturmak için kendi kendine bir araya getirilmiş hücrelerin in vitro kültürleridir. Tümör sferoidlerini çoğaltmak için, bir kültür plakasında bulunan uygun bir hücre dışı matris veya ECM içinde kültürlenmiş sferoidlerle başlayın.

ECM'yi mekanik olarak kırmak ve sferoidleri gevşetmek için bir mikropipet kullanarak eziyet edin. Sferoid-ECM karışımını bir mikrosantrifüj tüpüne aktarın.

Sferoidleri peletlemek ve bunları süpernatanttaki ECM'den ayırmak için düşük hızda santrifüjleyin. Kullanılmış ECM içeren süpernatanı atın. Sonraki adımlarda ECM'nin katılaşmasını önlemek için küresel peleti içeren tüpü buz üzerine aktarın.

Peleti taze sıvılaştırılmış ECM ile destekleyin. Alt kültürleme için, sferoid hücreleri ayırmak ve süspansiyona bırakmak için içeriği tekrar tekrar yukarı ve aşağı pipetleyerek karıştırın.

Sferoid oluşturan hücreler ve ECM içeren bu karışımı taze bir kültür kabına tohumlayın. ECM katılaşarak tümör hücrelerinin sıkışmasını sağlar. İstenilen büyüme ortamını ekleyin. Sıkışmış hücrelerin yeni sferoidlere büyümesini kolaylaştırmak için kuluçkaya yatırın.

Nakliye amacıyla, sferoid-ECM karışımını bir kültür şişesine aktarın. ECM'nin