Kesit için kas dokusunun hızlı dondurulması: hızla donmuş murin kas dokusunun ultra ince kesitlerini elde etmek için bir protokol

Ani dondurma, doku örneklerinin hızla ultra soğuk sıcaklıklara dondurulduğu bir tekniktir. Doku içindeki DNA, RNA ve proteinlerin doğal yapısını korumaya yardımcı olur.

Uzuv kasını dondurmak için, bir farenin arka ayağından yeni çıkarılmış kas dokusunu alarak başlayın.

Daha sonra, bir strafor kutuya sıvı nitrojen alın ve oldukça iletken bir sıvı olan izopentan içeren bir kabı sıvı nitrojene daldırın.

Çözelti viskoz hale gelene kadar izopentanı dondurun. Aynı anda, bir mantar parçasının üzerine bir damla sıvı dondurma ortamı uygulayın.

Arka bacak kas dokusunu tendonunu tutarak konumlandırın ve doku parçasını sıvı dondurma ortamına dikey olarak gömün. Bu oryantasyon, kasın enine kesit alanının daha sonra belirlenmesine yardımcı olur.

Mantar parçasını bağlı kas dokusuyla birlikte önceden soğutulmuş izopentan banyosuna kısa bir süre daldırın. Bu, kas dokusunun hızlı ve eşit şekilde donmasına yardımcı olur.

Donma ortamı düşük sıcaklıkta katılaşır ve kas dokusunun etrafında jelatinimsi bir tabaka oluşturarak onu yerinde tutar. İnce dilimlenmiş bölümler elde etmek için kas bloğunu bir kriyo-mikrotom içine yerleştirin.

Kesitleri cam slaytlara yerleştirin ve daha fazla histolojik analiz içi