JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 2:36 dk. • April 30th, 2023
Ortotopik intramukozal inokülasyon sırasında, mukozal doku histotipine uyan tümör hücreleri, bir alıcı hayvanın mukozal dokusuna iletilir.
Başlamak için, anestezi uygulanmış bir fareyi ağzına daha kolay erişim için cerrahi bir platformda boynundan tutun.
Bir şırınga içinde soğutulmuş bir bazal membran matrisinde yüksek derecede metastaz yapan kanser hücrelerinin bir süspansiyonunu hazırlayın. Düşük sıcaklık, süspansiyonun katılaşmasını önler.
Bu süspansiyonu farenin iç yanağına veya bukkal bölgesine dikkatlice enjekte edin. Bukkal bölge, bir kan ve lenfatik damar ağı ile çevrili bukkal mukoza ile kaplıdır.
Kanser hücresi süspansiyonunun tam olarak verildiğinden emin olun ve iğneyi nazikçe geri çekin. Matrisin katılaşmasına ve hücreleri içine gömmesine izin verin.
Farenin iyileşmesine izin verin. Enjeksiyondan birkaç gün sonra, enjeksiyon bölgesinde birincil bir tümör gelişir. Sonunda, yüksek metastatik potansiyele sahip bu tümörden gelen hücreler lenfatik sistemden geçebilir ve lenf düğümlerine ekstravaze olabilir.
Bu kanser hücreleri yeni mikro çevrelerine adapte olurlar ve çoğalırlar ve lenf düğümlerinde metastatik koloniler oluştururlar.
Enjeksiyondan hemen önce, hücreleri buz üzerinde 1'e 1 tümör hücresi süspansiyonu ile bazal membran matris oranında karıştırın. Alıcı hayvan başına 100 mikrolitre hücre içeren 23G iğne ile donatılmış 0,5 mililitrelik bir şırınga yükleyin. Şırıngaları buzun üzerine yerleştirin ve anestezi uygulanmış bir farede ayak parmağının sıkışmasına yanıt verilmediğini onaylayın.
Daha sonra, iğneyi ağzın her iki tarafındaki mevcut açık alandan sağ veya sol bukkal bölgeye sokun, şırıngayı ağız boşluğunun içindeyken bukkal bölgeye paralel tutarak, tam 100 mikrolitre hacminin enjeksiyonunu kolaylaştırmak için hücre bazal membran matris süspansiyonunun 5 saniyelik bir süre boyunca. Şırıngayı nazikçe çekmeden önce tüm malzemenin enjekte edildiğinden emin olmak için şırıngayı 5 saniye daha yerinde tutun. Tümörler yaklaşık bir hafta içinde büyük ölçüde görünür hale gelecektir.