RNA In Situ Hibridizasyonda Prob Hibridizasyonu ve Sinyal Amplifikasyonu: Doku Kesitlerinde Spesifik RNA Dizilerini Tespit Etmek İçin Bir Teknik

Bir hücredeki belirli bir RNA dizisini tespit etmek için, bir cam slayt üzerinde bir doku kesiti alarak başlayın. Doku bölümünü, hedef RNA problarını içeren uygun bir hibridizasyon tamponu ile kaplayın.

Bu problar, bir ucunda hedef tanıma kısmı ve diğer ucunda bir kuyruk dizisi olan Z şeklindeki RNA molekülleridir. Bir ara kol bu iki ucu birbirine bağlar.

Şimdi, slaydı bir hibridizasyon fırınında optimum sıcaklıkta inkübe edin. Z şeklindeki RNA probları hücreye girer ve çiftler halinde karşılık gelen hedef mRNA dizisi ile hibritleşir.

Slaytı fırından çıkarın. Bağlanmamış probları ve fazla hibridizasyon tamponunu çıkarmak için sürgüyü bir yıkama solüsyonuna daldırın.

Daha sonra, bir ön amplifikatör çözeltisi ekleyin ve inkübe edin. Ön amplifikatör molekülü, iki bitişik Z probunun kuyruk dizisine bağlanır. Bu molekül tek bir Z probuna bağlanmaz ve özgüllüğü sağlar.

Ardından, amplifikatör reaktif karışımını ekleyin ve inkübe edin. Çoklu amplifikatör molekülleri, tek ön amplifikatör dizisine hibritleşir.

Son olarak, hücrede belirli bir RNA dizisinin varlığını tespit etmek için doku bölümünü istenen etiketleme probları ile etiketleyin.

Hibridizasyonu başlatmak için, fazla sıvıyı çıkarma