RNA CISH için FFPE Doku Ön Tedavisi: RNA Kromojenik In Situ Hibridizasyon için Formalinle Sabitlenmiş Parafine Gömülü Doku Kesitlerini İşleme Prosedürü

Formalinle sabitlenmiş parafine gömülü veya FFPE doku kesitlerinin ön işlemi, nükleik asitlerin maruz kalmasını kolaylaştırır ve müteakip in situ hibridizasyon sırasında etiketli probların hedef diziye bağlanmasını sağlar. Ek olarak, ön işlem, hücreler içindeki nükleik asitlerin bütünlüğünün ve genel doku morfolojisinin korunmasına yardımcı olur.

Başlamak için, ilgilenilen deparafinleştirilmiş ve rehidre edilmiş bir FFPE doku bölümünü taşıyan bir cam slayt alın. Dokuyu uygun bir hidrojen peroksit konsantrasyonu ile tedavi edin ve inkübe edin.

Hidrojen peroksit, hücrelerde fizyolojik olarak bulunan endojen peroksidazı geri dönüşümsüz olarak inaktive eder. Bu engelleme işlemi, sonraki hibridizasyon adımları sırasında spesifik olmayan arka plan sinyallerinin olasılığını ortadan kaldırır.

Daha sonra, doku bölümünü uygun bir antijen alma tamponu içeren ısıtılmış bir banyoya daldırın. İstenilen süre boyunca kuluçkaya yatırın. Yüksek sıcaklık, proteinlerde ve nükleik asitlerde fiksatif kaynaklı kimyasal çapraz bağları parçalar ve maskelenmemiş epitopları sonraki etiketleme sırasında problara maruz bırakır.

Son olarak, numuneyi uygun bir proteaz çözeltisi ile muamele edin. Nem kontrollü bi