Saflaştırılmış Eksozomların Negatif Boyanması: Transmisyon Elektron Mikroskobu Kullanılarak Eksozom Morfolojisini Görselleştirmek İçin Bir Prosedür

Eksozomların negatif boyanmasını gerçekleştirmek için - nano boyutlu, küresel veziküller - uygun bir elektron mikroskobu ızgarası alarak başlayın. Bir kızdırma deşarjı kullanarak ızgarayı hazırlayın. Bu işlem, numunelerin daha iyi yapışması için ızgara yüzeyini hidrofilik hale getirir.

Aynı anda, bir tüpte saflaştırılmış eksozomların bir süspansiyonunu alın. Tüpü paraformaldehit ile destekleyin - bir numune sabitleyici - ve inkübe edin. Paraformaldehit, eksozomlara nüfuz eder ve proteinleri ve nükleik asitleri çapraz bağlar. Bu adım, eksozomların morfolojisini korumak için hayati önem taşır.

Şimdi, eksozom süspansiyonunu önceden hazırlanmış ızgaraya yükleyin ve adsorpsiyonun gerçekleşmesine izin vermek için inkübe edin. Ardından, ızgaranın üzerine ağır bir metal lekesi olan birkaç damla uranil asetat ekleyin. Uranil iyonları, zar proteinlerine ve lipitlere bağlanarak eksozom sınırı etrafında bir tortu oluşturur.

Son olarak, fazla lekeyi çıkarmak için ızgarayı suyla yıkayın. İletim Elektron Mikroskobu veya TEM kullanarak ızgaranın kurumasına ve görüntülenmesine izin verin.

Bir elektron ışını eksozomlara çarptığında, numuneyi çevreleyen leke daha fazla elektron saçar. Eksozomlar daha