Ekzozomal Kesitlerin Altın İmmün Boyama: Ekzozomal Lümendeki Tanısal Belirteçleri Görselleştirmek İçin Bir Teknik

Eksozomlar, kanser biyobelirteçleri olarak hizmet eden çeşitli biyomolekülleri çevreleyen küçük hücre dışı veziküllerdir.

Ekzozomal biyobelirteçleri görselleştirmek için, uygun elektron mikroskobu metal ızgaraları üzerinde desteklenen ultra ince reçine gömülü ekzozomal kesitlerle başlayın. Izgaraları glisin damlalarında inkübe edin. Glisin, tahlil ile etkileşimlerinin üstesinden gelmek için bölümlerdeki reaktif aldehit gruplarını bağlar ve nötralize eder.

Artık reaktifleri çıkarmak için numuneyi suyla durulayın. Daha sonra, numuneyi bir bloke edici tamponda inkübe edin. Tampon, numunedeki spesifik olmayan antikor bağlanma bölgelerini bloke eden serum proteinlerini taşır.

Daha sonra, numuneyi istenen birincil antikor çözeltisi içinde inkübe edin. Bu antikorlar, ekzozomal lümende lokalize olan hedef biyobelirteçlerini tanır ve bunlara bağlanır. Bağlanmamış antikorları uygun bir tamponla yıkayın.

Şimdi, numune taşıyan ızgaraları, birincil antikorlara bağlanan altın konjuge ikincil antikorlar içeren damlalara aktarın. Altın-nanopartiküller, hedef moleküllerin ince lokalizasyonunu görselleştirmek için elektron yoğun belirteçler olarak hizmet eder. Bağlanmamış ikincil antikorları uygun b