Lamina Propria Mononükleer Hücre İzolasyonu: Murin Kolonundan Mononükleer Hücreler Elde Etmek İçin Silika Bazlı Yoğunluk Gradyanlı Bir Santrifüj Tekniği

Bağırsak epitelinin altında bulunan bağırsak lamina propriası, fibroblastlar, lenfositler ve monositler dahil olmak üzere mononükleer hücreler gibi çeşitli hücre dizilerini içeren yoğun bir kollajen lifleri ağı ile birlikte gevşek bağ dokusundan oluşur. Bu hücreler homeostazın korunmasında çok önemli bir rol oynar.

Mononükleer hücreleri izole etmek için, fare kolon parçalarını alarak başlayın. Fragmanlara kollajenaz enzimleri içeren bir sindirim tamponu uygulayın. Kollajenaz enzimleri, doku içindeki kollajen liflerini sindirerek hücreleri süspansiyona bırakır.

Süpernatanı toplayın ve sindirilmemiş doku ve kalıntıları gidermek ve tek hücreli bir süspansiyon elde etmek için hücre süzgeçlerinden süzün. Kollajenaz enzimlerini etkisiz hale getirmek için süzüntüye soğutulmuş bir tampon ekleyin.

Hücreleri ayırmak için santrifüjleyin. Enzimleri içeren süpernatanı atın ve hücre peletini düşük yoğunluklu silika bazlı bir ayırma ortamında yeniden süspanse edin. Ardından, bir ayırma gradyanı oluşturmak için süspansiyonu yüksek yoğunluklu silika bazlı bir ayırma ortamının üzerine katmanlayın.

Karışımı santrifüjleyin. Mononükleer hücreler çökelir ve yoğunluk gradyan katmanları arasındaki arayüzd