JoVE Encyclopedia of Experiments
Kanser Araştırmaları
0 görüntüleme • 2:24 dk • April 30th, 2023
Koryoallantoik membran veya CAM, sağlam bir yumurtanın iç kabuk zarına yakından yapışan ekstraembriyonik bir zardır. CAM, doğal olarak immün yetmezliği olan ve yüksek derecede vaskülarize bir membran olması nedeniyle tümör implantasyonu ve modellemesi için ideal bir sistemdir.
Tümör taşıyan bir CAM'ı hasat etmek için, önce, daha önce bir tümör ile nakledilmiş tam gelişmiş bir CAM'a sahip canlı bir döllenmiş tavuk yumurtası alın. CAM'ye paraformaldehit ekleyin. Paraformaldehit, zar proteinlerini çapraz bağlayarak, hasadını kolaylaştırmak için zarı daha sert hale getirir.
Daha sonra, yumurta kabuğunun üst kısmını yumurtanın geri kalanından ayırmak için yumurtanın etrafını kesin, tümör taşıyan CAM hala çıkarılan kabuğa bağlıyken. Yumurta kabuğundan düzgün bir şekilde ayırmak için CAM'ı bir kenarından tutun ve kaldırın.
Daha sonra, hasat edilen CAM'ı tümör grefti yukarı bakacak şekilde paraformaldehit içine yerleştirin. Paraformaldehit, CAM ve tümör greftinin morfolojisini korur, böylece hasat edilen zarı çeşitli aşağı akış analizleri için hazırlar.
Kuluçka süresinin sonunda yumurtaları laboratuvar tezgahının üzerine yerleştirin. Her yumurtanın film pansumanını delmek için bir şırınga kullanın ve toplama işlemini kolaylaştırmak için dokuyu hafifçe sertleştirmek için her bir koryoallantoik zarın üzerine yaklaşık 300 mikrolitre% 4 paraformaldehit uygulayın.
Makas kullanarak, yumurta kabuğunun üst yarısını koryoallantoik zar takılı olarak çıkarın. Kabuğun boyutunu yaklaşık 3 santimetre çapa düşürün, dorsal kök ganglion ve tümör hücrelerinin kabuk parçasının merkezinde aşılandığı koryoallantoik zarın bir kısmını koruyun. Daha sonra, koryoallantoik zarı ince forseps ile kavrayın ve oyuk başına 2 mililitre% 4 paraformaldehit içeren 6 oyuklu bir plakanın bir oyuğuna transfer etmek için dokuyu yumurta kabuğundan ayırın.