Eksozom Blok Hazırlığı: Kültürlenmiş İnsan Kolon Kanseri Hücrelerinden Eksozomları Korumak İçin Bir Protokol

Eksozomlar, kültürlenmiş hücreler tarafından süpernatanın içine salgılanan hücre dışı veziküler yapılardır. Bir eksozom bloğu hazırlamak için, bir tüpte eksozom içeren bir kültür süpernatanı alarak başlayın. Sağlam eksozomları peletlemek için tüpü yüksek hızda santrifüjleyin. Kalan süpernatanı atın.

Eksozom peletini sabitleme tamponunda bulunan glutaraldehit ile işlemden geçirin. Eksozomların morfolojisini korumak için karışımı istenen süre boyunca buz üzerinde inkübe edin. Gluteraldehit eksozomlara sızar ve proteinleri çapraz bağlar. Sabitleme tamponu, aşağı akış fiksasyon işlemi için eksozomları nötr pH'da tutar.

Glutaraldehit içeren tamponu atın ve membran çift tabakasını geçirgen hale getiren ve eksozomlarda bulunan lipitleri sabitleyen ikincil bir fiksatif olan osmiyum tetroksit çözeltisi ekleyin. Osmiyum tetroksit çözeltisini çıkarın ve eksozomları bir dizi artan aseton konsantrasyonu ile muamele edin. Bu işlem eksozomları kurutur.

Mutlak asetonu, gömme orta-aseton karışımıyla değiştirin. Yavaş yavaş, bu karışımdaki gömme ortamının oranını arttırın.

Eksozom içeren gömme karışımını istenen kalıplara dökün. Kalıpları yüksek sıcaklıkta fırında kurutun. Bu, eksozomların etrafında