Tavuk CAM'den Metastatik Kanser Hücresi Koloni İzolasyonu: Kabuksuz Yumurta Kültürlerinden Kanser Hücrelerini İzole Etme Prosedürü

Tavuk koryoallantoik zarı veya CAM, yumurta kabuğunun hemen altında bulunan üç katmanlı bir zardır. Bir dış ektoderm, oldukça vasküler bir mezoderm ve en içteki endodermden oluşur.

CAM mezodermi, kan damarları, fibroblastlar ve stromal bileşenlerden oluşur ve bu nedenle tümör hücresi kolonizasyonu için uygun bir ortam sağlar.

Kolonize kanser hücrelerini CAM'den izole etmek için, bir tabakta floresan etiketli kanser hücreleri ile önceden enjekte edilmiş kabuksuz bir yumurta kültürü alarak başlayın. Yumurta kültürünü bir floresan mikroskobu altında görselleştirin. Floresan ve kompakt metastatik kanser kolonilerini bulun.

İlgilenilen metastatik kolonileri içeren CAM dokusunu nazikçe eksize edin. Eksize edilen CAM dokusunu bir mikrosantrifüj tüpüne aktarın. CAM'ı sonraki adımlarda enzimatik tedavi için erişilebilir hale getirmek için dokuyu küçük parçalar halinde kıyın.

Tüpü kollajenaz enzimi ile destekleyin ve inkübe edin. Kollajenaz, CAM mezodermindeki kollajen proteinini bozar ve kanser kolonisi ayrışmasını başlatır. Kanser hücrelerini, CAM dokusunun kalıntılarını ve CAM fibroblastlarını peletlemek için süspansiyonu santrifüjleyin. Kollajenaz içeren süpernatanı atın.

Seçici bir büyü