Nötrofil hücre dışı tuzakların veya NET'lerin floresan mikroskobu: kanser hücreleri ve NET'ler arasındaki yapışkan etkileşimi gözlemlemek için bir teknik

0 görüntüleme3:15 dk • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kanser gibi patolojik koşullar altında, aktive edilmiş nötrofiller, dolaşımdaki kanser hücrelerini yakalayan nötrofil hücre dışı tuzakları veya NET'leri (ilişkili enzimler ve antimikrobiyal proteinlerle birlikte bir hücre dışı DNA ağı) serbest bırakır.

NET'ler ve tümör hücreleri arasındaki yapışkan etkileşimi in vitro olarak görselleştirmek için, bir nötrofil alt tipi olan düşük yoğunluklu nötrofilleri, hücre bağlanmasını destekleyen polimer kaplı bir kültür kabında kültürleyerek başlayın. Nötrofilleri ağ benzeri NET'ler oluşturmak üzere uyarmak için birkaç saat inkübe edin.

Nötrofil kültürüne kırmızı floresein etiketli kanser hücrelerinin bir süspansiyonunu ekleyin. Kanser hücresi-NET etkileşimini kolaylaştırmak için kanser hücrelerini kısa bir süre için NET'lerle inkübe edin. NET-DNA, kanser hücrelerini çeken ve NET'lere yapışmalarını destekleyen kemotaktik bir faktör olarak işlev görür.

Harcanan ortamı çıkarın. Bağlanmamış tümör hücrelerini kültür kuyucuğundan çıkarmak için kültürü uygun bir taze ortamla nazikçe yıkayın.

Şimdi, hücre dışı NET'leri seçici olarak renklendirmek için zar geçirimsiz bir yeşil floresan nükleer leke ekleyin. Kültürü bir floresan mikroskobu altında gözlemleyin. Nötrofil hücre dışı tuzaklar, kırmızı tümör hücrelerinin bağlandığı bir ağ oluşturan yeşil sicim benzeri yapılar olarak görünür.

İzole edilmiş düşük yoğunluklu nötrofilleri, FBS konsantrasyonu ile desteklenmiş RPMI 1640 ortamının mililitresi başına 5 kez 10 ila altıncı hücrede yeniden süspanse edin ve 6 oyuklu poli-L-lizin kaplı bir plaka üzerinde oyuk başına 1 mililitre nötrofil tohumlayın. 37 santigrat derece ve% 5 karbondioksitte 2 saat sonra, her bir oyuktaki hücreleri, üreticinin talimatlarına göre uygun bir floresan membran geçirimsiz nükleer ve kromozomal boya ile boyayın ve hemen floresan mikroskobu ile NET'lerin morfolojisini gözlemleyin.

Tümör hücresinin NET'lere yapışmasını değerlendirmek için,% 0.1 sığır serum albümin konsantrasyonu ile desteklenmiş RPMI 1640'ın mililitresi başına 1 kez 10 ila altıda 1 kez zıt bir floresan boya ile boyanmış mide tümörü hücrelerini yeniden askıya alın ve düşük yoğunluklu nötrofil kültürlerinin her bir oyuğuna 1 mililitre tümör hücresi ekleyin. 37 santigrat derecede 5 dakika sonra, süpernatanı her bir kuyucuktan çıkarın ve hücreleri, yıkama başına BSA ile desteklenmiş 2 mililitre önceden ısıtılmış RPMI 1640 ortamı ile iki kez nazikçe yıkayın.

NET'e özgü bağlamayı algılamak için 5 dakikalık bir inkübasyon yeterlidir. Sıcak ortamı her bir kuyucuğun yanına yavaşça ekleyin, plakayı hafifçe döndürün ve süpernatanı bir aspiratör ile çıkarın.

NET'ler ve bağlı tümör hücreleri daha sonra floresan mikroskobu ile gözlemlenebilir.

12:42

İnsan nötrofil Akış odası Yapışma Deneyi

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:15

Anti-tümör özelliklere sahip izole edilmesi ve nötrofil Karakterizasyonu

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:19

Anjiogenik potansiyelinin In vivo çalışması için Işlenmiş tümör ilişkili Nötroflelerin tümör taşıyan fareler içine aktarılması

İlgili videolar

0 Görüntüler

14:17

Nötrofil Ekstrasellüler Tuzaklar: Onları nasıl oluşturun ve görselleştirin için

İlgili videolar

0 Görüntüler

03:05

Nötrofil Hücre Dışı Tuzakların veya NET'lerin Hızlandırılmış Floresan Mikroskobu: Kanser Hücreleri ve NET'ler Arasındaki Yapışma Sonrası Etkileşimi Analiz Etmek İçin Bir Teknik

İlgili videolar

0 Görüntüler

04:32

Önceden Etiketlenmiş Nötrofillerde Nötrofil Hücre Dışı Tuzakların İndüksiyonu ve Görselleştirilmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

04:25

Kanser Hücrelerinin Nötrofil Hücre Dışı Tuzaklara Yapışmasını Tespit Etmek için İn Vitro Yapışma Testi

İlgili videolar

0 Görüntüler

09:43

Basitleştirilmiş İnsan Nötrofil Ekstrasellüler Tuzaklar (NET) İzolasyon ve Taşıma

İlgili videolar

0 Görüntüler

09:14

Makrofaj hücre dışı tuzaklar Confocal mikroskobu kullanılarak görüntülenmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:59

Düşük yoğunluklu nötrofil tarafından oluşturulan nötrofil hücre dışı tuzakları Peritoneal lavaj sıvı aracılık tümör hücre büyümesini ve eki elde

İlgili videolar

0 Görüntüler

Son güncelleme: 22 Ağustos 2026