Nötrofil hücre dışı tuzakların veya NET'lerin floresan mikroskobu: kanser hücreleri ve NET'ler arasındaki yapışkan etkileşimi gözlemlemek için bir teknik

Kanser gibi patolojik koşullar altında, aktive edilmiş nötrofiller, dolaşımdaki kanser hücrelerini yakalayan nötrofil hücre dışı tuzakları veya NET'leri (ilişkili enzimler ve antimikrobiyal proteinlerle birlikte bir hücre dışı DNA ağı) serbest bırakır.

NET'ler ve tümör hücreleri arasındaki yapışkan etkileşimi in vitro olarak görselleştirmek için, bir nötrofil alt tipi olan düşük yoğunluklu nötrofilleri, hücre bağlanmasını destekleyen polimer kaplı bir kültür kabında kültürleyerek başlayın. Nötrofilleri ağ benzeri NET'ler oluşturmak üzere uyarmak için birkaç saat inkübe edin.

Nötrofil kültürüne kırmızı floresein etiketli kanser hücrelerinin bir süspansiyonunu ekleyin. Kanser hücresi-NET etkileşimini kolaylaştırmak için kanser hücrelerini kısa bir süre için NET'lerle inkübe edin. NET-DNA, kanser hücrelerini çeken ve NET'lere yapışmalarını destekleyen kemotaktik bir faktör olarak işlev görür.

Harcanan ortamı çıkarın. Bağlanmamış tümör hücrelerini kültür kuyucuğundan çıkarmak için kültürü uygun bir taze ortamla nazikçe yıkayın.

Şimdi, hücre dışı NET'leri seçici olarak renklendirmek için zar geçirimsiz bir yeşil floresan nükleer leke ekleyin. Kültürü bir floresan mikroskobu altında gözl